蛹虫草人工优质高产栽培技术研究

本试验通过对四个人工分离蛹虫草品种的菌丝体生长情况、子实体产量进行对比分析，结果显示：沈阳人工分离种（S）为优质品种，武汉（W）、河南（H）、北京（B）种为淘汰种。以大米加4个蚕蛹为基质的培养基子实体生物学效率最高；液体菌种生长周期短，生物学效率较高。     

淡紫拟青霉发酵滤液对大豆胞囊线虫趋化性的影响

 实验室条件下,研究了大豆胞囊线虫幼虫对大豆根和根浸出液的趋化性以及淡紫拟青霉代谢产物对其趋化性的影响。结果表明,大豆胞囊线虫二龄幼虫(J₂)对大豆根存在着一定的趋化性,而淡紫拟青霉发酵滤液对J₂存在明显的驱避性。在根浸出液、真菌滤液及其混合液剂处理下,大豆胞囊线虫J₂在WA平板上靠近处理液的0~1cm区间中分布率存在极显著差异(P <0.0 1),而加样时间(液剂与线虫同时放置或提前2 4h处理)对其分布率没有显著影响。大豆幼根蘸取滤液后对线虫J₂在该区间的分布与不经处理的幼根差异显著(P <0.0 5),证明淡紫拟青霉发酵滤液可以明显地降低线虫与大豆根的亲和力,并强烈抑制线虫对大豆根的侵染。     

蛹虫草CmKexin基因克隆和菌丝体中表达检测

为了探讨蛹虫草类枯草杆菌蛋白酶(Subtilisin-like protease)的表达特性,以真菌蛹虫草菌丝体为研究对象,通过RT-PCR获得蛹虫草CmKexin基因的ORF序列,并进行序列分析。应用Northern杂交和Real-time PCR方法,检测蓝光照射后蛹虫草菌丝体中CmKexin基因的转录情况。结果获得蛹虫草CmKexin基因的ORF序列。对翻译蛋白质产物CmKexin进行生物信息学分析,表明该蛋白质含1个属蛋白转化酶的肽酶S8家族功能域(143~429)和1个前体蛋白转化酶P功能域(514~600),符合真菌类枯草杆菌蛋白酶的特征。蛹虫草菌丝体在黑暗预培养4 d后再蓝光照射,Northern Blotting和Real-time PCR检测均可得到相同的结果,即在持续的蓝光照射48~50 h时,出现CmKexin基因的瞬时大量转录。而其他时间内均未检测到该基因的大量转录。试验结果将为蛹虫草类枯草杆菌蛋白酶的利用提供理论依据。     

滇中蛹虫草居群生物学及其生态学习性研究

通过对滇中地区昆明西山、昆明野鸭湖、嵩明大哨和楚雄紫溪山分布的蛹虫草居群，进行调查和采样，调查分析了蛹虫草的生境，比较研究了蛹虫草不同居群有性型及无性型形态差异，对蛹虫草无性型的产孢结构进行光学显微镜和扫描电镜观察研究。研究发现，蛹虫草子囊壳着生方式及其大小、子囊大小、无性型，随生境不同而发生差异。在云南松常绿阔叶混交林下的子囊壳及子囊较大，分离得到的无性型以拟青霉型（Paecilomyces－type）产孢结构占优势；在华山松林和田埂草丛生境中的子囊壳及其子囊较小，分离得到的无性型以轮枝孢型（Verticillium－type）产孢结构占优势。     

西藏“两江四河”流域生态化造林绿化模式的探讨

生态化造林绿化既是一项生态工程,也是一项社会和经济工程,既强调造林绿化对促进区域自然生态系统向良性循环方向演替的功能,也注重造林绿化对地方经社会发展和满足人们生产生活需求的贡献。依据西藏"两江四河"流域的自然条件和生态状况,从生态化的角度,对区域内造林绿化模式进行了探讨。     

佛山梁园历史文化街区规划设计

突出梁园作为省级文保单位和岭南四大名园之一的著名古典园林地位。依据史料记载,尽可能原地恢复历史景区。对于不属于文物修复范围的其他景区,尽可能适应旅游开放的需要,增加景点容量,以获得良好的社会经济效益。采用传统岭南古典园林设计手法,合理布置水系,园林绿地,园林小品及其他园林建筑。     

