动物病毒性传染病的基本特征

动物病毒病几乎占传染病中的80％，经长期研究和查阅大量文献资料后，发现病毒性传染病具有许多独特的特征，了解掌握这些特征对病毒病的诊断，预防，治疗具有重要的指导作用。     

Viral RNA extraction using an automatic nucleic acid extractor with magnetic particles and genetic characterization of bovine viral diarrhea virus in Tokachi Province,Japan, in 2016–2017

In this study, the viral genome extraction performance of automatic nucleic acid extractors and manual nucleic acid extraction kits was compared. We showed that compared with manual kits, the automatic extractors showed superior genome extraction performance using bovine viral diarrhea virus (BVDV) genome-positive cattle sera and bovine coronavirus/infectious bovine rhinotracheitis virus-spiked cattle nasal swabs. In addition, the subgenotyping of BVDV strains detected in Tokachi Province in Japan during 2016–2017 was performed. Results showed that most of these BVDV strains belonged to subgenotype 1b, while few strains belonged to subgenotypes 1a and 2a. This study showed the high applicability of automatic nucleic acid extractors in extracting multiple viral genomes and the dominant subgenotype of BVDV in Tokachi.     

草地贪夜蛾核型多角体病毒对草地贪夜蛾的毒力及其侵染特征

为明确草地贪夜蛾核型多角体病毒（Spodoptera frugiperda multiple nucleopolyhedrovirus,SfMNPV）对草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda 的毒力及其体内外侵染特性,于室内测定SfMNPV对草地贪夜蛾的毒力,采用苏木精-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色分析SfMNPV侵染后草地贪夜蛾的组织病理学特征,通过实时荧光定量PCR（real-time fluorescence quantitative PCR,qPCR）技术分析SfMNPV在草地贪夜蛾体内和Sf9细胞系中的复制特征。结果表明,SfMNPV对草地贪夜蛾2龄幼虫的LC₅₀和LT₅₀分别为7.39×10⁵ OBs/mL和3.82 d;SfMNPV可侵染草地贪夜蛾幼虫的真皮、气管、脂肪体和中肠等组织,未侵染肌肉组织;SfMNPV侵染96 h后草地贪夜蛾体内SfMNPV基因组拷贝数最大,为3.91×10⁶ 拷贝数/ng,SfMNPV侵染96 h后Sf9细胞培养上清液中SfMNPV基因组拷贝数最大,为2.08×10⁷ 拷贝数/mL。     

新城疫和传染性法氏囊病二联疫苗的免疫效力研究

以LaSota系新城疫(ND)病毒制成ND弱毒疫苗,以含传染性法氏囊病(IBD)病毒VP2基因重组质粒pET28a/VP2的大肠杆菌BL21制成IBD重组活载体疫苗,将ND弱毒疫苗和IBD重组活载体疫苗组建ND-IBD二联疫苗.将试验鸡分成8个组,分别肌肉注射接种ND弱毒疫苗、IBD重组活栽体疫苗和ND-IBD二联疫苗.最后一次接种后第10天,对所有试验鸡进行采血,分离血清,以病毒血凝抑制试验(HI)及琼脂免疫扩散试验检测NDV抗体和IBDV抗体.对NDV HI抗体阳性率进行x2检验及对NDV HI效价进行方差分析,结果对照组与其他4组之间差异均显著(P＜0.05),而试验组(B、C、D、E)4组之间差异均不显著(P＞0.05).对IBDV抗体阳性率进行x2检验及对IBDV沉淀抗体滴度进行方差分析,结果在A、B、F 3组之间差异不显著(P＞0.05),在C、D、G、H 4组之间差异不显著(P＞0.05);而A、B、F 3组与C、D、G、H 4组之间差异显著(P＜0.05).试验表明,在诱导雏鸡体液免疫应答方面,ND-IBD二联疫苗与ND弱毒疫苗和IBD重组活载体疫苗具有同样的效力.     

膳食纤维定义与来源科学共识(2021)

