Quantitative capillary reversed passive latex agglutination test for C-reactive protein (CRP) in the dog

A capillary reversed passive latex agglutination test (capillary RPLA) was developed which allows quantification of serum C-reactive protein (CRP) within approximately 15 min. The logarithmic regression line (calibration curve) obtained after measuring each CRP concentration three times in twofold dilutions of a standard canine serum containing 222 g/ml of CRP was y=6.394+0.030x (r=0.995). Capillary RPLA permitted quantification of CRP in the range 6.9–222 g/ml. The coefficients of variation ranged from 10.28% to 12.40%. The recovery rates (percentage recovery) of CRP by capillary RPLA were within the range 87% to 106%. On measuring the CRP concentrations in sera from 78 dogs by capillary RPLA, single radial immunodiffusion (SRID) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), close correlations were demonstrated between SRID and capillary RPLA (y=7.250+1.109x, r=0.978), between SRID and ELISA (y=3.042+1.059x, r=0.967), and between capillary RPLA and ELISA (y=1.778+0.929x, r=0.962). Capillary RPLA may be considered useful as a routine biochemical technique for measurement of serum CRP concentration in the dog.Abbreviations CRP C-reactive protein - ELISA enzyme-linked immunosorbent assay - RPLA reversed passive latex agglutination test - SRID single radial immunodiffusion     

Effect of Heat‐treatment on Accuracy of Infrared Spectroscopy and Digital and Optical Brix Refractometers for Measuring Immunoglobulin G Concentration in Bovine Colostrum

Background

Heat‐treatment of colostrum is a method developed to reduce calf exposure to pathogens. Infrared (IR) spectroscopy and Brix refractometers can be used for measuring colostral IgG concentration and assessing colostrum quality.

Objectives

To determine the impact of heat‐treatment on accuracy of IR spectroscopy and Brix refractometers for measuring colostral IgG concentration and assessing colostrum quality before and after heat‐treatment.

Animals

A total of 60 Holstein dairy cows on 8 commercial dairy farms.

Methods

A cross‐sectional study was designed to determine the effect of heat‐treatment at 60°C and 63°C each for 30 and 60 minutes duration on colostral IgG concentration measured by the reference radial immunodiffusion (RID) assay, IR spectroscopy, and digital and optical refractometers.

Results

Colostrum IgG concentration significantly decreased after heat‐treatment at 63°C for 30 or 60 minutes as measured by RID, but the IgG values remained unchanged when measured by IR spectroscopy and refractometers. The lowest correlation coefficient found between IR spectroscopy (r = 0.70) and RID results was in colostrum heat‐treated at 63°C for 60 minutes. For digital (r = 0.48) and optical (r = 0.50) refractometers, the lowest correlation coefficient was at 63°C for 30 minutes when compared to RID. The accuracy of the IR spectroscopy, digital and optical Brix refractometers was decreased from 91.7 to 80%, 81.7 to 45%, and 80 to 45%, respectively, when colostrum heat‐treated at 63°C for 60 minutes.

Conclusions and Clinical Importance

Radial immunodiffusion, IR spectroscopy, and Brix refractometers exhibit utility for measuring IgG concentration when colostrum heat‐treated at 60°C but does not detect decrease IgG concentrations when heat‐treated at 63°C.     

Use of Fourier‐Transform Infrared Spectroscopy to Quantify Immunoglobulin G Concentrations in Alpaca Serum

Background

Rapid, economical, and quantitative assays for measurement of camelid serum immunoglobulin G (IgG) are limited. In camelids, failure of transfer of maternal immunoglobulins has a reported prevalence of up to 20.5%. An accurate method for quantifying serum IgG concentrations is required.

Objective

To develop an infrared spectroscopy‐based assay for measurement of alpaca serum IgG and compare its performance to the reference standard radial immunodiffusion (RID) assay.

Animals

One hundred and seventy‐five privately owned, healthy alpacas.

