猪瘟抗体免疫金标试纸条在预防猪瘟中的应用

目前监测猪瘟抗体的检测方法主要有ELISA试验、正向间接血凝试验和免疫金标试纸条试验。ELISA试验，操作条件严格，在实验过程中使用了有毒的显色底物溶液，操作步骤程序多，从试剂的配制到实验结果的出现需2～3d，且费时费力，不具有快速、简便的方法原理；正向间接血凝试验，从操作至结果出现的时间为1．5～2h，虽有快速的特点，但试验用的诊断液     

猪流行性腹泻病毒胶体金检测方法的建立

应用胶体金免疫层析技术,建立了一种快速检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体m Ab-PEDV1C12和(m Ab)-PEDV2C11,并将m Ab-PEDV2C11和羊抗鼠Ig G抗体喷在硝酸纤维素膜上分别作为检测线和质控线,对pH值、抗体浓度、封闭时间等条件摸索与优化。测试结果表明,该猪流行性腹泻病毒快速检测试纸条的检测下限达到310个TCID50的病毒量,检测时间为10 min,批内和批间重复性为100%。结论:该方法使用简单快速,适合猪场检测猪流行性腹泻病毒。     

两种诊断制品对临床样品中布鲁氏菌抗体的检测比较

本研究以国家标准《动物布鲁氏菌病诊断技术》(GB/T 18646-2018)中的试管凝集试验方法为确诊金标准,对353份临床牛、羊和猪血清样品进行确诊,然后分别采用虎红平板凝集试验抗原和抗体检测试纸条,对该353份临床血清进行检测,比较两种诊断制品在布鲁氏菌病初筛中的差异。经统计分析发现,虎红平板凝集试验抗原敏感性为100%(23/23),特异性为97.88%(323/330),与确诊结果间的Kappa值为0.86;布鲁氏菌抗体检测试纸条敏感性为100%(23/23),特异性为99.39%(328/330),与确诊结果间的Kappa值为0.95,两种方法的重复性试验结果均一致。试验结果证明,布鲁氏菌抗体检测试纸条和布鲁氏菌虎红平板凝集试验抗原都能满足布鲁氏菌病初筛的需求;由于布鲁氏菌抗体检测试纸条的储存、运输和操作的便捷性,在部分地区或特殊环境下可替代布鲁氏菌虎红平板凝集试验抗原用于布鲁氏菌病初筛。     

番茄环斑病毒和烟草环斑病毒复合型胶体金免疫层析试纸条的研制

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记番茄环斑病毒和烟草环斑病毒的兔多克隆抗体,用微定量喷头在硝酸纤维素膜上喷好2条病毒检测线（T线）和1条羊抗兔抗体质控线（C线）,制成复合型免疫层析检测试纸条。一张试纸条在10min内,可同时检测出这两种病毒。试纸条检测番茄环斑病毒和烟草环斑病毒粗提纯液,检测灵敏度在1μg/mL,试纸条检测番茄环斑病毒和烟草环斑病毒的混合病汁液可稀释1000倍（重量/体积）。用健康叶片和缓冲液对照测试,试纸条结果都为阴性。     

引起浙贝母黑斑病的交链格孢单抗及检测试纸条的制备

浙贝母黑斑病是危害浙贝母茎叶的重要真菌性病害之一, 该病侵染叶片产生叶斑?叶枯, 严重时全株枯死?本研究制备了针对浙贝母黑斑病致病菌交链格孢Alternaria alternata的单克隆抗体(单抗), 并开发了胶体碳免疫层析试纸条用于黑斑病早期精准检测?以交链格孢提取液免疫Bal b/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备单抗, 间接ELISA法和Western blot分析单抗的效价?灵敏度?特异性?抗体类型及结合蛋白?以双抗夹心法制备胶体碳免疫层析试纸条?得到3种针对交链格孢的单抗及其杂交瘤细胞株AaA1?AaC2和AaC5?3种单抗对交链格孢均具有高度特异性, 灵敏度为12.21~24.41 ng/mL, 效价≥6.40×105, 抗体类型分别为IgG2a?IgG3和IgG3, 结合蛋白的分子量分别为37?62 kDa和66 kDa?以AaA1为碳标单抗, AaC2为划膜单抗的胶体碳试纸条检测交链格孢的方法快速简便?准确灵敏?经济环保?从田间采样到出结果用时少于15 min, 样品简单研磨后取汁液加入加样孔即完成全部操作, 对交链格孢抗原的检测灵敏度为6.25 μg/mL, 试纸条采用环保材料制备, 单个试纸条的成本约1.7元?     

