多重实时荧光PCR检测禽网状内皮组织增生症病毒方法的建立以及初步应用 |
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引用本文: | 缪佶,鲍衍清,邵红霞,钱琨,秦爱建.多重实时荧光PCR检测禽网状内皮组织增生症病毒方法的建立以及初步应用[J].中国动物传染病学报,2015(1):1-8. |
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作者姓名: | 缪佶 鲍衍清 邵红霞 钱琨 秦爱建 |
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作者单位: | 教育部禽类预防医学省部共建重点实验室;扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室 |
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基金项目: | 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;江苏高校优势学科建设工程资助项目;国家科技基础性工作专项(2013FY113300-4) |
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摘 要: | 本文建立了一种快速、灵敏、特异性强的禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)检测方法,并对REV在鸡胚成纤维细胞(chick embryo fi broblast,CEF)上的增殖动态规律进行研究。分别针对gag、env以及LTR基因的保守序列设计3对引物,利用重组质粒作为模板,绘制3种不同基因的标准曲线。检测结果显示,本研究建立了多重实时荧光PCR检测方法,所制备的标准品模板在108~101copies范围内与Ct值之间呈现良好的线性关系,且最低检出量为101copies。REV感染CEF后gag、env、LTR基因的拷贝数均先减少后增多。通过实时荧光PCR技术与间接免疫荧光方法检测,发现REV在CEF上复制的初始阶段呈现病毒适应过程,此后病毒大量复制,表现出明显的增长趋势。该研究不仅为REV的诊断技术提供了一种新的方法,同时也为深入研究REV的感染机制和致病机理奠定了基础。
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关 键 词: | 禽网状内皮组织增生症病毒 鸡胚成纤维细胞 实时荧光PCR 复制 |
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