青海血蜱不同发育阶段蛋白分析

考虑到不同发育阶段蛋白多肽及抗原特性方面的差异,本实验利用SDS-PAGE和Westernblotting对青海血蜱的卵、幼蜱、若蜱、成蜱的蛋白进行了分析。SDS-PAGE结果显示,卵出现了7条主带,幼蜱出现了16条主带,若蜱出现了14条主带,成蜱出现了12条主带。它们的蛋白多肽在数量、含量和分子量上存在差异,共同带只有4条,但相邻发育阶段之间的共同带较多。用感染羊血清和免疫羊血清作免疫印迹时,感染羊血清在分子量5.6万处有明显的反应带,免疫羊血清在分子量9.7万处有明显的反应带。     

猪肺炎支原体膜蛋白的电泳分析及免疫印迹检测

以猪肺炎支原体Z株为试验材料,采用SDS-PAGE和Western印迹对该菌膜蛋白进行了分析。研究表明:猪肺炎支原体经A_(26)液体培养基培养,15000 r/min离心收集菌体细胞,低渗超声法破膜获得膜制剂后,应用12.5％的凝胶对膜蛋白进行SDS-PAGE分离,在电泳图谱上呈现出36条蛋白带,相对分子质量范围为1.18×10~4～9.12×10~4。同时以膜制剂作为抗原,分4次免疫试验兔,心脏采血,提取抗血清,并分离纯化得到IgG,然后进行Western印迹法检测。其结果发现在SDS-PAGE分离得到的36种膜蛋白(或多肽)中,有6种蛋白具有免疫原性。     

苹果退绿叶斑病毒组织印迹的免疫法检测与定位

用组织培养技术将富士苹果茎尖外植体建立在ＭＳ培养基中,形成试管苗。取４—６周龄的茎与愈伤组织,徒手切取约１ｍｍ厚的横切面,印迹在硝化纤维膜上。印迹组织经封闭后,与ＣＬＳＶ碱性磷酸酶标抗体反应。对反应结果进行显色。感染ＣＬＳＶ的印迹组织呈紫色反应,正常组织无显色反应。结果表明,该方法十分容易检测印迹组织中的ＣＬＳＶ。带毒愈伤组织较茎的显色反应敏感,显色反应时间仅为茎的一半（１５ｍｉｎ）。ＣＬＳＶ在愈伤组织中有两种分布情况：一是所有组织均有显色反应;二是呈不均匀分布。ＣＬＳＶ在茎组织中有三种分布情况：第一,除髓部外,表皮、皮层及维管系统中均有分布;第二,不均匀分布,ＣＬＳＶ集中分布于表度组织中,在皮层及韧皮部仅有少量分布;第三,“嵌合”分布,即同一种组织中部分组织带毒,部分为正常组织。     

South-Western blot mapping方法的建立及其应用于锥虫细胞核中DNA结合蛋白的观察

South-Westerm blot mapping是一种结合Western blotting和Southern blotting某些特点的方法.本文介绍用其成功地观察到锥虫核蛋白中DNA结合蛋白的情况,并对一个分子量在40000左右、于较严谨条件下与DNA结合的核蛋白进行了特性鉴定.该蛋白等量地存在于锥虫的前循环期和血液期,对双链DNA有较大的亲和力,并能与酵母菌复制起始片段结合.本文还介绍了锥虫细胞核的提取技术和核蛋白的制备技术.     

‘新红星’苹果果实蔗糖合酶的活性及亚细胞定位

 在‘新红星’苹果果实发育过程中, 伴随果糖、葡萄糖和蔗糖的积累, 蔗糖合酶的分解活性逐渐下降, 而合成活性逐渐升高。苹果果实的蔗糖合酶由分子量为90 kD 的亚基组成, 其免疫信号强度随发育进程而增加。蔗糖合酶主要定位于果肉细胞的细胞质中, 发育中后期该酶的分布密度有一定增加。综合结果认为, 蔗糖合酶调控发育早期蔗糖的降解和发育后期蔗糖的积累。     