Methods

Eighty‐two serum samples were collected as convenience samples during routine herd visits whereas 93 samples were recruited from a separate study. Serum IgG concentrations were determined by RID assays and midinfrared spectra were collected for each sample. Fifty samples were set aside as the test set and the remaining 125 training samples were employed to build a calibration model using partial least squares (PLS) regression with Monte Carlo cross validation to determine the optimum number of PLS factors. The predictive performance of the calibration model was evaluated by the test set.

Results

Correlation coefficients for the IR‐based assay were 0.93 and 0.87, respectively, for the entire data set and test set. Sensitivity in the diagnosis of failure of transfer of passive immunity (FTPI) ([IgG] <1,000 mg/dL) was 71.4% and specificity was 100% for the IR‐based method (test set) as gauged relative to the RID reference method assay.

Conclusions and Clinical Importance

This study indicated that infrared spectroscopy, in combination with chemometrics, is an effective method for measurement of IgG in alpaca serum.     

胶孢炭疽菌的血清学研究

以4种胶孢炭疽菌的分生孢子为免疫原免疫家兔制备抗血清,采用琼脂双扩散和对流免疫电泳的方法对不同来源的20株炭疽菌进行了免疫学对比研究。结果表明:4种抗血清可分别与15个同种胶孢炭疽菌抗原中的大多数发生阳性反应,而只能与少部分不同种炭疽菌的抗原发生阳性反应。这说明同种的胶孢炭疽菌不同菌株间的亲缘关系较近,而不同种的炭疽菌间的亲缘关系较远。     

鸡血清载脂蛋白AI浓度单向免疫扩散测定法的研究

介绍一种特异、灵敏、简便的蛋鸡血清载脂蛋白AI（apoAI）浓度单向免疫扩散测定法。用磷钨酸镁反复沉淀制备得高密度脂蛋白,经纯化、Bradford法蛋白定量后（3．208mg／mL）,作为新西兰白兔的免疫原及载脂蛋白AI测定的标准。本室免疫所得兔抗鸡apoAI抗血清制成免疫琼脂板,加样培养进行单向免疫扩散测定。本法的标准曲线相关性良好,可信性、重复性满意。     

Normal distribution of immunoglobulin isotypes in adult horses

Studies focusing on the equine humoral response are scarce, with a bias towards the pre- and post-parturition mare and its foal. The present study attempted to expand current knowledge by establishing normal ranges for adult horse serum isotypes. Immunoglobulin (Ig) concentrations were obtained by screening 47 horses of various breeds and in different training regimes. Radial immunodiffusion values (mg/dL) were 196 ± 73 for IgA, 2704 ± 1424 for IgG, 419 ± 220 for IgG(T) and 70 ± 30 for IgM. All values passed the Kolmogorov–Smirnov normality test. The results will be of use to the field veterinarian as well for the basic researcher working on horses.     

The spread ofErwinia carotovora subsp.atroseptica and subsp.carotovora from stem lesions and degenerating seed tubers to progeny tubers in soil

Summary In 1978 and 1979 field experiments were made in which serologically distinct isolates ofErwinia carotovora subsp.atroseptica and subsp.carotovora were inoculated on different dates into stems or seed tubers. The latter had been removed from emerging plants, inoculated and replaced on different dates. Samples of soil and progeny tubers were taken at intervals after inoculation to monitor spread. Progeny tubers were induced to rot and the bacterium responsible was identified by immunodiffusion tests. In 1978 no spread of subsp.carotovora from placement tuber lesions to progeny tubers was detected and spread on one occasion only from stem lesions was detected. Spread of subsp.atroseptica was detected from both inoculum sources. In 1979 spread of subsp.carotovora was detected on eight occasions during the season from placement tubers and on twelve from inoculated stems and for subsp.atroseptica on twenty two and nineteen occasions respectively.

