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根据GenBank登录的绵羊肺腺瘤病毒gag基因序列设计1对特异性引物,经RT—PCR扩增出了276bp的片段。产物经回收与pMD18-TVector连接后转化到基因工程菌DH5a中,提取重组质粒,经PCR及测序鉴定后,作为阳性模板建立SYBRGreenI荧光定量PCR标准曲线,并做敏感性试验、特异性试验、重复性试验和临床检测应用。结果表明,标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,产物Tm在82~82.5℃之间,灵敏度为2.22个拷贝/μL,特异性和重复性较好,较常规RT—PCR方法提前1h出检测结果。本试验建立了检测JSRV的SYBR—GreenI荧光定量PCR方法,为该病的早期快速诊断,并定量分析JSRV感染程度奠定了基础。 相似文献
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