活性氧对猪卵母细胞SUMO-1表达及其质量的影响

本研究旨在调查活性氧过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)对猪卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)过程中蛋白质类泛素SUMO-1表达及精-卵结合能力的影响。试验分为0(control)、10、50、75和100μg/mL H_2O_2处理组。利用Western blotting、流式细胞术、实时荧光定量PCR、Hoechst染色等方法检测猪卵母细胞体外成熟、蛋白质类泛素SUMO-1含量、细胞活力、凋亡基因mRNA表达、透明带(zona pellucid,ZP)溶解度和精子-卵母细胞结合的表达。结果表明,75μg/mL H_2O_2组与对照组、10和50μg/mL H_2O_2组比较卵母细胞体外成熟率及细胞活力显著降低;75μg/mL H_2O_2组与其他H_2O_2组相比ZP溶解时间显著延长,并减少了精子黏附在成熟卵母细胞透明带上的数量(P0.05)。在77和18 ku处出现SUMO-1蛋白标记,75μg/mL H_2O_2组与对照组、10和50μg/mL H_2O_2组比较SUMO-1蛋白含量显著降低(P0.05)。75μg/mL H_2O_2与对照组、10和50μg/mL H_2O_2组比较显著下调了Bcl-2基因,而Caspase-3基因表达与对照组和10μg/mL H_2O_2组比较显著升高(P0.05),50μg/mL H_2O_2与对照组和10μg/mL H_2O_2组相比显著上调了Bax基因水平(P0.05)。综上所述,H_2O_2能调控猪卵母细胞体外成熟过程中类泛素化水平以及精-卵结合能力。