淡紫拟青霉E7菌株固体放大发酵产孢培养基和工艺条件研究

为探讨淡紫拟青霉E7菌株固体放大发酵因子间的关系以获得大量孢子用于田间试验,通过正交试验设计优化固体发酵培养基成分和培养条件组合,并测定外加碳源、氮源、无机盐和装料方式对产孢量的影响。结果表明：以玉米粉+甘蔗渣+麸皮+壳聚糖组成的正交2号配方为最佳复合培养基质,分生孢子产量达7.13×109个/g,以发酵液pH+液相发酵终点+温度+初始含水量组成的正交4号配方为优适培养条件,分生孢子产量达8.97×109个/g;该菌株在优化后的培养基配方中添加0.4％蔗糖、0.2％蛋白胨、0.002％硫酸锰,以双层纱布袋装料按优化后的培养条件放大培养,产孢量最高可达到8.22×1010个/g。优化后的E7菌株发酵产孢培养基基质用量少,发酵成本低,适合于固体放大发酵生产淡紫拟青霉孢子。     

菊小长管蚜高毒力生防真菌的筛选

采用国际上通用的标准喷塔法测定了4株玫烟色拟青霉和4株球孢白僵菌对菊小长管蚜的毒力。结果表明,4株拟青霉在21~902个孢子/mm2的接种剂量下引起的死亡率为17.4%~100.0%,4株白僵菌在10~646个孢子/mm2的接种剂量下引起的死亡率为37.3%~100.0%。接种后第5天各菌株的致死中剂量LC50分别126个孢子/ mm2 (Pfr116),442个孢子/ mm2 (Pfr612),213个孢子/ mm2 (Pfr153),234个孢子/ mm2 (Pfr2175),155个孢子/ mm2 (Bb2880),86个孢子/ mm2 (Bb2860),99个孢子/ mm2 (Bb2861)和138个孢子/ mm2 (Bb2879)。致死中时LT50从低浓度下的较大差异向高浓度下的较小差异渐近收敛,在150个孢子/ mm2的剂量下,玫烟色拟青霉不同菌株的LT50变化范围为4.5~7.7天,球孢白僵菌不同菌株的LT50变化范围为4.5~5.1天。综合比较,4株玫烟色拟青霉中以Pfr2175的毒力最强,4株球孢白僵菌中以Bb2860最优,具有杀蚜速度快、致死浓度低等特点,具有较大的开发应用潜力。     

适于玫烟色拟青霉液相发酵生产的培养基和初始接种量及pH

从美国引进对刺吸式口器害虫具侵染力的玫烟色拟青霉(Paecilomyces fumosoroseus)菌株Pfr116,用5种培养液在25 ℃下进行深层培养,以菌丝生物量作为指标筛选出了适合于工业生产的发酵液配方(w/v):食用蔗糖2%,马铃薯20%,蛋白胨0.1%,NaNO3 0.01%,KCl 0.01%,MgSO4 0.025%,MnSO4 0.005%,FeSO4 0.005%及KH2PO4 0.05%.用此培养液对Pfr116 菌株进行48 h的深层发酵,可获>20 mg/mL的干菌丝产量,与萨氏培养液的菌丝产量无显著差异.通过对液培初始接种量和pH值进行优化,确定最佳初始接种量为培养液的菌丝含量1.5 ～2.0 mg/mL,最佳初始pH值为5～7.     

大孔吸附树脂联用KB-2微球柱层析法分离纯化虫草素的工艺优化

通过比较19种大孔吸附树脂对虫草素的解吸附率并联用KB-2微球柱层析法优选出一种简单快捷分离纯化蛹虫草(Cordyceps militaris)培养基中虫草素的制备工艺。结果表明,经大孔吸附树脂XDA-8D吸附后,再用体积分数30%的乙醇解吸附,虫草素纯度从原料中的0.4%达到了10.53%;联用KB-2微球柱层析法分离虫草素,可将纯度提升至66.94%,其优化后的参数为:上样流速1.0 mL/min,上样浓度0.5 mg/mL,用300 mL(2VB)水和体积分数10%的乙醇450 mL(3VB)除杂,30%乙醇1500 mL(10VB)洗脱得到虫草素。