维氏气单胞菌TH0426株rpoN蛋白的生物学特性分析及原核表达

为了深入研究维氏气单胞菌毒力蛋白rpoN的功能,试验采用邻近法构建rpoN基因的系统进化树,对rpoN蛋白进行生物学特性分析,PCR法扩增rpoN基因,将其与表达载体pET-32a(+)连接,再将连接产物转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达和制备抗体,测定抗体效价并进行Western-blot检测。结果表明:rpoN蛋白稳定,属于胞内蛋白,是全α型蛋白。重组表达质粒pET-32a-rpoN在大肠杆菌中成功表达,在约58 ku处可见明亮条带,rpoN多克隆抗体效价为1∶279 000,具有特异性。说明表达的rpoN蛋白具有一定的免疫原性。