基于重组EP153R蛋白的检测非洲猪瘟病毒抗体的间接ELISA方法的建立

为探究非洲猪瘟病毒(ASFV)EP153R蛋白的功能和建立ASFV抗体间接ELISA方法，本试验构建了EP153R蛋白杆状病毒表达系统，采用Western blot与IFA鉴定rEP153R蛋白的表达和免疫原性。结果显示，杆状病毒能高效表达rEP153R蛋白且可被小鼠多克隆抗体识别，具有良好的免疫原性。以此重组蛋白为抗原进行间接ELISA方法的建立，经方阵ELISA确定当抗原包被量2.5 μg/mL，ASFV阳性血清稀释比1∶1000时为最佳反应条件；以优化后的条件确定了抗体阳性临界值为0.259；特异性试验结果表明，该方法仅与ASFV阳性血清发生反应，具有较强的特异性；重复性试验结果显示变异率小于10%，重复性良好。利用该方法对46份猪血清进行检测，与商品化试剂盒检测结果对比显示，符合率为91.3%，能较好的区分ASFV阴性血清与阳性血清。本研究的结果为后续EP153R功能研究和ASFV临床血清学诊断奠定了基础。