洋葱挥发油的抗真菌作用及其机理

采用砂堡培养基液体稀释培养法和薄层色谱分析法研究了洋葱挥发油抗真菌效果及机理，以期发现天然抗真菌药物，开发洋葱资源．结果表明：洋葱挥发油提取物对酿酒酵母、白假丝酵母、新生隐球菌、黑曲霉、黄曲霉、红曲霉、青霉等真菌的生长有较强的抑制作用；其最低抑菌浓度酿酒酵母和白假丝酵母为0．25％，新生隐球菌为0．50％．薄层色谱分析表明：洋葱挥发油处理后的自假丝酵母的羊毛周醇、麦角固醇的古量降低。而角鲨烯的音量增高，说明洋葱挥发油可能抑制白假丝酵母麦角周醇的早期合成.     

芽孢杆菌BC98-Ⅰ抗真菌物质的初步分离及特性

BC98-Ⅰ是一株分离自沤肥浸渍液的蜡状芽孢杆菌，对蔬菜、瓜类、花卉枯萎病具良好的防治效果。它分泌产生的抗真菌物质的粗提物对黄瓜、西瓜、青椒枯萎菌有很强的拮抗作用，当浓度为10mg／mL时，抑菌圈直径分别达到20．33、20．22和22．77mm。该粗提物对高温高压、紫外光和蛋白酶均不敏感。同时，它在中性偏碱(pH8～9)的条件下活性最高；在极性溶剂如水、甲醇、乙醇中溶解度大，抑菌活性高。粗提液经Sephadex G100层析后，得到了两个洗脱峰，活性物质存在于第一峰中。抑菌机制试验表明：它可造成孢子萌发率降低、菌丝生长形态异常、分支加剧并产生大量泡囊。     

枯草芽孢杆菌G3菌株的抗菌物质及其特性

 产几丁质酶枯草芽孢杆菌G3菌株的固体培养物在黄瓜灰霉病菌和番茄叶霉病菌抑菌试验中证实,抑菌活性物质存在于过滤上清液中,它们是从酸沉淀物中提取出的伊枯草菌素、生物表面活性素和存在于盐析粗蛋白中的几丁质酶。在叶霉孢子萌发试验中,伊枯草菌素微弱地抑制孢子萌发但强烈破坏芽管和新生菌丝;生物表面活性素和几丁质酶则强烈抑制孢子萌发并长久性地抑制芽管伸长。在PDA平板上的灰霉菌丝抑菌试验中,伊枯草菌素抑制菌丝生长,引发菌丝顶端膨大,形成泡囊,泡囊破裂后原生质外泄;几丁质酶抑制菌丝生长,引发产生不规则的菌丝团;生物表面活性素在平皿上对菌丝则不显示出抑菌活性。     

小叶九里香枝干抑菌活性成分的研究

为了获得小叶九里香枝干中抑制炭疽病菌的活性成分,在活性追踪指导下,利用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱及半制备液相色谱等方法对小叶九里香枝干进行了研究。经追踪分离鉴定到1个活性化合物XY-01,利用质谱、核磁共振谱鉴定化合物为九里香甲碱(Koenidine),该化合物可有效抑制香蕉炭疽病菌和芒果炭疽病菌的生长,EC50值分别为34.28和45.88μg/mL,表明九里香甲碱抑菌活性较好、结构简单,具有开发为新型植物源杀菌剂的潜在价值,九里香甲碱系首次从小叶九里香中分离得到。     

一株Fusarium oxysporum f. sp. niveum拮抗菌的筛选、鉴定及其抑菌特性

为筛选西瓜枯萎病拮抗菌株并探究其抑菌特性,以齐齐哈尔市青昕蔬菜基地根际土为材料,采用平板对峙法筛选到1株能高效抑制西瓜专化型尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f.sp. niveum,Fon)的拮抗菌株,通过形态特征、16S rDNA、gyrA和gyrB序列分析鉴定其菌种;通过盆栽试验验证拮抗菌株对西瓜枯萎病的抑制作用;采用生长速率法研究拮抗菌株不同生长时期的无菌发酵滤液及其不同贮存条件下的抑菌能力;利用扫描电子显微镜(SEM)和共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察并分析无菌发酵滤液对Fon孢子形态和膜完整性的影响。结果表明,拮抗菌株WD为Bacillus amyloliquefaciens,能有效抑制西瓜枯萎病的发生,抑制率达到57.57%,其无菌发酵滤液在衰亡期有较高的抑菌能力,对Fon菌丝生长抑制率为54.32%;无菌发酵滤液对温度、pH具有较高的耐受性,30 ℃、pH 7时抑菌活性最强,抑菌率可达58.36%;在4 ℃贮存至少45 d,且紫外光照120 min内对其抑菌活性没有影响;Fon孢子暴露在WD无菌发酵滤液下,孢子表面皱缩凹陷,膜完整性被破坏。综上所述,Bacillus amyloliquefaciens WD是1株高效的拮抗菌株,为西瓜枯萎病生防菌剂的研发与利用奠定了基础。     