由于环境保护和成本控制的需要,植物性饲料原料在水产配合饲料中的用量越来越高。植物性原料中含有丰富的膳食纤维 (DFs),使许多商品饲料中的DFs达30%以上,但由此带来的对水产动物的生理影响仍鲜受关注。本文介绍了DFs的定义、分类、理化特性、可发酵性及常见植物性饲料原料中DFs的含量,重点介绍了作者及团队在鱼类DFs营养生理方面的研究发现。研究表明,黄颡鱼摄食含20%~30% DFs的饲料后会出现出血、白便、肠炎、腐皮、烂鳃、肝脂肪变性和纤维化、绿肝、白肝、胆囊肿大等症状及暴发性死亡。大口黑鲈和草鱼摄食高DFs饲料后也有相似症状。DFs的致病作用不仅与饲料中DFs含量有关,还与DFs种类有关,果胶对黄颡鱼的致病性比纤维素强得多。DFs的致病机制与其对胆汁酸 (BAs)稳态和肠道微生物稳态的干扰有关。因DFs具有结合BAs的特性,这会阻碍BAs对法尼醇X受体 (FXR)等BAs受体的激活,而FXR负反馈调控BAs的合成并抑制炎症反应,因此,大量DFs进入肠道后就会引起BAs合成亢进,提高组织中BAs水平及其疏水性并干扰BAs循环节律,再由BAs的细胞毒性引起炎症反应和组织坏死。DFs还具有可发酵性,引起肠道微生物结构改变,或由BAs的抗菌作用引起肠道微生物结构改变,进而加剧包括BAs在内的代谢紊乱。DFs的致病性与其他胁迫作用具有叠加效应,加重疾病症状和进展。从DFs的致病机制出发,通过控制DFs摄入种类和摄入量、向饲料中添加BAs及牛磺酸、防止DFs与其他胁迫因子的叠加效应等方式可防控DFs诱导的疾病。本研究首次阐述了DFs过量摄入对鱼类的致病性及其潜在机制,为植物性饲料原料的高值化利用及饲料配制技术优化提供了新视角,为鱼类病害防控提供了新途径。研究结果也提示未来应进一步阐明不同植物性原料中DFs的种类、含量和特性以及水产动物对DFs的耐受范围。

     

鸡传染性支气管炎实验室诊断方法研究进展

传染性支气管炎是鸡的一种重大传染病,临床上无典型的病变特征,诊断较为困难。现有的实验室检测方法有血清学、病原学和分子生物学方法,但该病病原变异复杂,血清型众多,交叉免疫性低,临床上又多采用活毒进行免疫,以至实验室无法对疫苗毒和野毒进行准确区分。为了更好地控制本病,有必要根据临床特点对目前各种检测鸡传染性支气管炎的方法及其优缺点进行分析,为临床寻找一种适合的快速准确的诊断方法、制定合理的免疫程序和发展新型的诊断方法提供参考。     

Association between quantitative bacterial culture of bronchoalveolar lavage fluid and antibiotic requirement in dogs with lower respiratory tract signs

BackgroundHistorically, positive bacterial cultures from the lower respiratory tract (LRT) have been considered clinically relevant when quantitative bacterial cultures of bronchoalveolar lavage fluid (BALF) were >1700 colony forming units (cfu)/mL. However, this threshold might not accurately predict a requirement for antibiotics.ObjectivesTo study whether quantitative BALF bacterial culture results were predictive of antibiotic requirement in dogs with LRT signs.AnimalsThirty‐three client‐owned dogs.MethodsCross‐sectional study. Dogs with positive quantitative bacterial culture of BALF were included. Dogs were divided into 2 groups, depending on whether they had a LRT infection requiring antibiotics (LRTI‐RA) or LRT disease not requiring antibiotics (LRTD‐NRA), based on thoracic imaging features, presence of intracellular bacteria on BALF cytology, and response to treatment. Predictive effect of cfu/mL and BALF total nucleated cell count (TNCC) on antibiotic requirement, adjusting for ongoing or prior antibiotic therapy and age, were studied using logistic regression.ResultsTwenty‐two and 11 dogs were included in the LRTI‐RA and LRTD‐NRA groups, respectively. The cfu/mL was not significantly predictive of antibiotic requirement, independent of ongoing or prior antibiotic treatment and age (LRTI‐RA: median, 10 000 cfu/mL; range, 10‐3 × 10⁸; LRTD‐NRA: median, 10  000 cfu/mL; range, 250‐1.3 × 10⁹; P = .27). The TNCC was not significantly predictive of antibiotic requirement when only dogs with bronchial disease were considered (LRTI‐RA: median, 470 cells/μL; range, 240‐2260; LRTD‐NRA: median, 455 cells/μL; range, 80‐4990; P = .57).Conclusion and Clinical ImportanceThe cfu/mL is an inappropriate measure for determining whether antibiotics are of benefit in dogs with LRT signs.     

