抗猪瘟病毒单链抗体的原核表达及活性鉴定

为了制备抗猪瘟病毒(CSFV)单链抗体(scFv)并鉴定其生物学活性,试验以编码特异性抗CSFV scFv基因序列为基础,按照大肠杆菌密码子偏爱性优化并合成scFv基因,将其克隆入pCzn1表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)PlysS感受态细胞,经IPTG诱导表达后进行Ni-IDA亲和层析纯化、SDS-PAGE检测和Western-blot鉴定,通过间接免疫荧光(IFA)和间接ELISA验证蛋白抗原的活性。结果表明:密码子优化合成的抗CSFV scFv基因全长768 bp,在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,其分子质量约28.0 ku,Western-blot检测显示纯化后的目的蛋白能被抗His标签单克隆抗体特异性识别,IFA和ELISA检测证实纯化复性后的蛋白可与CSFV发生特异性结合反应,且存在明显的浓度依赖性。说明应用原核表达系统可高效制备抗CSFV scFv。