正交设计优化青蒿SRAP-PCR反应体系及引物筛选

为了建立青蒿的SRAP最佳扩增体系,并筛选出SRAP多态性引物,本研究以青蒿叶片DNA为模板,采用正交试验设计,以Mg^2+、dNTP Mix、Taq DNA聚合酶、引物和DNA模板5种因素5个水平,对青蒿SRAP反应体系进行研究。结果表明,青蒿SRAP-PCR最佳反应体系为:引物0.6μmol/L、Mg^2+2.0 mmol/L、模板DNA 5.1 ng、Taq DNA聚合酶2.0 U、dNTPs 0.25 mmol/L,总体积为25μL。各因素对扩增反应均有不同影响,其中引物浓度的影响最大,dNTPs的影响最小。运用该体系对不同种质资源的青蒿进行验证,证明该体系稳定可靠,并在30个引物组合中筛选出了25对扩增条带清晰,多态性丰富的引物组合。这一结论为今后利用SRAP标记技术进行青蒿分子遗传学研究提供了科学依据。     

马传贫驴白细胞弱毒疫苗株跨膜蛋白主要免疫决定区基因的克隆与表达

从感染驴白细胞的马传贫驴白细胞弱毒疫苗株前病毒DNA中克隆了编码跨膜蛋白主要免疫决定区(TMIR)的基因，并在大肠杆菌中进行了表达。所表达的融合蛋白有一部分是可溶的，其氨基端带有6个组氨酸的标签，因此可以用固定化金属离子亲和层析法在非变性条件下进行纯化。在间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹试验中，重组的TMIR蛋白可与马传贫阳性血清样品发生反应，而与健康马血清无任何反应。这表明该重组蛋白具有良好的抗原性和特异性，可用于马传贫弱毒疫苗株在体内外复制、接种马体内免疫应答及马传贫诊断的研究。     

猪带绦虫六钩蚴cDNA文库的构建与筛选

在体外将猪带绦虫虫卵孵化为有活力的六钩蚴。采用商品化试剂盒抽提六钩蚴总 RNA、m RNA,反转录为双链c DNA,再加 Eco R Adapter。在去除小片段后 ,dsc DNA与 λgt11噬菌体 DNA连接 ,经蛋白包装 ,构建了猪带绦虫六钩蚴λgt11c DNA文库。该文库效价为 3.5× 10 9pfu/ m L ,重组 DNA片段大小为 0 .5～ 3.2 kb,平均为 1.6 kb,蓝白斑比 1∶ 9。用抗体探针对文库进行免疫学筛选 ,在消除非特异性反应的基础上筛选约 10 6 重组子 ,共得到 118株强阳性克隆 ;应用 PCR鉴定上述部分阳性克隆 ,均扩增到 0 .5 kb以上的片段。结果显示 ,构建的文库合格 ,含六钩蚴所有抗原基因 ,可用于六钩蚴 c DNA克隆的筛选 ;用免疫学与 PCR联合筛选 c DNA文库 ,可消除假阳性     

金针菇品种比较试验

１９９１年１０月至１９９３年７月，笔者用Ｃｏ－２７等１２个菌株做了四批十二次金针菇品种比较试验，菌株Ｃｏ－２７比优良品种三明一号，Ｆ９０８分别增产１４．２６％和１２．３９％，差异显著性测验表明，它们之间的差异均达到了显著程度；Ｃｏ－２６，Ｃｏ－１４，Ｃｏ－２３，Ｃｏ－１５，Ｃｏ－２４，Ｃｏ－１３等菌株与两个对照品种相比，其产量都有不同程度的提高，除Ｃｏ－２５之外，各菌株之间菌丝生长速度没有表现出显     

香菇“9101”菌株选育研究报告

1991－1998年从长白山采集的野生香菇子实体中，通过分离、筛选、生物学测定、出菇试验、品种对比试验等方法，选育出适合吉林省气候条件的香菇菌株－9101。“9101”属于低温型菌株，生育期约160d，有效积温3200℃，中晚熟种，出菇中心温度7－18℃，适合北方地区代料栽培，也可用于段木栽培。     

Rapid Screening for Aluminum Tolerance in Cereals by Use of the Chlorophyll Fluorescence Test

The effects of aluminum on the photosynthetic apparatus were examined in cereals grown in nutrient solutions (pH 4.5) at two Al levels (0 and 148 μM). The chlorophyll fluorescence kinetics results confirmed that the soft wheat ‘BHG’ cultivar has the potential for growth on acid soils while triticale cultivars ‘Niovi’ and ‘Dada’ appeared to be relatively tolerant. The percentage decrease in F_v/F_m of the less tolerant cultivars after Al-treatment indicated a decrease in the efficiency of the primary photochemistry of PS II, while the decrease in the ratio F_V/F_osuggested that exposure of the cultivars ‘Dio’ and ‘Appulo E’ to aluminum caused injury to the thylakoid structure. The percentage fluctuations of the ratio F_v/F_mwere shown to correlate very closely with the assessment of injury as evaluated by the relative top fresh weight. Measurements of chlorophyll fluorescence in vivo could be used to monitor injury caused by “Al-stress”, and thus they may serve as a rapid screening test for Al tolerance.     

回交改良家蚕性连锁平衡致死系的研究

将家蚕性连锁平衡致死系与优良常规品种杂交后 ,F1代自交 ,再与平衡致死系回交 ,然后利用标记基因选择 ,可以把常规品种的血缘导入平衡致死系 ,改良其经济性状。本文对这一方法进行了研究 ,并证明了这种方法的实用价值     

鸡舍环境耐药细菌气溶胶及其向环境传播的研究

通过对舍内粪便、空气和舍外环境(10、50、100m)中的空气分离到的细菌鉴定，包括细菌DNA分子生物学检测及药物敏感实验以及细菌含量统计学分析，证明三者之间存在着内在联系；舍内环境微生物气溶胶包括耐药细菌通过舍内外气体交换排往鸡舍周围环境，舍周边环境在一定范围内受到生物污染。研究显示，在粪便、舍内空气、舍外环境10、50、100m空气中分离的金黄色葡萄球菌和链球菌80％以上对氯霉素(CMP)和对苯唑青霉素(OXA)耐药；粪便和舍内外环境空气中的80％以上的大肠杆菌和沙门氏菌对氨苄青霉素(AMP）、氯霉素(CMP)、头孢唑啉(CFZ)均为抑制。证明该鸡舍曾经使用过这些药物治疗或作为添加剂在饲料中添加，鸡群产生了耐药细菌菌株，并向环境传播。测量数据统计结果指出，十里河鸡场鸡舍内环境空气中的大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和链球菌与舍外环境中相应菌群含量比较差异显著或极显著(P＜0．05或P＜0．01)，但舍外10、50、100m之间的相应菌群比较差异不显著(P＞0．05)，这说明鸡舍内环境细菌气溶胶含量产生多，含量高，菌源强度大；另一方面，反应了鸡舍内环境微生物气溶胶包括耐药细菌能向舍外环境扩散，位舍外环境在一定的范围内受到动物源性生物污染，影响范围大于100m。通过对鸡舍环境微生物气溶胶来源的探讨发现，粪便中的大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和链球菌与舍内空气相应菌群数量关系比较，呈现正相关(r=0.99)。这从一个侧面揭示了粪便可能是微生物气溶胶的主要来源。