黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因(bgl1)的克隆及其在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的表达 |
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作者姓名: | 黄妙容 阳建辉 刘德武 黄晓灵 蔡更元 吴珍芳 |
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作者单位: | 1. 华南农业大学动物科学学院,广州510642;肇庆大华农生物药品有限公司,广东省兽用生物制品技术研究与应用企业重点实验室,肇庆526238 2. 岳阳职业技术学院,岳阳,414000 3. 华南农业大学动物科学学院,广州,510642 4. 广东省农业科学院畜牧研究所,广州,510642 |
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基金项目: | 国家高技术研究发展计划(863)项目,广东省自热科学基金项目,国家科技重大专项 |
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摘 要: | β-葡萄糖苷酶是纤维素酶系三大成员之一,被认为是纤维素糖化的限速酶。本研究克隆黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因(bgl1),并在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中进行表达分析。以GenBank上黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因(bgl1)序列为模板,设计特异性引物,从黑曲霉(Asperjillus niger)基因组DNA中扩增目的片段,通过SOE-PCR的方法将猪腮腺分泌蛋白信号肽序列sp和bgl1相连,成功构建分泌型真核表达载体pc6-sp-bgl1,利用脂质体介导法瞬时转染哺乳动物CHO细胞,通过RT-PCR和Western blot检测,最后通过DNS(dinitrosalicylic acid)法测定表达产物酶学活性。PCR扩增得到的目的序列与文献报道序列的相似性为91%,预测的蛋白氨基酸序列相似性为99%。RT-PCR和Western blot检测证明,外源基因bgl1在CHO细胞中得到表达;分泌到细胞培养上清中的重组蛋白对水杨素的水解活性为1.74U/mL,说明重组蛋白具有β-葡萄糖苷酶活性。本研究克隆得到黑曲霉bgl1基因并在哺乳动物CHO细胞中进行表达,为β-葡萄糖苷酶在单胃动物中的利用提供了基础研究资料。
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关 键 词: | 黑曲霉 β-葡萄糖苷酶BGL1 克隆表达 CHO细胞 酶活测定 |
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