白藜芦醇和褪黑素对绵羊胎儿成纤维细胞转染及卵母细胞体外成熟的影响

试验旨在利用白藜芦醇(Re)和褪黑素(MT)提高绵羊胎儿成纤维细胞电穿孔转染(电转)效率、优化卵母细胞体外成熟体系,以提高转基因动物生产效率。将绵羊胎儿成纤维细胞分为6组:对照组、添加白藜芦醇高、中、低(R^-5、R^-6、R^-7)3种浓度组及白藜芦醇和褪黑素联合添加组(R^-5M^-5、R^-6M^-7),通过电转效率和细胞凋亡情况确定电转体系优化方案;通过对细胞周期、线粒体膜电位及活性氧(ROS)的检测研究其作用机制。将绵羊卵母细胞分为对照组及白藜芦醇和褪黑素(R^-5M^-5、R^-6M^-7)联合添加组,通过绵羊卵母细胞体外成熟后卵丘细胞扩展、第一极体排出及体外受精胚胎的卵裂率检测其对卵母细胞体外成熟的作用。研究结果显示,分离的绵羊胎儿成纤维细胞P3代增殖旺盛,细胞生长曲线呈典型的S型;与对照组相比,所有试验组胎儿成纤维细胞的电转效率均显著提高(P<0.05),R^-5M^-5组电转效率最高;R^-6M^-7组显著降低细胞凋亡率(P<0.05),R^-5、R^-6、R^-5M^-5和R^-6M^-7组均显著促进细胞增殖(P<0.05);R^-6、R^-7、R^-5M^-5和R^-6M^-7组G1期细胞增加,S期细胞相对减少,但差异均不显著(P>0.05);R^-6、R^-7、R^-5M^-5和R^-6M^-7组成纤维细胞内ROS水平均显著降低(P<0.05),R^-6、R^-5M^-5和R^-6M^-7组线粒体膜电位均显著增加(P<0.05);R^-6M^-7组显著促进绵羊卵丘细胞扩展、提高卵母细胞第一极体排出率和体外受精胚胎发育能力(P<0.05)。综上,白藜芦醇和褪黑素可以优化绵羊胎儿成纤维细胞电转体系,提高卵母细胞体外成熟效率,为白藜芦醇和褪黑素在转基因动物生产中的应用提供参考依据。     

白藜芦醇通过激活去乙酰化酶1/腺苷一磷酸激活的蛋白激酶信号通路影响牛脂肪细胞凋亡

本试验旨在研究植物提取物白藜芦醇(RES)对牛皮下脂肪细胞凋亡率以及去乙酰化酶1(SIRT1)/腺苷一磷酸激活的蛋白激酶(AMPK)信号通路关键因子的mRNA和蛋白质表达量的影响。选取18月龄鲁西黄牛的皮下前体脂肪细胞,在细胞分化的第0天,更换为RES浓度分别为0(对照)、100、200和400μmol/L的培养液处理48 h,每组设3个重复。应用Hoechst33342染色检测细胞凋亡的形态学变化,流式细胞分析仪检测细胞凋亡率,荧光定量PCR(q PCR)和免疫印迹试验(Western-blot)分别检测SIRT1/AMPK信号通路上的关键因子SIRT1、A MPKα、叉头转录因子1(Fox O1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、促凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA和蛋白质表达量,并利用油红O染色鉴定脂肪细胞。结果表明,与对照组相比:不同浓度RES处理后的牛皮下脂肪细胞凋亡率均极显著增高(P0.01);不同浓度RES处理后的SIRT1、AMPKα、caspase-3、Bax的mRNA表达量均显著或极显著提高(P0.05或P0.01),Bcl-2的mRNA表达量极显著降低(P0.01);不同浓度RES处理后的SIRT1、AMPKα、caspase-3的蛋白质表达量均显著或极显著提高(P0.05或P0.01);200和400μmol/L RES处理后,Fox O1的mRNA和蛋白质表达量显著或极显著提高(P0.05或P0.01),Bax的蛋白质表达量极显著提高(P0.01),Bcl-2的蛋白质表达量极显著降低(P0.01)。100μmol/L RES处理后时,Fox O1的mRNA和蛋白质表达量以及Bcl-2、Bax的蛋白质表达量均与对照组差异不显著(P0.05)。由此可见,RES通过激活SIRT1/AM PK信号通路,同时激活通路下游的Fox O1,促进了牛皮下脂肪细胞的凋亡,为通过营养调控技术降低牛皮下脂肪沉积提供了一定的理论基础。     

