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4种改良CTAB法提取石榴成熟叶片DNA的比较研究
引用本文:谭小艳,马耀华,郝兆祥.4种改良CTAB法提取石榴成熟叶片DNA的比较研究[J].中国果业信息,2021,50(3).
作者姓名:谭小艳  马耀华  郝兆祥
作者单位:枣庄学院生命科学学院 山东枣庄,枣庄学院生命科学学院 山东枣庄,枣庄市石榴研究中心 山东枣庄
基金项目:山东省科技发展计划项目(2011GGA04012);国家林业公益性行业科研专项资助项目(201204402);国家林业局林木种苗工程资助项目([2012]888号);枣庄市科学技术发展计划项目(201233-2)。
摘    要:【目的】研究从成熟石榴叶片中提取高质量基因组DNA的方法。【方法】根据成熟石榴叶片组织中富含多酚、多糖的特点,以峄城中国石榴种质资源圃20种石榴成熟叶片为材料,分别采用改良CTAB法(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)4种方法提取成熟石榴基因组DNA,通过琼脂糖凝胶、紫外分光光度计分析、ISSR扩增等方法检测所提取DNA的质量。【结果】改良的CTAB Ⅳ法能从各个石榴品种的成熟叶片中提取出基因组DNA,琼脂糖电泳胶孔干净,无拖带,且DNA的纯度和完整性都较好,OD260 nm/OD280 nm的比值均在1.8~2.0之间,无降解现象,其质量、产量都高于其他改良CTAB法。经ISSR- PCR扩增结果表明,此方法提取的基因组总DNA完全适于ISSR分析。其主要的步骤是:在石榴叶片的研磨中添加Vc、PVP等抗氧化物质,加入CTAB提取液后65 ℃水浴30 min后冷却至室温,离心条件为15℃,10 000 r/min,10 min,DNA粗提液用氯仿抽提3次,可获得高质量的DNA。【结论】改良的CTAB Ⅳ法能有效地从石榴成熟叶片中提取到高质量的基因组DNA。

关 键 词:石榴  成熟叶片  改良CTAB法  基因组DNA  提取
收稿时间:2020/6/1 0:00:00
修稿时间:2020/12/22 0:00:00

Comparison and Application of Four Improved CTAB Extraction Methods from Mature Leaves of Pomegranate
MA Yao-hua and HAO zhao-xiang.Comparison and Application of Four Improved CTAB Extraction Methods from Mature Leaves of Pomegranate[J].China Fruit News,2021,50(3).
Authors:MA Yao-hua and HAO zhao-xiang
Abstract:
Keywords:Pomegranate (Punica granatum L  )  Mature leaves  The improved CTAB method  Genomic DNA  Extraction
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