鸡传染性喉气管炎病毒PCR快速检测方法的建立

根据GenBank发表的传染性喉气管炎病毒(ILTV)TK基因序列(EF552578),设计合成了1对特异性引物,通过优化反应条件,成功地从ILTV疫苗株中扩增出329 bp特异性片段,而传染性支气管炎病毒、新城疫病毒及马立克病毒基因组均未扩增为出相应的片段。回收的PCR产物经EcoRⅠ酶切和测序鉴定,证实了该扩增片段的特异性。PCR检测ILTV DNA的最小检测量为30 pg。经临床初步应用表明,该方法的建立使传染性喉气管炎病毒的检测更为快速、简便、经济和实用。     

基于网络药理学的人参、红参及黑参抗肺气虚的作用机制与物质基础研究

目的运用网络药理学研究方法探讨人参,红参及黑参抗肺气虚的作用机制与物质基础。方法①通过TCMSP并结合相关文献筛选人参,红参及黑参的化学成分和靶点;②采用人类基因数据库Gene Cards获取慢性支气管炎的相关靶点,再将疾病靶点分别与人参、红参及黑参的靶点取交集;③得到各药物和疾病的共同靶点后在STRING数据库中进行蛋白相互作用分析,利用Cytoscape软件建立药物-成分-疾病-靶点互作网络得到治疗疾病的主要有效成分;④运用计算机R语言分析技术进行GO和KEGG富集分析。结果利用TCMSP及相关文献筛选出各药物的有效成分后根据药物-成分-疾病-靶点互作网络Degree值进行排序,人参中前10种成分为人参皂苷Rh4、Rg5、山柰酚、人参皂苷Rh1、Ra2、三七皂苷R2、三七皂苷R6、人参皂苷Ra0、Ra1、Ra3;红参中前10种成分为人参皂苷Rh4、Rh1、三七皂苷R2、人参皂苷Rg2、Rb1、Rb2、Rc、Re、Rs1、β-谷甾醇;黑参前10种成分为人参皂苷Rh3、Rh4、Rk3、Rk1、Rg5、F4、20(S)-Rh2、20(R)-Rh2、Rh1、Rg3。人参、红参及黑参治疗慢性支气管炎潜在靶点分别为46、39、53个。根据Degree>15筛选得到除三者共同的靶蛋白MAPK1、MAPK8、STAT3、VEGFA、MTOR、MMP9外,还有人参的CASP3,红参的CASP8、BCL2L1,黑参的AKT1、MMP2及MAPK14。通过GO功能和KEGG通路的富集分析,根据P值分别筛选人参、红参及黑参前20个GO条目和前10个KEGG富集通路。三者的GO条目集中在磷酸酶结合、蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性、泛素蛋白连接酶结合等生物学过程;KEGG富集通路集中在PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、流体剪切应力和动脉粥样硬化信号通路、Th17细胞分化等信号通路。结论本文初步阐释了人参、红参及黑参抗肺气虚的作用机制及物质基础。并且根据活性成分及作用机制推测治疗作用黑参>红参>人参。三者可能通过机体免疫应答、炎症反应及细胞增殖与凋亡等生物学过程治疗慢性支气管炎,从而缓解肺气虚证的临床症状,体现出多通路、多靶点的特点。     

表达传染性法氏囊病毒超强毒流行株VP2基因重组新城疫病毒LaSota疫苗株的构建

 【目的】重组新城疫病毒（newcastle disease virus,NDV）作为新型的活病毒载体疫苗具有巨大的优势和应用前景,本研究旨在探讨新城疫病毒作为防制传染性法氏囊病超强毒（very virulent infectious bursal disease virus,vvIBDV）及新城疫重组二联活病毒载体疫苗的可行性。【方法】采用单股负链RNA病毒反向遗传操作技术,救获野生型NDV LaSota疫苗株rLaSota及表达vvIBDV Gx株VP2基因的重组疫苗株rLaSota-VP2,分别经滴鼻点眼途径免疫SPF雏鸡,免疫后21 d分别以vvIBDV Gx超强毒和新城疫强毒进行攻击。【结果】rLaSota及表达vvIBDV－VP2基因平均鸡胚致死时间均大于120 h,脑内致病指数（ICPI）分别为0.4和0.36,静脉内致病指数（IVPI）均为0;接种后72～96 h每毫升尿囊液EID50则分别达到109.0以上。rLaSota-VP2以106.0 EID50一次免疫7日龄SPF鸡雏,免疫后3周对新城疫强毒致死攻击100％保护,对vvIBDV攻击免疫保护率达90％以上。 【结论】重组病毒rLaSota-VP2保持了LaSota亲本疫苗株高滴度的鸡胚生长特性和低致病性及遗传稳定性,免疫雏鸡对新城疫强毒和传染性法氏囊病毒超强毒株的致死均形成有效免疫保护。本研究为研制传染性法氏囊病－新城疫重组二联活载体疫苗奠定了基础。