纳米酶免疫层析试纸条法检测玉米褪绿斑驳病毒

[目的]建立纳米酶免疫层析试纸条(Nanozyme Immuno-chromatographic Strip Assay,NISA)检测玉米褪绿斑驳病毒方法.[方法]采用双抗夹心法,将纳米酶标记的鼠抗体IgG与McmV结合后,再与硝酸纤维素膜质控线上的鼠抗体结合,二氨基联苯胺(Diaminobenzidine,DAB)...     

大肠杆菌O157：H7荧光纳米颗粒试纸条的研制

建立大肠杆菌O157：H7荧光纳米颗粒免疫层析法。方法：首先将荧光纳米颗粒与大肠杆菌O157：H7单抗共价偶联,制成大肠杆菌O157：H7单抗-荧光纳米颗粒偶联物。用该偶联物代替金标颗粒,以双抗体夹心作为反应模式来制备大肠杆菌O157：H7免疫层析试纸条。在紫外灯下观察免疫层析试纸条上经免疫反应而产生的质控线和检测线上的荧光信号,并利用荧光强度来半定量检测大肠杆菌O157：H7。结果：用所制备的试纸条对11属24种54株菌进行检测,所有27株大肠杆菌O157：H7的检测结果呈阳性．其它非大肠杆菌O157菌株检测结果呈阴性。用该试纸条检测人工污染的鸡肉样品。灵敏度为2．7×10^4CFU／mL。通过观察检测线的有无。可对大肠杆菌O157：H7进行半定量检测。分别用所制备的大肠杆菌O157：H7免疫层析试纸条和标准法检测57份样品,2种方法的总符合率为80．7％。结论：大肠杆菌O157：H7荧光纳米颗粒检测试纸条的研制成功,为大肠杆菌O157：H7的快速检测提供了一个极好的检测方法．便于野外检测的开展．具有广阔的应用前景。     

一种杂色曲霉素胶体金免疫快速检测试纸条的研制

通过制备杂色曲霉素半抗原,研制出一种能够检测饲料中杂色曲霉素的胶体金免疫层析试纸条,检测限为1μg/kg,检测时间仅为15 min,假阳性率和假阴性率均为0,符合《农残办技术材料要求及审查程序》要求.试纸条能够在基层实验室的大批量样本检测中得到应用,具有实际意义,并且未见胶体金免疫层析法的相关文献报道,具有创新性.     

Development of Nucleic Acid Lateral Flow Immunoassay Detection Method for Foot-and-mouth Disease Virus

In this article, through the combination of nucleic acid probes and immune chromatography, a simple, sensitive and specific detection system——nucleic acid lateral flow immunoassay (NALFIA) for amplifing foot-and-mouth disease virus (FMDV) 3D RT-PCR products was established.An ultrasensitive nucleic acid biosensor (NAB) based on streptavidin-labeled gold nanoparticles dual labels and lateral flow strip biosensor (LFSB) were used in this system.The biotinylated goat anti-rabbit IgG was marked to the NC membrane as the alleged strip and the anti-digoxin antibody was labeled to the NC membrane to capture the digoxin probe.After assemblying gold-labeled strip and detecting RT-PCR products, the detection limit of NALFIA was 0.3×10^-3 to 3×10^-3 μg/μL.The NALFIA was compared with agar gel electrophoresis analysis, the results showed that the sensitivity of NALFIA was higher than agar gel electrophoresis.There was an excellent agreement between the two methods.NALFIA was a method with high sensitive, low cost and short time.In conclusion, this method provided a good alternative to detect FMDV.