---

Zusammenfassung Im Jahr 1977 zeigten die Ergebnisse eines kleinen Feldversuches, dass nach Inokulation von Stengeln der Sorte King Edward mitErwinia carotovora subsp.carotovora der Organismus von den Stengell?sionen auf die Tochterknollen übertragen werden konnte. Um diese Beobachtung abzusichern, die H?ufigkeit solcher übertragung zu untersuchen und die relative Bedeutung von Stengell?sionen und verfaulenden Pflanzknollen als Quelle des Inokulums zu bestimmen, werden 1978 und 1979 Versuche mit serologisch identifizierbaren St?mmen der Subspeziescarotovora undatroseptica durchgeführt. 1978 wurden zwei Versuchspaare angelegt und in einem Versuch wurden Pflanzknollen (die vorher von den wachsenden Pflanzen weggenommen wurden), inokuliert mit subsp.atroseptica untergeschoben (siehe Lapwood & Harris, 1977) und Stengel der gleichen Pflanzen der Sorte Pentland Crown durch Injektion von Subsp.carotovora unter die Epidermis inokuliert. Im zweiten Versuch jedes Paares, vom ersten durch vier Leerreihen getrennt, waren die Inokulationsstellen umgekehrt. Die Versuchspaare waren von einander durch sechs Leerreihen getrennt und ein Paar wurde durch Beregnung mit ungef?hr 25 mm Wasser zu jedem der drei Termine w?hrend der Vegetationsperiode versorgt (17. Juli und 6. September; der für Mitte August geplante Termin entfiel wegen Regen). 1979 wurde nur ein Versuchspaar angelegt, die Beregnung wurde weggelassen. 1978 wurde an drei Terminen inokuliert (Tab. 1) und 1979 an neun (Tab. 2); die Daten der Probenahme sind ebenfalls in den Tabellen angegeben. Bei der Probenahme wurden aus jeder der drei Wiederholungen von jedem Inokulationstermin (und aus den nicht inokulierten Kontrollparzellen) 2 Pflanzen in nebeneinander liegenden Reihen mit einer, des-infizierten Grabgabel aufgenommen. Die in-okulierte (untergeschobene) Knolle wurde entfernt bevor Bodenproben genommen und fünf Tochterknollen jeder Pflanze geerntet wurden. Das die L?sionen enthaltende Stengelgewebe wurde zur Bestimmung und Isolierung von den Pflanzen abgeschnitten. Die Proben einer Parzelle wurden zusammengefasst und Bodenproben auf das Vorhandensein der Subspezies vonE. carotovora geprüft. Bei den Tochterknollen wurde durch Untertauchen in Wasser die F?ule provoziert und der dafür massgebende Erreger durch den von Vruggink & Maas Geesteranus (1975) beschrieben und von Lapwood & Harris (1980) modifizierten Immun-Diffusiontest identifiziert. Die 1978 mit subsp.carotovora inokulierten Knollen verfaulten sehr schnell, aber das Bakterium konnte weder in den faulenden Tochterknollen noch im die inokulierten Knollen umgebenden Boden gefunden werden, mit Ausnahme am 27. September (inokulier am 29. August) in den beregneten Versuchen. Nach der Inokulation der Stengel konnten die Bakterien schnell aus Stengeln isoliert werden, aus den Tochterknollen aber nur am 14. August (Inokulation am 26. Juli) und niemals aus dem Boden, gleichgültig, ob die Parzellen beregnet waren oder nicht. Die Ergenisse der Stengel-und Knolleninokulation mit subsp.atroseptica für die nicht beregneten Parzellen sind in Tabelle 1 zusammengefasst. Das Bakterium wurde mehrmals in Bodenproben aus der Umgebung der inokulierten Knollen gefunden, jedoch niemals im Boden nahe der Tochterknollen, gleichgültig, ob beregnet wurde oder nicht. Es konnte nur am 24. Juli (beregneter Versuch) und am 7. August (nicht beregneter Versuch) in induzierten F?ulen der Tochterknollen identifiziert werden, wobei die inokulierte Pflanzknolle das Inokulum lieferte, aber in vielen F?llen, wenn das Inokulum vom Stengel stammt. Das Muster der Verbreitung (Abb. 1) zeigt, dass das meiste w?hrend der nassen, kühlen Witterung Ende Juli und Anfang August geschah. 1979 konnte die Ausbreitung der subsp.carotovora w?hrend der Vegetationszeit achtmal von inokulierten Knollen und zw?lfmal von inokulierten Stengeln ausgehend beobachtet werden und bei subsp.atroseptica von 22 bzw. 19 (Tabelle 2); Abb. 1 zeigt, die Ergebnisse im Verh?ltnis zu den Witterungsbedingugen. Die Ergebnisse zeigen, dass in Stengel inokulierte Bakterien darauffolgend in Tochterknollen wiedergefunden werden k?nnen wahrscheinlich durch das Abwaschen und den Transport durch Regen. Stengell?sionen scheinen als Quelle des Inokulums ebenso wichtig zu sein, wie die Pflanzknollen, für subsp.atroseptica in beiden Jahren und für subsp.carotovora 1979. Die Stengell?sionen k?nnen für fast die gesamte Wachstumsperiode eine Quelle des Inokulums darstellen, w?hrend nassfaule Pflanzknollen, die schnell bis auf einen leeren Stengel reduziert sind, ihr gesamtes Inokulum bald entleert haben k?nnen. Zus?tzlich wird die Zerfallsrate der Pflanzknolle vielleicht auch durch das Eindringen von Sekund?r-Erregern beschleunigt, wodurch sowohl der Gehalt an Inokulum und die Dauer seiner Verfügbarkeit begrenzt wird, Bedingungen, die vielleicht weniger bei den Stengell?sionen auftreten.

