柑桔体细胞融合再生9个组合的二倍体叶肉亲本类型植株

电场诱导９个柑桔种间及体内体细胞融合,各组合均再生叶肉原生质体亲本类型植株。这些植株经形态学和细胞学检查证明为二倍体（２ｎ＝２ｘ＝１８）。对其中５个组合进行ＲＡＰＤ分析表明,４个组合植株的谱带在所分析的引物上均表现为与叶肉细胞亲本谱带一致,另１个组合,即Ｐａｇｅ柑柚＋粗柠檬,个别植株除含有叶肉亲本的所有谱带外,还扩增出了悬浮系亲本的部分特征带,为杂种类型。探讨了这类植株的产生原因及潜在价值。     

2细胞期胚胎采集时间对电融合方法体外制备牛四倍体胚胎效率的影响

通过检测牛早期胚胎分裂速率的时间分布,并将体外受精后0~34 h与26~30 h时间段内采集的2细胞期胚胎分别作为电融合对照组与电融合试验组。将对照组与试验组的2细胞期胚胎分别用于电融合,并将电融合后的胚胎继续体外培养至囊胚期,检测并对比分析2组胚胎的融合率、分裂率、囊胚率和四倍体制备率。结果显示,牛2细胞期胚胎在体外受精后28~30 h其内分裂速率达到最高峰(18.9%)。电融合对照组的融合率、分裂率略高于试验组胚胎(85.2%vs.84.2%,82.2%vs.80.9%),试验组的囊胚率略高于电融合对照组(45.4%vs.44.8%),但差异均不显著。而电融合试验组的四倍体制备率显著高于电融合对照组(28.3%vs.14.5%)。结果表明,牛2细胞期胚胎的采集时间对电融合方法体外制备牛四倍体胚胎的效率有显著影响。     

牛体细胞核移植技术

对牛体细胞核移植技术中核供体细胞周期同期化处理，电融合条件及去核方法等进行了研究。结果表明，血清－饥饿组（细胞周期同期化处理组）的移核重构胚细胞融合率（83．3％），卵裂率（70％）和囊胚发育率（33．8％）与血清－选择组对应指标间无显著性差异（82．3％，69．2％，32．4％，P＞0．05）；但上述2组分别极显著高于血清－随机组（64．8％，33．8％，4．35％，P＜0．01），试验确立了场强1.025kV/cm，脉冲宽度50μs，连续2次脉冲为最佳电融合条件。摸索出的点击去核法，对卵母细胞进行去核，去核成功率达90％，极显著高地吸引法的68．3％（P＜0．01）；其囊胚发育率为34．1％，显著高于吸引法的18．0％（P＜0．05），与挤压法（20．9％）相比差异不显著（P＞0．05），移植重构胚胎移植后，产2头成活的体细胞克隆牛。     

水稻与空心莲子草原生质体电融合条件的研究

以水稻（Oryza sativa L.）的胚性悬浮细胞和空心莲子草[Alternanthera philoxeroides(Mart.)Griseb]的悬浮细胞为材料， 研究了两种原生质体电融合的条件。结果表明：在交流电场为100V/cm，直流脉冲电场为1.5kV/cm，脉冲幅宽为40μs，脉冲间隔为0.5a，脉冲次数为2次，电融合液组成为10％甘露醇和0.4mmol/LCaCl2时，原生质体的融合频率达到24.6％。     

小鼠2细胞胚卵裂球电融合的研究

分别用８００ｖ／ｃｍ、４０～８０μｓ的单个电脉冲；８００ｖ／ｃｍ、１６０～３２０μｓ的单个电脉冲；１０００ｖ／ｃｍ、１６０～３２０μｓ的单个电脉冲；１２００ｖ／ｃｍ、１６０～３２０μｓ的单个电脉冲；１０００ｖ／ｃｍ、１６０～３２０μｓ的２个电脉冲所获得的胚胎融合率分别为８４．６％（３３／３９），１００．０％（５９／５９），９７．４％（７４／７６），９５．１％（３９／４１），６４．７％（１１／１７）。融合胚作培养后，２细胞胚的发育率分别为１５．２％（５／３３），３９．０％（２３／５９），４７．３％（３５／７４），４３．６％（１７／３９），１８．２％（２／１１）。以１０００ｖ／ｃｍ，１６０～３２０μｓ的单个脉冲诱导注射ＬＨ３９～４３ｈ，４４～４８ｈ回收的２细胞胚，胚胎融合率分别为１００．０％（２７／２７），９６．４％（２７／２８）；发育率分别为４４．４％（１２／２７），３３．３％（９／２７）。２细胞胚卵裂球融合的适宜条件为１０００ｖ／ｃｍ和１６０～３２０μｓ的单个脉冲。     

