| 团头鲂转录因子Oct4的原核表达和多克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 于淼,方健,李玲玉,潘启华,薛亭,邓羽,陈凯,陈天圣.团头鲂转录因子Oct4的原核表达和多克隆抗体的制备[J].上海海洋大学学报,2018,27(1):8-15. |
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| 作者姓名： | 于淼 方健 李玲玉 潘启华 薛亭 邓羽 陈凯 陈天圣 |
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| 作者单位： | 华中农业大学,华中农业大学 水产学院,华中农业大学 水产学院,华中农业大学 水产学院,华中农业大学 水产学院,华中农业大学 水产学院,华中农业大学 水产学院,华中农业大学 水产学院 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划（973计划）, |
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| 摘 要： | 为进一步分析鱼类干细胞多能性转录因子Oct4的功能,将团头鲂(Megalobrama amblycephala)Oct4进行原核表达并制备了兔抗Oct4多克隆抗体。采用RT-PCR方法从团头鲂卵巢中扩增Oct4基因的部分编码片段,插入载体pET32a中构建重组原核表达载体pET32a-MaOct4;将表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,经IPTG诱导、Ni~(2+)亲和柱层析纯化获得分子量约49 ku的可溶性重组蛋白;以纯化的重组蛋白为抗原免疫新西兰兔制备抗体,通过ELISA法测定其效价,Western blot鉴定其特异性。实验结果表明:该重组载体在37℃,0.5 mmol/L IPTG条件下诱导4 h可获得Ma-Oct4重组蛋白的高效表达;制备的团头鲂Oct4多克隆抗体能够分别与纯化的Oct4蛋白、原核表达的Oct4蛋白、团头鲂胚胎中的内源Oct4蛋白以及HepG2细胞中过表达的Ma-Oct4:DsRed融合蛋白特异结合。为后续深入研究团头鲂Oct4在干细胞多能性调控中的作用提供了有效的分子工具。
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| 关 键 词： | 团头鲂 Oct4 原核表达 多克隆抗体 转录因子 |
| 收稿时间： | 2017/7/5 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2017/10/1 0:00:00 |
Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of Oct4 protein in Megalobrama amblycephala |
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| YU Miao,FANG Jian,LI Lingyu,PAN Qihu,XUE Ting,DENG Yu,CHEN Kai and CHEN Tiansheng.Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of Oct4 protein in Megalobrama amblycephala[J].Journal of Shanghai Ocean University,2018,27(1):8-15. |
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| Authors: | YU Miao FANG Jian LI Lingyu PAN Qihu XUE Ting DENG Yu CHEN Kai and CHEN Tiansheng |
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| Institution: | Key Laboratory of Freshwater Animal Breeding,Ministry of Agriculture,College of Fisheries,Huazhong Agricultural University,Key Laboratory of Freshwater Animal Breeding,Ministry of Agriculture,College of Fisheries,Huazhong Agricultural University,Key Laboratory of Freshwater Animal Breeding,Ministry of Agriculture,College of Fisheries,Huazhong Agricultural University,Key Laboratory of Freshwater Animal Breeding,Ministry of Agriculture,College of Fisheries,Huazhong Agricultural University,Key Laboratory of Freshwater Animal Breeding,Ministry of Agriculture,College of Fisheries,Huazhong Agricultural University,Key Laboratory of Freshwater Animal Breeding,Ministry of Agriculture,College of Fisheries,Huazhong Agricultural University,Key Laboratory of Freshwater Animal Breeding,Ministry of Agriculture,College of Fisheries,Huazhong Agricultural University,Key Laboratory of Freshwater Animal Breeding,Ministry of Agriculture,College of Fisheries,Huazhong Agricultural University |
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