鸡毒霉形体HS株pMGA多基因族的研究

鸡毒霉形体（Mycoplasma gallisekpticum,GM)基因组中存在着编码细胞表面血凝粘附素蛋白（protein of Mycoplasma gallisepticum adhesin,pMGA)相关基因组的多基因族。为筛选出含有完整的pMGA基因片段，并估算出鸡毒霉形体HS株基因组中pMGA多基因族的基因数，本试验以pUC18为载体，用EcoR I限制性内切酶构建了鸡毒霉形体HS株的基因组文库。根据pMGA基因引导序列的保守区和pMGA基因间隔区的序列，人工合成了2个寡核苷酸探针（探针I、探针Ⅱ），经标记后，双筛选所建的基因文库，从600个转化子中共得到的38个含有pMGA基因的阳性克隆子，选其中1个7．5kb的片段（17号阳性克隆子，W17），用4种限制性内切酶（EcoR I,Hind Ⅲ，Pst I,Bgl Ⅱ）酶切消化，绘制了该片段的物理图谱。该片段酶切产物经电泳、转膜后与探针I和探针Ⅱ杂交，发现2个探针杂交图谱基本相同，根据杂交带及放射信号的强度值，估测出该片段含有4个pMGA基因，以这个片段所含的pMGA基因数为标准，估算出鸡毒霉形体HS株含有39个pMGA基因。     

鸡毒支原体研究概况

鸡毒支原体(MG)是对养禽业危害很大的支原体,主要导致禽类慢性呼吸道疾病(CRD),以禽的结膜炎、产蛋率及饲料转换率下降、屠宰率下降等为主要特征。MG可通过垂直和水平传播方式在鸡群中传播,每年给全球家禽产业带来巨大经济损失。随着对MG细胞表面抗原黏附素蛋白(pMGA)和PvpA、GapA的结构与功能研究的深入,K株、TG5株等MG疫苗研究也取得较大进展。由于抗生素的滥用,MG基因中也发生耐药突变,产生了QRDRs等抗药结构,导致MG在耐药性上也出现新的特点。论文主要对国内外MG的疫苗开发、耐药情况和检测技术等进行综述,旨在对家禽MG的综合防控提供借鉴。     

浅析喷雾免疫在预防鸡毒支原体病上的应用

鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)是引起禽类慢性呼吸道病的主要病原微生物。本文就喷雾免疫在预防鸡毒支原体病上的应用进行综述。     

几种动物病原菌对替米考星耐药性的体外诱导

在测定替米考星对鸡毒支原体、多杀巴氏杆菌和猪胸膜肺炎放线杆菌的最小抑菌浓度基础上,采用药物浓度递增法体外诱导3种病原菌对替米考星的耐药性。结果鸡毒支原体经9次传代对替米考星产生了高水平耐药,多杀巴氏杆菌经7~9次传代对替米考星产生了高水平耐药,猪胸膜肺炎放线杆菌经14次传代对替米考星的耐受浓度未发生明显变化;鸡毒支原体和多杀巴氏杆菌替米考星诱导耐药株对红霉素、阿奇霉素、泰乐菌素、吉他霉素和林可霉素表现交叉耐药。研究结果提示,替米考星较易诱导鸡毒支原体和多杀巴氏杆菌产生耐药性,兽医临床应合理应用。     

鸡毒支原体DNA限制性内切酶分析

应用限制性内切酶ＢａｍＨＩ,ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ消化鸡毒支原体ＤＮＡ,其电泳图谱能区别鸡毒支原体各株,比十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）更敏感,表明限制性内切酶分析为鉴别鸡毒支原体毒株,进行分子流行病学调查及确定在商品代鸡中是否疫苗株代替了ＭＧ野毒株提供了非常有用的工具。     

氟罗沙星对禽败血霉形体（Mycoplasma gallisepticum）病的药效研究

体外抑菌试验测得氟罗沙星（Ｆｌｅｒｏｘａｃｉｎ）对禽败血霉形体（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｇａｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍ）的最小抑菌浓度（ＭＩＣ）为０．０１５ｍｇ／Ｌ。体内药效试验表明,氟罗沙星以２５、５０、１００ｍｇ／Ｌ饮水给药和以５、１０、１５ｍｇ／ｋｇ肌注给药（１次／ｄ）,连续用药５ｄ,对人工气囊接种禽败血霉形体培养液（０．２ｍＬ,约含１０８ｃｆｕ）的雏鸡,保护率均为１００％（３０／３０）,而感染不给药组雏鸡存活率为９３．３％（２８／３０）;相对增重率分别为９０．８％、９１．５％、９２．３％和９１．５％、９１．８％、９２．９％,显著高于感染不给药组（７３．２％）;气囊损伤分分别为２．９３、２．６２、０．９３和１．８、１．１、１．０,而感染不给药组为６．５７,差异显著（Ｐ＜０．０５）;血清玻板凝集试验阳性率分别为２０％（２／１０）、１０％（１／１０）、０（０／１０）和３０％（３／１０）、１０％（１／１０）、１０％（１／１０）,均极显著低于感染不给药组１００％（１０／１０）（Ｐ＜０．０１）。氟罗沙星不同给药途径及不同剂量间药效差异不显著。     

