| 摘 要： | 【目的】制备A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)VP2蛋白多克隆抗体，建立检测SVA抗体的间接ELISA方法，以期为SVA致病机制及诊断提供研究基础。【方法】利用同源重组技术将VP2基因克隆至原核表达载体pET-28a中，构建重组表达质粒pET-28a-VP2,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行IPTG诱导表达，表达产物经纯化后皮下多点注射新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用间接免疫荧光试验(IFA)、Western blotting和中和试验鉴定多克隆抗体的特异性、反应性和中和活性。以VP2为抗原包被酶标板，通过矩阵优化、临界值确定、特异性鉴定及敏感性和重复性分析建立检测SVA抗体的间接ELISA方法。采集50份临床血清样品，分别用间接ELISA与IFA方法进行检测，分析间接ELISA方法的符合率。【结果】重组VP2蛋白以包涵体形式表达，大小为40 ku。制备的多克隆抗体能与重组VP2蛋白和SVA特异性结合，与其他病毒无交叉反应，且具有较高的中和活性。经对间接ELISA条件的优化，确定VP2包被浓度为4μg/mL,阳性血清稀释浓度为1∶250,封闭液为5%脱脂...
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