| pPIC9K-IL-2重组质粒的构建及其在毕赤酵母中的表达 |
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| 引用本文： | 刘斌,祁光宇,陈晓宇,王宇,牟克斌,黄银君,刘学荣.pPIC9K-IL-2重组质粒的构建及其在毕赤酵母中的表达[J].甘肃农业大学学报,2014(3):32-36. |
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| 作者姓名： | 刘斌 祁光宇 陈晓宇 王宇 牟克斌 黄银君 刘学荣 |
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| 作者单位： | 中农威特生物科技股份有限公司;中国农业科学院兰州兽医研究所; |
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| 基金项目： | 甘肃省科技计划资助(1104NKCA167) |
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| 摘 要： | 根据Ovis aries interleukin(IL-2)序列设计1对引物,用PCR法扩增的目的基因进行克隆,将测序正确的IL-2基因片段和表达载体pPIC9K同时双酶切后相连,构建pPIC9K-IL-2重组表达载体.将线性化的载体pPIC9K-IL-2电转化毕赤酵母GS115,对重组酵母转化子经MD平板筛选和PCR分析鉴定后,用G418(4g/L)筛选到多拷贝菌株,进行不同条件下甲醇诱导表达.结果表明:经PCR鉴定IL-2基因已整合到酵母基因组中,表达产物经SDS-PAGE电泳分析发现相对分子质量约为18ku目的蛋白表达条带,本研究成功构建了高效表达重组羊IL-2毕赤酵母菌株,为新型细胞因子佐剂的研发奠定了基础.
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| 关 键 词： | 绵羊 白介素-2基因 毕氏酵母 基因表达 SDS-PAGE |
Construction of recombinant pPIC9K-IL-2 and expression in Pichia pastoris |
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