喙尾琵甲DNA提取方法比较与AFLP反应体系的建立

采用CTAB法、改进SDS-蛋白酶K法、SDS-饱和氯化钠法和提取试剂盒对喙尾琵甲的肌肉、虫卵和幼虫进行DNA提取,比较了DNA的提取和保存质量,并对AFLP试验的酶切时间、预扩增产物稀释倍数和选择性扩增引物量等关键因子进行试验和优化。结果表明:4种方法对肌肉组织提取的DNA质量都较好;3种传统方法提取的DNA的保存时间长于试剂盒提取的DNA;使用EcoR Ⅰ/Mse Ⅰ内切酶组合,10 U EcoR Ⅰ和2 U Mse Ⅰ分两步各酶切2 h,T4连接酶3 h连接后,以20倍稀释的预扩增产物和5 ng/35 ng的E+3/M+3引物量进行选择性扩增,建立了喙尾琵甲AFLP分子标记体系。     

三种昆虫甲壳素提取与分析

以含氮量和灰分含量为指标,采用酸碱法对蝉蜕、中华稻蝗和喙尾琵琶甲中甲壳素的提取方法进行了比较研究,确定了三种昆虫最佳提取甲壳素的方法:从蝉蜕中提取甲壳素方法为80℃下与NaOH(6％)反应1 h.脱蛋白、再在常温下与HCI(0.2 mol·L-1)反应20 min,脱除无机盐;从中华稻蝗中提取甲壳素的方法为80℃下与NaOH(7％)反应1 h脱蛋白,再在常温下与HCI(0.3 mol·L-1)反应10 min,脱除无机盐;从喙尾琵琶甲中提取甲壳素的方法为80℃下与NaOH(7％)反应5 h脱蛋白,再在常温下与HCI(0.2 mol·L-1)反应10 min,脱除无机盐;红外光谱与X-射线衍生分析表征的结果表明,三种昆虫中提取的甲壳素与标样一致.     

异距琵甲(鞘翅目:拟步甲科)生物学特性的研究

异距琵甲在宁夏2年发生1代,以成虫和不同龄期的幼虫越冬,4月上旬至10月上旬产卵,卵期10～14 d,幼虫一般为12龄,幼虫期380～445 d;越冬幼虫于次年6月下旬至9月上旬化蛹,蛹前期16～28 d,蛹期14～20 d,羽化成虫经240～275 d性成熟开始交配产卵。该虫食性杂,不喜光,活动有明显的节律性。成虫具防御腺进行自卫,防御腺分泌物可作药物应用。     

云南省喙尾琵琶甲分布及生态环境调查

对云南省15个地区26个县(市、区)的调查表明,喙尾琵琶甲在云南民间广泛利用,是一种具有重大利用价值的民族药用昆虫;喙尾琵琶甲在云南省均有分布,其中滇中、滇东高原分布较为集中,适生区年均气温为13～19 ℃,年均降水量为750～1 100 mm,海拔为1 500～2 100 mm.垂直分布的海拔范围在760～2 450 m之间.喙尾琵琶甲成虫生境多局限于居民房屋、牲畜圈舍,幼虫栖息于疏松土壤,以谷糠、玉米面、面粉等为食,未发现野外分布.根据其适生的温度、降水量和食性推测其潜在分布区,表明西南地区为其分布的核心区域.目前通称的云南琵琶甲应为喙尾琵琶甲.     

环境因子对喙尾琵甲卵孵化的影响

研究了温度、光照和基质含水量对喙尾琵甲(Blaps rhynchopetera Fairmaire)卵孵化的影响。结果表明:12 - 28 ℃ 6个恒温条件下卵均可孵化,随着温度的升高卵的发育历期缩短(32.92 - 5.83 d),发育速率加快(0.03 - 0.172/d)。12 - 25 ℃下孵化率较高,平均孵化率70%,8 ℃和31 ℃未见卵孵化。喙尾琵甲卵的发育起点温度为(10.08±0.93) ℃,有效积温为(99.91±8.11)日·度。在0 - 8 000 lx光照条件下,随着光照度的增加,孵化率呈下降趋势,光照度≥8 000 lx,卵不孵化。基质含水量和温度共同影响试验中,基质含水量、温度以及二者的交互作用均对卵的孵化有显著影响,多重比较分析后筛选出了适宜卵孵化的温度含水量组合;并对云南地区限制喙尾琵甲卵孵化的气候因素进行了探讨。     