---

Résumé Les résultats d'une expérimentation au champ, à petite échelle, à Rothamsted en 1977, montraient que lorsqueErwinia carotovora subsp.carotovora était inoculé dans les tiges de la variété King Edward, l'organisme pouvait être transmis à partir des lésions sur tiges, aux tubercules-fils. Pour confirmer cette observation, pour rechercher la fréquence de ce type de propagation et pour déterminer l'importance relative des lésions de tiges et des tubercules de semence pourris comme sources d'inoculum, des expérimentations ont été conduites en 1978 et en 1979 en utilisant une souche identifiée sérologiquement de subsp.carotovora et aussi de subsp.atroseptica. En 1978 deux séries d'expérimentations ont été mises en place et dans la première expérimentation de chaque série, des tubercules de semence (prélevés sur des plantes en culture), inoculés avec subsp.atroseptica ont été introduits (voir Lapwood & Harris, 1977) et les tiges des mêmes plantes de variétés Pentland Crown ont été inoculées avec subsp.carotovora par injection hypodermique. Dans la seconde expérimentation de chaque série, séparée de la première par quatre rangs non plantés, les sites d'inoculation étaient inversés. Les séries d'expérimentations étaient séparées l'une de l'autre par six rangs non plantés et la première série était irriguée par aspersion pour couvrir approximativement un besoin de 25 mm en trois occasions durant la saison (à savoir, 27 Juillet et 6 Septembre; celle prévue à la mi-ao?t n'a pas été appliquée à cause de la pluie). En 1979, seule une série d'expérimentations a été mise en place, l'irrigation ayant été omise. En 1978, il y avait trois date d'inoculation (Tableau 1) et en 1979, neuf (Tableau 2). Les dates d'échantillonnage sont également indiquées dans les tableaux. Pour l'échantillonnage, deux plantes de rangs adjacents sont arrachées avec une bêche désinfectée, à raison de 3 répétitions pour chaque date d'inoculation (et pour les parcelles témoins non inoculées). Le tubercule inoculé était enlevé avant de prendre les échantillons de sol et cinq tubercules fils sur chaque plante. Les tissus de tiges contenant la lésion étaient détachés de la plante pour détermination et isolement. Les échantillons de chaque parcelle étaient groupés. Les sols étaient examinés en ce qui concerne la présence des subsp. d'E. carotovora et les tubercules fils étaient mis à pourrir par immersion dans l'eau et l'agent causal était identifié par la méthode sérologique d'immunodiffusion décrite par Vruggink & Maas Geesteranus (1975) et modifiée par Lapwood & Harris (1980). En 1978, les tubercules inoculés avec subsp.carotovora pourrissaient rapidement mais la bactérie n'a pas été détectée dans les pourritures des tubercules fils induits et dans le sol entourant le tubercule inoculé sauf le 27 Septembre (inoculation du 29 Ao?t) dans l'expérimentation conduite en irrigation. Lorsque les tiges étaient inoculées, les bactéries étaient à nouveau isolables des tiges, mais elles n'étaient retrouvées dans les pourritures des tubercules fils que le 14 Ao?t (inoculation du 26 Juillet) et jamais dans le sol, que les parcelles soient irriguées ou non. Les résultats de l'inoculation des tiges et des tubercules avec subsp.atroseptica sont indiqués dans le Tableau 1 pour la condition non irriguée seulement. La bactérie a été retrouvée de nombreuses fois dans le sol entourant les tubercules inoculés mais jamais dans le sol environnant des tubercules fils que les parcelles soient irriguées ou non. Elle est retrouvée dans les pourritures des tubercules fils induits seulement le 24 Juillet (conditions irriguées) et le 7 Ao?t (condition non irriguée) lorsque le tubercule de semence inoculé était la source d'inoculum, mais dans de nombreuses occasions lorsque l'inoculum provenait de la tige. Le modèle indique (fig. 1) qu'il y avait plus de propagation par temps humide et frais de fin juillet et début ao?t. En 1979, la propagation de subsp.carotovora était mise en évidence à neuf reprises durant la saison à partir des tubercules inoculés et en 12 occasions à partir des tiges inoculées et celle de subsp.atroseptica dans 22 et 19 occasions respectivement (Tableau 2); les résultats sont en relation avec les param⪻tres climatique dans la fig. 1. Les résultats montrent que les bactéries inoculées aux tiges peuvent être retrouvées dans les tubercules fils, probablement à cause du lessivage et du transport par la pluie. Les lésions de tiges apparaissent comme était aussi importantes que le tubercule de la semence en tant que source d'inoculum pour subsp.atroseptica pour les deux années et pour subsp.carotovora en 1979. Les lésions de tiges peuvent être une source d'inoculum persistante durant la saison de culture du fait que les tubercules de semence sont atteints de pourriture molle. Ces lésions peuvent rapidement se limiter à une tige détruite et ainsi éliminer rapidement leur inoculum. De plus, le niveau de dégradation des tubercules de semence peut être accru par l'intervention d'organismes secondaires qui limitent à la fois le taux d'inoculum produit et la durée de sa disponibilité, conditions moins vraissemblables peut être d'apparaitre avec les lésions sur tiges.

