抗菌肽CM与haFGF改构体融合基因的构建与表达

构建重组改构体aFGF28-154和抗菌肽CM基因的融合基因,使其在大肠杆菌系统中融合表达,以期获得具有靶向FGFR高表达肿瘤细胞的抗肿瘤融合蛋白.利用PCR引物延伸的方法拼接得到带有G4S铰链的天蚕素-蜂毒素杂合肽CM与aFGF28-154的融合基因,插入大肠杆菌表达载体pET20b中,构建表达质粒pET-CM-aFGF28-154,并转化至大肠杆菌BL21(DE3),氨苄青霉素抗性筛选重组转化子.IPTG诱导4 h后,菌液经超声破碎,以包涵体形式表达的融合蛋白约占菌体总蛋白的18%.将包涵体溶解并通过差速离心除去部分杂蛋白,透析复性并用Heparin Sepharose CL-6B亲和层析,目的蛋白得到初步纯化,为进一步研究蛋白的生物学活性奠定了基础.     

aFGF植物表达载体构建及转化紫花苜蓿的初步研究

主要将aFGF基因按照植物偏爱的密码子进行基因优化,同时加上信号肽、6-组氨酸标签及凝血酶切割因子,合成全基因,再将基因插入到改造的TΩ4AB质粒中,将aFGF基因和质粒上的增强子、启动子、Ω序列及ployA加尾序列双酶切,命名为TΩ4AB-aF,将TΩ4AB-aF插入到pBI121载体中命名为pBI121-TΩ4AB-aF。利用三亲融合法将pBI121-TΩ4AB-aF转入到农杆菌菌株LBA4404中,转化苜蓿。转基因苗用卡那霉素进行筛选;并对抗性苗进行PCR、RT-PCR、Western Blot检测。结果表明,aFGF在苜蓿中得到表达。为苜蓿作为植物生物反应器奠定理论基础。     

酸性成纤维细胞生长因子的分离纯化及活性分析

以瞬时表达酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)的豌豆(Pisum sativum L.)为试验材料,提取豌豆中可溶性总蛋白质,利用Western blot方法检测目的蛋白质,结果表明豌豆可成功表达aFGF;采用肝素亲和柱层析法分离目的蛋白aFGF,并用MTT法检测aFGF的生物学活性,结果表明豌豆中表达的酸性成纤维细胞生长因子具有促细胞分裂活性.     

成纤维细胞生长因子（FGFs）对小鼠实验性创伤愈合的作用

实验利用酸性和碱性成纤维细胞生长因子（ａＦＧＦ和ｂＦＧＦ）,分别对小鼠进行实验性创伤修复试验。结果表明,ａＦＧＦ和ｂＦＧＦ对创伤愈合有显著的促进作用,而且ａＦＧＦ的效果优于ｂＦＧＦ。     

酸性成纤维细胞生长因子与肿瘤细胞生长的相关性

将 p RSV- a FGF(含 a FGF基因的劳斯肉瘤病毒载体 )与 HL - 6 0细胞 (人急性早幼粒细胞白血病细胞系 )悬液直接转移至裸鼠背部肌肉 ,11d后出现了可视肿瘤。比较病理学观察结果显示 ,试验组肿瘤组织内血管再生明显增多 ,2例裸鼠肝脏出现转移性 HL- 6 0细胞 ,表明酸性成纤维细胞生长因子 (a FGF)具有促进肿瘤组织内血管形成的作用 ,从而促进了 HL - 6 0细胞生长与转移。提示应用 FGF抗体对抑制肿瘤的生长与转移可能有一定的作用     