HPLC法测定喙尾琵琶甲药材中氨基酸的含量

[目的]建立HPLC法测定喙尾琵琶甲中氨基酸含量的方法。[方法]用盐酸水解、邻苯二甲醛和β-巯基乙醇柱前衍生,0.55%磷酸二氢钠缓冲液（pH7.80）-甲醇-乙腈为流动相,柱温35℃,检测波长338 nm,梯度洗脱后测定喙尾琵琵甲药材中氨基酸的含量。[结果]各氨基酸衍生物在40 m in内均能得到良好地分离,r为0.997 0～1.000 0（n=6）,平均回收率为90.16%～104.1%,RSD为1.89%～5.92%。[结论]该方法简便、准确、重现性好,可作为喙尾琵琶甲中氨基酸含量的测定方法。     

喙尾琵琶甲提取物的体外抗肿瘤活性研究

[目的]观察喙尾琵琶甲提取物对体外培养人肿瘤细胞株的生长抑制作用。[方法]喙尾琵琶甲粗提物,通过硅胶柱层析分离得不同极性部分,运用MTT法观察不同部分对人白血病细胞株K562和HL-60、人肺癌细胞株A549的生长抑制情况。[结果]粗提物、石油醚和氯仿部分三者最高浓度(300μg/ml)对K562、HL-60、A549的生长抑制率均>69%,半数抑制浓度(IC50)均<100μg/ml。[结论]喙尾琵琶甲粗提物、石油醚和氯仿部分对K562、HL-60、A549的生长具有很好的抑制作用。     

诱导和非诱导条件下喙尾琵甲幼虫抗菌肽分离及抑菌活性比较

对混合菌液诱导和非诱导处理的喙尾琵甲幼虫抗菌肽进行了分离纯化及抑菌活性比较。结果显示:诱导组和非诱导组粗提物无抑菌活性,但是经凝胶色谱分离后,从非诱导组获得组分DZP1,对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌表现出抑制作用;从诱导组获得组分YDP1,对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、绿脓杆菌具有活性,且YDP1活性明显强于DZP1;Tricine-SDS-PAGE检测表明DZP1和YDP1组成、种类基本一致,主要由20 kD以下分子量的小肽组成。研究结果表明:喙尾琵甲幼虫在诱导和非诱导条件下均可分离到具有抑菌活性的抗菌肽,菌液诱导可增强抗菌肽的活性和抑菌谱。     

喙尾琵琶甲化学防御物质气相色谱-质谱分析及抑菌试验

对喙尾琵琶甲(Blaps rynchopetera Fairmai)化学防御物质的抑菌作用进行了研究。结果表明,喙尾琵琶甲化学防御物质能够抑制细菌的生长,且对革兰氏阳性菌的抑制效果好于革兰氏阴性菌;用二氯甲烷萃取喙尾琵琶甲化学防御物质,经过气相色谱—质谱分析,共鉴定出25种化合物,占总量的90.15%,其最主要成分是2-乙基-2,5-环己二烯-1,4-二酮、二十二碳烯酰胺、十八碳烯酰胺、十三碳烯、2-甲基-2,5-环己二烯-1,4-二酮。     

异形琵甲成虫氨基酸的测定与分析

使用日立83-50型氨基酸自动分析仪对异形琵甲(Blaps variolosa(Faldermann,1835))成虫的氨基酸进行测定和分析,共测定出17种氨基酸(色氨酸未测),氨基酸总量占53.10%,其中必需氨基酸占51.20%,以蛋氨酸(MET)的含量最为丰富,占氨基酸总量的13.51%.此外,甘氨酸(GLY)、亮氨酸(LEU)、谷氨酸(GLU)和丙氨酸(ALA)的含量也较高,分别为5.863 mg/100 mg,5.160 mg/100 mg,4.939 mg/100 mg和4.321 mg/100 mg.将异形琵甲的氨基酸指标与几种营养源相比较,其优势明显.