     

Caractérisation directe deRhizoctonia solani Kühn AG3 à partir de sclérotes sur tubercules de pomme de terre par deux méthodes sérologiques

Résumé Les antisérums sont obtenus en immunisant deux lapins par voie intraveineuse avec des antigènes purifiés par chromatographie d'échange d'ions. On utilise deux préparations d'extraits mycéliens: normale et chauffée. La spécificité des anticorps obtenus est appréciée sur différentes souches deRhizoctonia. Deux techniques sérologiques sont utilisées: immunodiffusion et ELISA indirect. Les deux immunsérums obtenus présentent la même spécificité vis-à-vis du groupe AG3. Les deux techniques permettent la reconnaissance du groupe AG3 à partir des sclérotes formés sur tubercules.

---

Summary Total mycelial extract ofR. solani AG3 was purified by ion-exchange chromatography. Beforehand part of the extract was heat-treated at 60°C for 10 min (Ch) and the rest left untreated (N). Results of the chromatographic analysis are given in Fig. 3. Electrophoretic analysis of the peak fractions is shown in Fig. 2. Peak C was chosen as antigen for the preparation of the two antisera by intravenous injections in two rabbits. Antibodies obtained were titrated in both cases by immunodiffusion and in indirect ELISA (Fig. 4). Specificity was examined by immunodiffusion and ELISA on heat-treated extracts of reference strains listed in Table 1. Similar results were obtained for the two antisera which were both specific to AG3 (Fig. 1 and Table 2). Characterisation tests were done by the two methods directly on sclerotia of tubers of different cultivars and origins harvested in 1991 (Table 3). The purified antigens appeared to be of a complex nature (peptides-polysaccharides) and were very immunogenic. Antibodies raised against them were sufficiently specific as to allow the identification ofR. solani AG3 sclerotica on tubers.