青稞条纹病LAMP检测体系的建立

【目的】建立青稞条纹病的环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术检测体系，为青稞种子带菌检测及其条纹病的有效防控提供参考。【方法】根据麦类核腔菌（Pyrenophora graminea）的ITS-rDNA序列区间设计5组引物，从中筛选特异性引物，并通过设置60，61，62，63，64和65 ℃ 6个温度梯度来优化LAMP反应体系的温度，以建立高效检测麦类核腔菌的LAMP技术体系；分别以麦类核腔菌、大麦坚黑粉菌、裸黑粉菌、禾生指葡孢霉、细链格孢和禾谷镰孢菌基因组DNA为模板进行LAMP扩增反应，对该体系的特异性进行检测；以310，31，3.1，0.31，0.031和0.003 1 pg/μL的麦类核腔菌基因组DNA为模板，对该体系的灵敏度进行分析；最后利用该体系对肚里黄、柴青1号、1141、北青9号和昆仑15 等5个青稞主栽品种的种子带菌率进行检测。【结果】青稞条纹病LAMP检测体系的特异性引物为引物组2，最佳反应温度63 ℃，反应时间70 min；该检测体系对麦类核腔菌具有良好的特异性，其最低检测限为0.31 pg/μL；肚里黄、柴青1号、1141、北青9号和昆仑15种子的带菌率分别为68.18%，72.73%，100%，77.27%和68.18%。【结论】建立了青稞条纹病LAMP检测体系，该体系能在63 ℃、70 min内检测出青稞种子是否携带条纹病菌。

Establishment of LAMP detection system of Pyrenophora graminea