Antimycotic Screening of 58 Malaysian Plants against Plant Pathogens

Ethanolic extracts of 58 Malaysian plants belonging to 24 different families were screened for antifungal activity against seven plant pathogens using the filter paper disc diffusion technique. Two varieties of Piper betle, showed strong activity against all the pathogens tested (Colletotrichum capsici, Fusarium pallidoroseum, Botryodiplodia theobromae, Alternaria alternata, Penicillium citrinum, Phomopsis caricae-papayae and Aspergillus niger), with inhibition diameters significantly (P<0·01) bigger than 2·5 mg ml⁻¹ prochloraz or 10 mg ml⁻¹ clotrimazole. The minimum inhibitory concentrations of the ethanolic extracts of P. betle against these plant pathogens ranged between 0·01 mg ml⁻¹ and 1 mg ml⁻¹. Thirty-four other plants (Kucing gala, Limau batik, Bertholletia excelsa, Bixa orellana, Caesalpinia pulcherrima, Cerbera odollam (fruits and leaves), Colocasia gigantea, Curcuma domestica, Curcuma manga, Derris eliptica, Elephantopus scaber, Eleusine indica, Eugenia polyantha, Euphorbia hirta, Euphorbia tirucalli, Gardenia florida, Hedyotis auricularia, Hibiscus rosa-sinensis, Juniperus chinensis (three varieties), Lawsonia inermis, Lecythis ollaria, Mentha arvensis, Mimusops elengi, Ocimum sanctum, Phyllanthus niruri, Piper nigrum, Piperomia pellucida, Pedilanthus tithymaloides, Polygonum minus, Spondias dulcis, Solanum nigrum, Tinospora tuberculata) showed selective antifungal activity, while 21 species were inactive.     

黄连中盐酸小檗碱的提取纯化及抑菌活性研究

为了探究盐酸小檗碱在植物病原真菌方面的抑制作用,以黄连根粉为材料,采用酸水法提取和乙醇重结晶获得盐酸小檗碱纯品,采用生长速率法研究了盐酸小檗碱对常见植物病原菌的抑制活性。结果表明,盐酸小檗碱的提取率为3.3%,经高效液相色谱法测得其含量为93.56%;抑菌活性试验表明,盐酸小檗碱在100μg/mL时对玉米大斑病菌的抑制率达99.9%,EC_(50)为8.20μg/mL,表现出比药剂对照噁霉灵和百菌清更高的抑制活性;进一步的试验表明,与噁霉灵及百菌清相比,盐酸小檗碱对玉米大斑病菌的抑制作用具有持效期长的特点。     

赤霉病菌特异抗体-防御素融合蛋白的表达和功能鉴定

选择对赤霉病菌具有高度特异性和亲合力的单链抗体,与植物防御素构建成融合蛋白基因,将融合蛋白及防御素基因分别与细菌表达载体pGEX和植物表达载体pMBL4构建成重组载体,在细菌中经IPTG诱导表达GST融合蛋白,亲和层析纯化蛋白;经根癌农杆菌介导的真空渗入法在烟草叶片中瞬间表达,提取叶片总蛋白用于鉴定。抑菌活性分析表明,烟草叶片瞬间表达的防御素和抗体-防御素融合蛋白,均对赤霉病菌有强烈的抑菌作用;从细菌中纯化的防御素蛋白,也能有效抑制赤霉病菌生长。说明赤霉病菌抗体-防御素融合蛋白基因,可作为抗赤霉病资源,用于改良植物的抗赤霉病性。     

棉花黄萎菌拮抗菌BDT-25的鉴定及抗菌蛋白产生条件研究

拮抗细菌BDT_25是从根际土壤中分离到的一株对棉花黄萎病菌具有强烈抑制作用的芽孢杆菌。经生理生化特征的鉴定,证明BDT_25菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。此外,该菌株还对棉花枯萎病菌、棉花立枯病菌等10种其他病原真菌的生长具有显著的抑制作用,为一株广谱拮抗细菌菌株。通过对BDT_25菌株培养条件的研究发现,采用NB液体培养基,28℃,170 r/min培养48 h所得发酵液对棉花黄萎病菌的抑制作用最强。其发酵液经硫酸铵沉淀粗提到对棉花黄萎病菌具有抑制作用的提取物,进一步实验表明,该拮抗物质对热和多种蛋白酶敏感,证实其为抗菌蛋白。     

萝卜抗菌肽基因AFP的克隆及其在大肠杆菌中的诱导表达

试验采用RT-PCR方法,从萝卜叶子中克隆得到抗菌肽基因AFP(antifungal protein)。该基因全长240个碱基,79个氨基酸。经测序证明克隆所得基因与GeneBank中发表的原序列一致。将此抗菌肽基因克隆到E. coli表达载体pET28a,在IPTG的诱导下表达出含有AFP的11.99 ODD,证明该AFP基因在原核表达系统中可以正常表达。