丹参联合aFGF对新生缺氧缺血性脑损伤大鼠大脑的保护作用

目的观察丹参联合酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对新生缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠大脑的保护作用,旨在为该病临床药物治疗提供理论依据。方法制作新生HIBD大鼠模型后给予丹参、aFGF和丹参 aFGF,观察血清中超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的水平变化;计数病变大脑组织中血管内皮生长因子(VEGF)阳性细胞数、新生血管和脑皮层的凋亡细胞数。结果(1)空白对照组中NO和iNOS含量明显增多,使用丹参后NO和iNOS下降,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。(2)正常对照组和空白对照组中新生血管数和VEGF阳性细胞数少,使用aFGF后两者明显增多,丹参 aFGF组两者数量增多,与丹参组及aFGF组比较差异有统计学意义(P<0.01)。(3)使用丹参或aFGF后脑皮层的细胞凋亡细胞数明显减少,与空白对照组比较有统计学意义(P<0.01);丹参 aFGF组脑皮层的细胞凋亡细胞数减少更明显。与丹参组、aFGF组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论复方丹参注射液联合aFGF治疗新生HIBD大鼠在保护脑功能、促进血管增生方面有一定的协同作用。     

利用转基因番茄表达人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)

迄今为止，在人类中已经发现了22个成纤维细胞生长因子(FGF)超家族成员。成纤维细胞生长因子不但能够促进包括成纤维细胞、内皮细胞、软骨细胞、平滑肌细胞、黑色素细胞等多种细胞的增殖，而且还能够促进脂肪细胞的分化，引发巨噬细胞和成纤维细胞产生白细胞介素6(IL-6)，刺激星形细胞的迁移，延长神经元的寿命。FGF在个体的发育、血管发生、造血、肿瘤发生中发挥重要作用，FGF是通过在细胞外与4种FGF酪氨酸受体蛋白激酶相互作用来实现其生物学功能的。人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)是成纤维细胞生长因子超家族成员。来自于三个胚层的多种细胞都可以表达aFGF。aFGF在治疗帕金森综合症、急性脊柱扭曲性损伤、断指中神经功能重建、脑缺血、肾缺血、心肌梗塞、闭塞性脉管炎、视网膜缺血、胃溃疡及难愈合性伤口等多种临床应用方面具有巨大潜力。为了满足对aFGF这种价格昂贵的细胞因子的需求，本实验探索利用转基因植物表达aFGF。利用转基因植物大规模生产治疗性蛋白是一种非常有潜力的方法，这是因为此种方法安全、生产成本低、易于操作。我们构建的双元表达载体带有一个经过改构的人酸性成纤维细胞生长因子基因(afgf)，载体上的选择标记基因为manA，它使得转化过程中可以使用PMI这种不含抗生素及除草剂的选择系统。利用农杆菌介导的转化方法获得了afgf转基因番茄植物，并且通过PCR-Southern、RT-PCR证明了afgf在宿主基因组中的整合及表达。     

Protective effects of aFGF compound solution on rat liver in hypothermic preservation

AIM: To investigate the protective effects of human acidic fibroblast growth factor (aFGF) on hypothermic preservation of rat liver. METHODS: Twenty-four Wistar rats were randomly divided into 2 groups (n=6): hypertonic citrate adenine (HCA) solution control group and experimental group (aFGF compound solution, containing 40 μg/L aFG_14-154 in HCA solution). The isolated livers were preserved in corresponding solution for 12 h or 24 h, and the content of malondialdehyde (MDA), the activity of alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST), and the changes of liver weight in the 2 groups were analyzed. The histopathological changes of the livers were also examined. RESULTS: Compared with HCA control group, the levels of ALT, AST and MDA and the changes of liver weight were significantly decreased in experimental group (24 h), and the changes of liver histopathology were obviously alleviated in experiment group. CONCLUSION: aFGF can reduce rat hepatic injury. The protective effects of aFGF may be related to attenuating cell swelling and improving the capacity of anti-oxidative damage in the liver.     

重组人酸性成纤维细胞生长因子对神经细胞损伤的保护作用

目的建立谷氨酸损伤模型并探讨重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)对谷氨酸损伤神经细胞的干预作用。方法利用流式细胞仪观察rhaFGF对正常培养的神经细胞细胞周期的影响,建立细胞损伤模型,将实验分空白组、模型组和rhaFGF保护组,通过形态观察以及MTT法检测各实验组的细胞活力。结果rhaFGF能促进DNA的合成,谷氨酸对细胞损伤程度随浓度的增大而增大,rhaFGF能够拮抗谷氨酸的神经毒。结论rhaFGF能促进神经细胞生长同时拮抗谷氨酸兴奋性毒性而发挥神经保护作用。