流行性乙型脑炎病毒E蛋白的截短表达与间接ELISA诊断方法的建立

为建立一种快速检测流行性乙型脑炎病毒抗体的方法,本研究参照已发表的JEV基因组序列,应用RT-PCR扩增了长约1000bp的E基因片段,连接pET30a表达载体中,经诱导后获得了以包涵体形式表达的重组E蛋白。重组蛋白纯化后,经免疫印迹检测证明其具有良好的抗原性和特异性。以该蛋白作为诊断抗原,建立了检测流行性乙型脑炎病毒抗体的E-ELISA诊断方法。该诊断方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,为JEV的快速诊断、免疫猪群抗体监测和JEV流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。     

猪伪狂犬病、猪细小病毒病和猪流行性乙型脑炎检测基因芯片的制备及检测方法研究

对猪伪狂犬病(Pseudorabies virus,PRV)、猪细小病毒病(Porcine parvovirus,PPV)和猪流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis virus,JEV)检测基因芯片的制备及该芯片的检测方法进行了研究。试验克隆和鉴定了16个芯片靶基因,经筛选,取其中13个靶基因PRV gB、gG、TK和gE;PPV NS2、NS3、VP1和VP2以及JEV C、PrM/M、E、NS1和NS5制备PRV、PPV和JEV检测基因芯片,基因芯片点样系统SpotArrayTM 24将靶基因点样于氨基化玻片表面,靶基因最佳点样浓度为200 ng/μL,探针扩增标记反应体系中,Cy3-dCTP使用终浓度为2.5μmol/L,芯片杂交温度可在44℃～60℃之间任意选择。以PRRSV、CSFV、PCV1、PCV2、TGEV、HPS、PAP、E.coli和S.pp菌毒株DNA或CDNA为模板标记制备的探针均不与PRV、PPV、和JEV检测基因芯片杂交,芯片检测的灵敏度为3 pg/μL,芯片批间重复性好,同一张芯片可进行至少10次的重复杂交。该方法对8株PRV、5株PPV和JEV SA14-14-2单独或混合样品检测均为阳性,可区分伪狂犬病病毒野毒和基因缺失疫苗毒,对20份临床样品单独或混合感染的检出率分别为:单独感染PRV检出率15%(3/20),PPV 5%(1/20),JEV 0%(0/20);PRV和PPV混合感染检出率15%(3/20),PRV和JEV混合感染检出率5%(1/20),JEV和PPV混合感染检出率5%(1/20),三者混合感染的检出率5%(1/20)。与PRV、PPV和JEV多重PCR检测方法比较,芯片检测的灵敏度大大提高,同时可区分PRV野毒和基因缺失疫苗毒,对20份临床样品的检出率一致。     

猪乙型脑炎病毒RT-PCR检测方法的建立

根据猪乙型脑炎病毒(JEV)基因序列,设计合成了一对引物,以JEV疫苗株为模板,建立了检测JEV的RT PCR方法。应用该方法对JEV疫苗株RNA进行扩增,获得与预期大小相符,长度为430 bp的特异性目的片段;RT PCR产物测序结果与文献报道的JEV不同毒株的序列同源性达到98%~100%;敏感性测定该RT PCR可扩增到10 pg的JEV-RNA。结果表明,建立的RT PCR方法对JEV的检测敏感性高、特异性强。     

高职日语听力教学改革对策研究

听力是日语学习中的一个瓶颈。高职学生常遇到对听力材料看懂而听不懂的情况,提高学生的听力能力尤为迫切,最关键的是要以丰富的课堂教学为主导,以学生为主体,激发学生的积极性,培养学生的自主学习能力,通过课前、课上、课下的持续努力,全面提升学生的日语听力水平。     

池塘养殖鳗鲡初孵仔鳗生长发育和卵黄消耗的研究

本文初步研究了池塘养殖日本鳗鲡初孵仔鳗生长与卵黄消耗的关系。在水温(24±1)℃下,仔鳗发育至7~8日龄,口、肠道、肛门、胸鳍等器官形成。仔鳗全长与卵黄的关系为:(1)0~18 d仔鳗全长随日龄的增加而有不同程度的增长;其中0~7 d生长快,平均日增长0.57 mm/d,8~10 d,平均日增长0.13 mm/d,11~18 d,平均日增长0.09mm/d;(2)0~10 d,仔鳗以内源性营养方式吸收营养,仔鳗全长与卵黄消耗呈指数相关,可用公式Y=1.5879e1.4371L(R2=0.8979)表示,仔鳗卵黄消耗与日龄可用公式Y=0.0852e-0.5547L(R2=0.9702)表示;10 d后仔鳗卵黄消失。     

日本落叶松林分材种出材量预测模型和出材量表的研究

引用影响林分材种收获量的主要因子胸径、林龄、立地指数为参数,采用多因子综合描述的方法,建立了日本落叶松林分材种出材量预测模型H＝α1D^a2A^a3si^a4,V=α1D^a2H^a3。并在此基础上研制了同一立地等级、不同龄阶下各径阶材种出材量表,该表可为及时准确地掌握林分的材种结构及变化、进行林分材种结构调整、落实限客伐森林面积提供重要依据。     

白花水八角防除技术研究

试验表明:在有水层条件下施药,防除白花水八角效果不佳,但除禾大壮外,对该草均有抑制作用;在无水层条件下施药,试验药剂对白花水八角的防效均较高,其中,以每667m2喷洒0.23kg苯达松或0.13kg苯达松与0.02kg二甲四氯的混剂效果最佳,可使水稻增效达85.37元左右。     

日本双棘长蠹危害宫粉紫荆的情况调查及防治研究

调查了日本双棘长蠹对广西柳州市宫粉紫荆的危害情况,分析总结了日本双棘长蠹在柳州 市危害宫粉紫荆的发生发展特点,并开展药剂防治试验和人工治理探索,提出了有效有综合防治方 法,以期为宫粉紫荆的养护管理和病虫害防治工作提供参考。     

乙型脑炎诊断方法研究进展

乙型脑炎是由黄病毒科的乙型脑炎病毒引起的一种人与动物共患的虫媒病毒性疾病。由于本病对人类和多种动物危害非常严重，因而对其进行确诊很重要。本文对乙脑的病原学和血清学断方法进行了较为全面的综述。