鱼肠道弧菌免疫检测方法的研究

采用灭活的鱼肠道弧菌作为抗原,制备兔抗血清,建立了鱼肠道弧菌的间接荧光抗体检测技术(indirect im-munofluorescence assay test,IFAT)、Western-blotting免疫印迹检测技术。IFAT结果显示阳性信号覆盖整个菌体,明亮,清晰,荧光信号呈长弧形且两端钝圆,与鱼肠道弧菌形状一致。Western-blotting结果显示共10条蛋白带发生免疫反应,其中6条蛋白带结果较清晰,显示出较强的特异性免疫反应,阴性对照组无条带。IFAT和Western-blotting结果说明所建立检测方法能够准确、快速的检测出鱼肠道弧菌。     

鳖源嗜水气单胞菌M-96株表面抗原分析

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、免疫印迹技术分析嗜水气单胞菌Ｍ－９６株表面抗原,表明该菌体表面抗原是由分子量为３０ＫＤ、３３ＫＤ、３６Ｋ和３９ＫＤ的蛋白质和脂多糖组成,其中部分对胃蛋白酶敏感。     

甘草总黄酮对高脂条件下罗非鱼肝损伤的保护作用

为了研究甘草总黄酮对高脂饲料造成的罗非鱼(Oreochromis niloticus)脂肪肝损伤是否具有保护作用,随机将180尾健康无伤罗非鱼分成6组,即对照组、高脂饲料模型组和4个不同浓度甘草总黄酮组(0.05、0.10、0.50、1.00 g·kg^-1甘草总黄酮),每组30尾。饲喂90 d后,采集罗非鱼各实验组肝,测定肝匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)活性、丙二醛(MDA)含量、甘油三酯(TG)含量、总胆固醇(TC)含量、总抗氧化能力(T-AOC)水平,Western blotting法检测肝中核转录因子-κB P65(NF-κB P65)和核转录因子-κB C-Rel (NF-κB C-Rel)蛋白表达水平,RT-PCR法测定肝中微粒体甘油三酸酯转移蛋白(MTTP)和载脂蛋白B100(ApoB100)基因表达情况。结果表明:与对照组相比,高脂饲料模型组罗非鱼肝匀浆中TG、TC、MDA含量极显著(P<0.01)升高,GSH活性、SOD活性、T-AOC水平均极显著(P<0.01)降低;MTTP和ApoB100 mRNA表达水平降低(P<0.01或P<0.05);Western blotting结果显示,NF-κB P 65和C-Rel蛋白表达水平升高。饲料中加入甘草总黄酮后,与高脂饲料模型组相比,罗非鱼肝中GSH活性、SOD活性、T-AOC水平不同程度提高,TC、TG、MDA含量和NF-κB P65、C-Rel蛋白表达水平不同程度降低,MTTP和ApoB100的mRNA表达水平升高,以0.50 g·kg^-1甘草总黄酮组效果较好。说明甘草总黄酮对于罗非鱼脂肪肝损伤具有一定的保护作用,可以缓解高脂饲料造成的脂肪肝损伤。     

杜氏盐藻MAPKK激酶基因DsMAPKKK的克隆、原核表达与纯化

为了进一步研究MAPKK激酶的生理功能,利用RT-PCR技术扩增了DsMAPKKK的开放阅读框序列,并利用T4连接酶与质粒pGS21a连接,构建了原核表达载体pGS21a-DsMAPKKK。将该重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导成功表达了融合蛋白。经SDS-PAGE检测,融合蛋白在上清和包涵体中均存在。可溶性蛋白经过GST柱纯化,电泳分析结果表明,在68kD左右有单一的蛋白条带,说明融合蛋白得到有效纯化。蛋白印迹结果显示在68kD左右有明显的杂交条带,初步证明纯化的蛋白就是带有GST标签的MAPKK激酶。DsMAPKKK的成功表达与纯化,为深入探讨DsMAPKK激酶的性质及功能打下了坚实的基础。     

一个新的水稻生育期延迟T-DNA插入突变体

从水稻突变体库中筛选到一个生育期延迟突变体,主要表现为生育期延迟、植株矮化、叶色变深、叶角张大、根系变短。遗传分析表明该突变体受1对隐性单基因控制。对突变体及其后代分离群体做Basta抗性检测,证实该突变体是由T-DNA插入引起的,突变性状与T-DNA共分离。PCR和Southern杂交结果进一步证实了上述观点。该材料可用于插入座位的基因克隆和生育期调控机理的研究。