红树内生细菌RS261防治辣椒疫病机理的初步研究

 本研究从菌株内生定殖、促生、抑制和诱导防御酶活性4方面探讨了红树内生细菌RS261菌株防治辣椒疫病的机理。结果表明,该菌株能进入辣椒等多种陆生植物体内定殖,在辣椒体内的定殖时间达26d以上,且对辣椒生长表现有明显的促进作用;抑制作用测定发现,RS261能够分泌产生抗菌物质抑制辣椒疫霉菌丝的生长和游动孢子囊的形成;辣椒体内丙二醛(MDA)含量及防御性酶活测定结果显示,经过RS261培养液处理后,辣椒苗体内丙二醛(MDA)含量和超氧化歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)以及过氧化氢酶(CAT)的活性等均较仅接种疫霉病菌的处理低,但可显著诱导辣椒体内苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性。     

PvEG261对普通菜豆镰孢菌枯萎病抗性和抗旱性的影响

【目的】分析普通菜豆PvEG261的序列及表达模式特征,并研究其抗枯萎病和抗旱功能,为普通菜豆镰孢菌枯萎病抗病和抗旱信号调控网络解析及分子育种奠定基础。【方法】对PvEG261开放读码框(open reading frame,ORF)进行生物信息学分析,预测该基因编码蛋白质的理化性质、二级结构、信号肽序列,在NCBI中通过BLASTP检索高同源性蛋白序列进行序列比对并构建系统发育进化树;利用qRT-PCR技术分析PvEG261组织表达特异性及响应枯萎病原菌、干旱胁迫的表达模式;构建PvEG261过表达载体,转化发根农杆菌K599菌株,诱导普通菜豆产生转基因不定根系,同时构建PvEG261沉默载体,其体外转录产物接种普通菜豆,干扰PvEG261的表达,通过接种镰孢菌枯萎病原菌和干旱处理,观察对照、过表达和基因沉默菜豆植株的表型,进行抗病性和抗旱性鉴定,并测定过氧化氢(H₂O₂)含量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性等生理生化指标。【结果】PvEG261的cDNA序列长471 bp,编码156个氨基酸组成的...     

Expression and Bioactivity Identification of eis Gene of Mycobacterium bovis in Mycobacterium smegmatis

This study was aimed to construct a shuttle expression vector of Mycobacterium bovis(M.bovis) eis gene and identify its bioactivity in recombinant Mycobacterium smegmatis (M.smegmatis). M.bovis eis gene was cloned by PCR and the shuttle expression vector pMV261-Mbeis was constructed, then it was identified by double digestion and sequencing. The recombinant plasmid was transformed into M.smegmatis mc²155 by electroporation. The expression of M.bovis eis gene in M.smegmatis was detected by SDS-PAGE and Western blotting, and the amino acids sequence of the target protein was identified by mass spectrometry. The growth curve of recombinant M.smegmatis mc²155 containing pMV261-Mbeis was successfully constructed.The results showed that pMV261-Mbeis did not affect the growth of M. smegmatis in vitro. The results of SDS-PAGE and Western blotting confirmed that the M. bovis eis gene expressed the eis protein which was about 44 ku in M. smegmatis. Mass spectrometry proved that the protein was the eis protein of M. bovis.The expression vector pMV261-Mbeis was successfully constructed and the expressed recombinant protein was proved to be have biological activities in M. smegmatis, which laid a foundation for the further study of the function of eis protein in M. bovis.     

玉米杂交种吉单261的选育研究

吉单261是吉林吉农高新技术发展股份有限公司于1998年选育的中熟玉米杂交种,组合为W9706×吉853。该品种具有高产、优质、多抗和熟期适宜等优点,适宜我国东北玉米产区推广种植。     

RS261菌株诱导的辣椒抗疫病生理生化特性研究

[目的]为了解RS261菌株诱导辣椒抗疫病的生理生化机理。[方法]测定用RS261菌株处理后的辣椒果内可溶性蛋白、丙二醛（MDA）含量及过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性的变化。[结果]RS261菌株对辣椒果可溶性蛋白含量和防御性酶活性无不良影响。疫霉和菌液＋疫霉2个处理的辣椒果MDA含量及SOD、CAT和POD活性在处理后呈不断上升趋势,只是菌液＋疫霉处理的上升量比疫霉处理的低,而可溶性蛋白含量和PAL活性变化呈现不同趋势,菌液＋疫霉处理的辣椒果内可溶性蛋白含量和PAL活性随时间推移不断上升,而仅接病菌处理却不断下降。[结论]RS261菌株可以在一定程度上消除病原菌对辣椒体内活性氧清除相关酶（SOD、CAT和POD）的酶活性,共同接种后可诱导寄主体内PAL活性的变化,从而提高寄主的抗性。     

牛分枝杆菌eis基因在耻垢分枝杆菌中的表达及其生物学活性鉴定

试验旨在构建牛分枝杆菌eis基因的穿梭表达载体,鉴定其在重组耻垢分枝杆菌中的生物学活性。采用PCR技术扩增并克隆牛分枝杆菌eis基因,构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV261-Mbeis,经双酶切和测序鉴定其正确性,利用电穿孔法将重组质粒转化至耻垢分枝杆菌mc²155中,采用SDS-PAGE和Western blotting技术检测牛分枝杆菌eis基因在耻垢分枝杆菌中的表达,质谱鉴定目的蛋白氨基酸序列。研究结果表明,成功构建了牛分枝杆菌eis基因穿梭表达载体pMV261-Mbeis;生长曲线表明负载重组质粒不会影响耻垢分枝杆菌的体外生长;SDS-PAGE和Western blotting检测证实了牛分枝杆菌eis基因在耻垢分枝杆菌中可表达出分子质量约44 ku的eis蛋白;质谱检测证明了该蛋白即为牛分枝杆菌eis蛋白。本研究构建的牛分枝杆菌eis基因穿梭表达质粒pMV261-Mbeis在耻垢分枝杆菌中具有生物学活性,为下一步研究表达产物eis蛋白的功能奠定了基础。