鸡毒支原体特异膜抗原的制备

采用 Ｓ Ｄ Ｓ聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化鸡毒支原体膜蛋白。选择切取１１０ Ｋ Ｄ、９８ Ｋ Ｄ、６６～６２ Ｋ Ｄ 和５６ Ｋ Ｄ 特异蛋白条带，以 Ｐ Ｂ Ｓ（ｐ Ｈ７．４）浸泡过夜，浸出液置于透析袋封口，透析袋外散布 Ｐ Ｅ Ｇ（ Ｍ ＝ ６ ０００）浓缩膜抗原后获得特异膜抗原，为鸡毒支原体特异诊断方法的建立和单克隆抗体的制备奠定了基础。     

鸡败血霉形体F—36株的稳定性测定

以试管培养基中连续继代 ３６ 次的鸡败血霉形体 Ｆ３６ 定为疫苗制造的起始代次，将其在人工培养基中再传 ４、６、８、１０、１４ 代（简称 Ｆ４０、 Ｆ４２、 Ｆ４４、 Ｆ４６、 Ｆ５０），分别制成疫苗，各接种 ８ 日龄和 ３０ 日龄雏鸡，作免疫原性和病原性测定，观察 Ｆ株的稳定性。病原性测定结果表明，各代次疫苗以 ２～３ 倍的免疫剂量接种感染，不引起鸡的呼吸道症状和气囊炎，对鸡不致病；免疫原性测定结果表明，用各代次疫苗接种鸡都能产生良好的免疫力，能有效地抵抗强毒 Ｒ 株的攻击，保护气囊不受损伤。     

鸡毒霉形体HS株pMGA多基因族序列分析

用限制性核酸内切酶对鸡毒霉形体(MG)HS株基因文库中经初步估测可能含有的4个鸡毒霉形体粘附蛋白(protein of Mycoplasma gallisepticum adhesin,pMGA)基因的MgW17重组质粒进行了不同组合的酶消化,根据消化片段的大小及酶切位点绘制了7.5kb外源片段的物理图谱;然后根据所得的物理图谱,选用Pst I和EcoR I将MgW17外源片段酶解成1.3、2.0、4.2 kb 3个部分,将它们分别亚克隆到SK(十)质粒上,得到了3个亚克隆子SGp100、SGp200、SGp300.使用核酸外切酶Ⅲ缺失法构建缺失子系列,经序列分析后得到MgW17外源片段的全部序列.序列全长7 434 bp,中间含有2个完整的pMGA基因和另2个不完整的pMGA基因的首部和尾部,分别将它们顺次命名为H-pMGA1.1、H-pMGA1.2、H-pMGA1.3和H pMGA1.4.2个完整的pMGA基因的阅读框长度分别为1 967 bp(1.2)和2039 bp(1.3);H-pMGA1.1首部不完整的阅读框的长度为720 bp,尾部不完整的H-pMGA1.4的长度为1 752 bp.将H-pMGA基因与已报道的MG.S6株、F株的pMGA基因进行了比较,探讨了pMGA基因在不同MG菌株中的相似性、基因启动子结构的差异、间隔区内GAA重复序列对转录调控的影响等.     

以重组PvpA蛋白作为抗原的鸡毒支原体抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立鸡毒支原体(MG)种特异性检测的间接ELISA检测方法,本研究以原核表达的PvpA蛋白作为包被抗原,初步建立了检测MG抗体的间接ELISA检测方法.特异性试验结果表明,重组PvpA蛋白与鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、滑液支原体、大肠杆菌“O”抗原、禽沙门氏茵“O”抗原阳性血清均不发生交叉反应.该方法的批内变异系数小于8％,批间变异系数小于11％,表明具有较好的重复性.采用该检测方法与进口试剂盒对不同省份送检的鸡血清进行检测比较,两者阳性和阴性符合率均达到90％以上.本研究建立的间接ELISA检测方法为MG抗体检测试剂盒的研制奠定了基础.