草鱼出血病的电镜观察

草鱼出血病是由呼肠孤病毒感染所致的急性传染病，由于病鱼小血管受损引起全身性出血，并造成内脏器官和体壁肌肉组织局灶性病变。电镜观察表明病变细胞内各种细胞器的数量较正常细胞显著减少，形态结构也遭损坏。质膜的三层结构模糊不清，及至解体消失。与机体代谢密切相关的粗面内质网、滑面内质网、线粒体和高尔基复合体的数量减少及结构受损，使蛋白质、糖类和脂质合成及分解等一系列细胞代谢活动不能正常进行，加速了病鱼死亡。     

犬蝠源呼肠病毒的分离与鉴定

 【目的】从野生蝙蝠体内分离病毒，为开展蝙蝠的病原监测奠定基础。【方法】从广东省韶关采集了30份野生犬蝠样品，研磨后接种Vero E6细胞，从中分离到2株病毒，对其中一株病毒进行研究，使用生物学与分子生物学方法确定其分类学地位。【结果】该毒株在Vero E6细胞上盲传至第4代开始出现细胞病变，表现为细胞内颗粒增多，细胞收缩、变圆，最后细胞从瓶壁脱落。反复冻融3次后，收集细胞及培养液，电镜观察发现，病毒粒子无囊膜，有双层衣壳，呈正二十面体对称，将病毒命名为Bat/China/2003（B/03）。红细胞凝集试验表明该病毒能凝集健康人O型血红细胞，不能凝集SPF鸡、实验用普通级牛、大鼠和豚鼠的红细胞。理化特性试验表明该病毒对氯仿有抵抗力、能耐受pH3.0的酸性环境、50℃水浴1 h病毒丧失感染能力、1 mol•L-1 MgCl2能提高病毒对热的抵抗力。病毒基因组经琼脂糖凝胶电泳分大、中、小3个区段。用哺乳动物呼肠病毒特异性引物进行反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR），扩增得到了预期大小的片段。测序结果经NCBI BLAST分析表明，与呼肠病毒科正呼肠病毒属的Ndelle virus核苷酸同源性最高为91.2%。用DNAMAN Multiple Alignment进行序列同源性分析，与哺乳动物呼肠病毒血清1、2、3型的代表株T1L，T2J，T3D的核苷酸同源性分别为89.9%、76.9%、89.9%。【结论】由以上结果推断该病毒为呼肠病毒科的成员。     

Immune response to avian reovirus in chickens and protection against experimental infection

Objectives To assess the efficacy of the vaccination procedure and the effect of the transfer of maternal antibodies to progeny chickens on reovirus pathogenicity.
Design To vaccinate chickens and challenge progeny chickens with high doses of homologous and heterologous viruses.
Procedure High doses of reovirus strains RAM-1, 1091 and 724 were used to induce tenosynovitis lesions. High doses were produced by concentration of viruses grown in cell culture. Then similar doses of viruses were used to challenge immunised chickens progeny.
Result Vaccination of breeding hens with the RAM-1 strain of avian reovirus, which resulted in the passive transfer of neutralising antibody to progeny chickens, completely prevented the development of tenosynovitis in 80% of progeny chickens infected with the homologous virus. Even though multiple injection of hens resulted in broadening of the normal type-specificity of the neutralising antibody response against heterologous serotypes of avian reovirus, only marginal protection against strains of two heterologous serotypes of avian reovirus was obtained.
Conclusions A model for assessing the efficacy of vaccination against avian reovirus strains on clinical signs such as tenosynovitis was developed that overcome the normal low virulence of Australian strains of avian reovirus. Breeding hens can be immunised with Australian strain of avian reovirus with passive transfer of antibody via the yolk to the progeny chickens. Although the neutralising antibody response to three injections of inactivated virus decreased the specificity of the neutralising antibody response against antigenically heterologous strains of avian reovirus, the protective immunity appeared to retain type-specificity.     