Identification of regulated proteins by resveratrol in glutamate-induced cortical injury of newborn rats

Glutamate induces neuronal damage by generating oxidative stress and neurotoxicities. The neurological damage caused by glutamate is more severe during brain development in newborns than in adults. Resveratrol is naturally present in a variety of fruits and medicinal plants and exerts a neuroprotective effect against brain damage. The goal of this study was to evaluate the neuroprotective effects of resveratrol and to identify changed proteins in response to resveratrol treatment during glutamate-induced neonatal cortical damage. Sprague-Dawley rat pups (7 days old) were randomly divided into vehicle, resveratrol, glutamate, and glutamate and resveratrol groups. The animals were intraperitoneally injected with glutamate (10 mg/kg) and/or resveratrol (20 mg/kg) and their brain tissue was collected 4 hr after drug administration. Glutamate exposure caused severe histopathological changes, while resveratrol attenuated this damage. We identified regulated proteins by resveratrol in glutamate-induced cortical damaged tissue using two-dimensional gel electrophoresis and mass spectrometry. Among identified proteins, we focused on eukaryotic initiation factor 4A2, γ-enolase, protein phosphatase 2A subunit B, and isocitrate dehydrogenase. These proteins decreased in the glutamate-treated group, whereas the combination treatment of glutamate and resveratrol attenuated these protein reductions. These proteins are anti-oxidant proteins and anti-apoptotic proteins. These results suggest that glutamate induces brain cortical damage in newborns; resveratrol exerts a neuroprotective effect by controlling expression of various proteins with anti-oxidant and anti-apoptotic functions.     

中国野生毛葡萄芪合酶基因VqSTS11和VqSTS23调控抗白粉病的研究

利用同源克隆法得到抗白粉病的中国野生毛葡萄‘丹凤–2’芪合酶基因VqSTS11和VqSTS23的开放阅读框,并构建过表达载体;通过器官发生途径诱导不抗白粉病的欧洲葡萄‘无核白’分生愈伤组织并采用农杆菌介导法对其进行转化;经过PCR检测和Western blot鉴定,获得了5株VqSTS11超量表达植株和3株VqSTS23超量表达植株;人工接种白粉菌发现,转基因植株中白粉菌菌丝生长速度慢,孢子萌发受到一定的抑制,并且转基因植株中芪合酶基因相对表达量升高,抗病相关基因表达上调,芪类物质含量积累增多。本研究结果进一步证明中国野生毛葡萄‘丹凤–2’芪合酶基因VqSTS11和VqSTS23对白粉菌具有抗性,‘丹凤–2’可以为改良欧洲葡萄品种抗病性提供抗病基因,作为抗病育种的资源。     

白藜芦醇合成酶(RS)基因转化胡萝卜及高白藜芦醇转基因胡萝卜株系的筛选

白藜芦醇是具有抗病及多种保健功能的芪类次生代谢物,胡萝卜(Daucus carota var.sativa)则是富含β胡萝卜素等多种营养成分的重要蔬菜。研究着眼于创建具有白藜芦醇保健功能的胡萝卜新种质资源,在对葡萄(Vitis vinifera L.)白藜芦醇合成酶(resveratrol synthase,RS)基因在胡萝卜中高效表达的密码子优化基础上构建无潮霉素磷酸转移酶(HPT)抗性基因的转化载体pCB-RS-hyg-,应用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法将pCB和pCB-RS-hyg-共转化到胡萝卜并获得再生植株。经过T0、T1和T2代的逐代筛选,获得2个白藜芦醇含量较高(11.34和15.23mg/g)的转基因胡萝卜株系。     