二倍体马铃薯体细胞电融合的研究

对3种双单倍体马铃薯叶肉原生质体进行自体和异体融合及对二倍体野生种S.phureja实生苗子叶下胚轴原生质体自体融合的实验结果表明:不同基因型马铃薯叶肉原生质体在交变电场中的转动电压、成串电压及细胞拉长电压无明显差异;在1 800 v/ cm的直流脉冲电压、100μs脉冲幅度下,2～3细胞的融合频率最高(24.16 %);实生苗子叶下胚轴原生质体在2 000 v/ cm、100μs的电场作用下融合频率明显高于叶肉组织,其融合频率为43.50 %;实验还显示出,马铃薯叶肉原生质体自体融合频率明显高于异体融合频率。     

龙眼荔枝属间原生质体电融合

由龙眼的幼胚培养诱导、筛选出松散型胚性愈伤组织 ,由之建立了胚性悬浮细胞系 ;用同样的方法建立了荔枝的松散型胚性愈伤组织系 .龙眼的胚性悬浮细胞和荔枝的胚性愈伤组织在含纤维素酶和果胶酶各 10 .0g· L-1的 CPW- 13M的酶解液中酶解 ,经纯化后可得到较为纯净的原生质体 .采用电融合方法进行两种原生质体融合处理 ,获得了适宜的融合参数 ,融合率达 2 0 %以上 .融合产物经初步培养 ,形成了多细胞团     

甜瓜,西瓜原生质体电融合及其杂种分子生物学鉴别

甜瓜、西瓜原生质体电融合及其杂种分子生物学鉴别林伯年（浙江农业大学园艺系，杭州３１００２９）关键词甜瓜；西瓜；原生质体；电融合；杂种鉴别ＰｒｏｔｏｐｌａｓｔＦｕｓｉｏｎｏｆＭｕｓｋｍｅｌｏｎａｎｄＷａｔｅｒｍｅｌｏｎａｎｄＴｈｅｉｒＨｙｂｒｉｄＩｄｅ...     

猪胚胎细胞核移植

选用杜洛克２￣１６细胞期胚胎卵裂球作核供体，湖北白猪卵母细胞作核受体，通过显微操作和电融合法构成重组胚。体外培养时，以融合前２ｈ、１ｈ激活及融合前不激活的卵母细胞做核受体的重组胚，发育率分别为６４．６％，５５．３％和３４．５％。     

OPS玻璃化冷冻对小鼠四倍体胚胎体外发育的影响

为探究开放式拉长细管(OPS)玻璃化冷冻对四倍体胚胎发育的影响,本实验利用2-细胞胚胎电融合法制备四倍体胚胎,再对四倍体胚胎进行OPS玻璃化冷冻,分别观察记录二倍体胚胎、四倍体胚胎以及冷冻解冻后四倍体胚胎的发育情况。结果表明:2-细胞胚胎电融合效率为96.1%;二倍体胚胎组与电融合后四倍体胚胎组的囊胚率和孵化囊胚率差异不显著;冷冻解冻后四倍体胚胎的囊胚率(100%)与四倍体新鲜组(93.3%)差异不显著,其孵化囊胚率(72.3%)较新鲜组(64.9%)显著增高(P<0.05);四倍体冷冻解冻组的囊胚细胞数(31.96)与新鲜组(32.54)无显著差异;冷冻解冻后的四倍体早期囊胚进行体外培养时其发育速度比对照组更快。可见,冷冻对小鼠四倍体胚胎的囊胚率和囊胚细胞数均无显著影响,但孵化囊胚率显著提高,且OPS玻璃化冷冻后使四倍体胚胎的发育速度更快。