8型蓝舌病病毒NS3蛋白的原核表达及鉴定

为了获得可初步鉴别诊断疫苗免疫和自然感染的蓝舌病病毒(BTV)抗原,试验将8型BTV S10基因中NS3蛋白对应的开放阅读框(ORF)克隆到原核低温诱导表达载体pColdⅠ中,构建重组表达质粒pCold-NS3,然后转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,通过对IPTG浓度和诱导温度条件优化,确立重组蛋白NS3最佳表达条件,通过镍柱纯化后用Western-blot和间接ELISA鉴定其免疫活性。结果表明:成功构建了pCold-NS3重组质粒,重组菌株在温度为15℃、以1.0 mmol/L IPTG诱导24 h时重组NS3蛋白表达量最高,分子质量约为29 ku;纯化后的重组蛋白能与BTV自然感染阳性血清和His-tag单克隆抗体发生特异性结合。说明成功获得了具有良好反应原性的BTV重组NS3蛋白。