饲料添加白藜芦醇对吉富罗非鱼生长免疫、肝脏结构的影响

(目的)为探究不同含量白藜芦醇对吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)生长、非特异免疫能力及肝脏结构的影响。(方法)试验设计4组不同含量Res饲料：0%、0.025%、0.05%、0.1%,分别表示D1、D2、D3、D4组;在第15天、45天测定血清中八种非特异免疫酶活性,扫描电镜观察肠绒毛、肝脏显微结构。(结果)结果显示：经45天,处理组与对照组之间增重率(WGR)、特定生长率(SGR)、饲料系数(FC)显著降低(P<0.05)。生长期15天,MT、Hsp-70、Hsp-60、TRF四种酶活性均随着Res含量提高而降低;C3、C4二种酶活性处理组与对照组无显著差异;生长期45天,C3、C4、IgM、TNF-α、Hsp-60、TRF六种酶活性均随着Res含量提高而降低。扫描电镜显示：15天D4组肠绒毛“干瘪”、“卷曲程度加深”,45天时,D4组绒毛排列紊乱、绒毛高度降低,受损严重,肝脏纤维化现象明显。(结论)综上所述：饲料中添加0.1% Res能够降低吉富罗非鱼部分非特异性免疫酶活性,并且损伤肠道、肝脏。     

中国野生毛葡萄芪合酶基因表达及对葡萄抗白粉病的影响

[目的]克隆中国野生毛葡萄(Vitis quinquangularis)'丹凤-2'芪合酶(stilbene synthase)基因(STS)并研究其功能,为提高欧洲葡萄(V.vinifera)的白粉病抗性及品质提供依据.[方法]利用同源克隆法获得中国野生毛葡萄'丹凤-2'芪合酶基因VqSTS9和VqSTS21,构建植...     

微波法从虎杖中提取白藜芦醇工艺

研究了微波法提取虎杖中的白藜芦醇,通过正交实验初步确定微波功率、乙醇浓度、料液比、提取时间4个因素对提取效果的影响并确立最佳的提取工艺条件为：微波功率700W ,乙醇浓度70％,料液比1∶20,微波时间20min。     

花生芽白藜芦醇的影响因素及分子结构研究

研究种子、水质和不同取材部位对白藜芦醇含量的影响,并初步探讨花生芽内白藜芦醇的分子结构类型。采取紫外分光光度法测白藜芦醇含量,首先选择2种花生种子,一是到成熟期收获的种子,一是成熟期后延期半月收获的种子,对比二者萌发后白藜芦醇的含量;花生芽培养期间,使用纯净水和配制的营养水,对比花生芽内白藜芦醇含量的变化;生长初期,取1,2,3,4,5,6,7,8 cm长的胚轴及子叶测其含量;酶解花生芽2,3,4,5 cm胚轴,检测酶解后白藜芦醇含量。结果表明,酶解后的白藜芦醇比酶解前含量增加;胚轴在3 cm时含量最高,子叶在胚轴1 cm时含量最高;水质对白藜芦醇无明显影响,而延长收获期,对白藜芦醇含量有明显影响。白藜芦醇有糖化形式存在,花生芽培养用纯净水,使用延期收获的种子,选取3cm左右到胚轴或整株,即可得到经济实效的花生芽。     

农产品中白藜芦醇的高效液相色谱标准化测定方法研究

旨在建立同时测定花生衣、葡萄皮、苜蓿、虎杖、藜芦等农产品中白藜芦醇含量的高效液相色谱标准化测定方法。色谱分析条件如下:以Waters Atlantis T3-C18色谱柱(4.6×150mm,3μm)分离,柱温40℃;以乙腈:0.1%乙酸溶液(体积比为26:74)为流动相,流速1.0 mL/min;采用二极管阵列检测器,检测波长306 nm。花生衣、葡萄皮、苜蓿中白藜芦醇含量的检出限均为0.6μg/g,定量限均为2.0μg/g;虎杖、藜芦中白藜芦醇含量的检出限均为7.5μg/g,定量限均为25μg/g。方法学考察结果显示符合含量测定要求。该方法操作简便、快速,结果可靠,重现性好,可用来研究农产品中白藜芦醇的含量。