感染新型鸭呼肠孤病毒的番鸭肝脏蛋白质组双向电泳方法的建立

为建立感染新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)的番鸭肝脏蛋白质组双向电泳(2-DE)方法。本研究通过对人工感染NDRV的雏番鸭肝脏病变的观察,对肝脏蛋白质提取裂解液的配方、样品上样量、一向等电聚焦(IEF)参数等条件的对比和优化,建立了有效的番鸭肝脏2-DE方法。结果表明：采用攻毒后病变最典型的第5天的番鸭肝脏作为研究样品;采用研磨-超声-裂解液（7 mol/L尿素、2 mol/L硫脲、4% CHAPS、65 mmol/L DTT、40 mmol/L Tris-base、0.5% IPG buffer）法提取肝脏蛋白质,结合2D clean-up kit以及去拖尾DeStreak试剂纯化蛋白,按1100 μg上样,设置IEF参数为：50 V 12 h、200 V 1.5 h、500 V 1 h、1000 V 1 h、8000 V 3 h、8000 V 60000 V h、500 V维持,采用胶体考马斯亮蓝染色,能获得分辨率高、重复性好的2-DE图谱。应用建立的2-DE方法和PDQest 8.0分析软件,发现26个与正常番鸭肝脏蛋白表达水平超过3倍的差异蛋白点。该方法的建立为进一步寻找NDRV感染宿主组织相关蛋白以及水禽呼肠孤病毒差异蛋白质组学研究提供了技术支持。     

草鱼出血病的组织病理研究

草鱼出血病是由呼肠孤病毒引起的一种急性传染病。病鱼全身出血，鱼的红细胞、白细胞及血红蛋白都明显地低于健康鱼。病毒侵袭草鱼后，小血管的内皮广泛受损，引起弥漫性血管内凝血，从而大量消耗了血液中的凝血因子，引起广泛性出血。由于循环血量减少和小血管阻塞，导致大多数组织和器官缺氧而变性和坏死；尤其是造血组织的坏死，更加速病鱼死亡。此外，还在草鱼血液中首次发现嗜碱粒细胞，查明了草鱼出血病同草鱼肠炎病的肠道组织病变之间的差异。     

新型鸭呼肠孤病毒病灭活疫苗的制备及免疫原性分析

鸭出血性坏死性肝炎是新型鸭呼肠孤病毒引起的危害养鸭业的一种新传染病。为防制该病,本研究以NDRV JM85株为种毒研制成油佐剂灭活苗,并通过免疫血清学检测及攻毒保护试验评价疫苗效果。结果表明,该疫苗安全性好,免疫原性强,麻鸭二免后28d产生较高的中和抗体,并能维持较长时间。种番鸭免疫后的子代雏番鸭具有一定的母源抗体,能够抵抗强毒的感染,可用于防制鸭新型呼肠孤病毒病。     

鸡病毒性关节炎的研究概述

鸡病毒性关节炎(Avian Virus arthritis)也称“传染性腱鞘炎”,是近年来发现的一种由禽呼肠孤病毒引起的鸡慢性传染病,以侵害跗关节、趾关节及其肌腱和心肌为特征,该病分布广泛,在世界各地均有发生,对鸡特别是肉鸡的生产带来的经济损失很大。文章就AVA的病原学、诊断方法及免疫预防等作一概述。     

鸡病毒性关节炎琼脂扩散抗原制备方法的比较及应用

将呼肠孤病毒U.Conn.S1133株接种鸡胚和鸡胚成纤维细胞,采用PEG6000浓缩鸡胚尿囊液,饱和硫酸铵沉淀尿囊液和细胞上清液三种方法,制备的抗原均具有良好的特异性和敏感性,适于鸡只个体或鸡群检查。三种抗原在检出率上虽无差异,但细胞上清液制备的抗原在效价、沉淀线的清晰度方面优于其它两种抗原。用琼脂扩散试验对免疫后3周、11周、31周的祖代鸡进行抗体检测,检出率分别为100%、95%、90%,抗体效价最高达1:64。进口种鸡177份血样的检出率为49.2%。调查上海地区12个鸡群,阳性群9个,污染率在3.4%—53.7%。表明上海地区有本病污染。     

应用亲和素——生物素——过氧化物酶复合物技术检测组织细胞中的禽呼肠孤病毒抗原

应用亲和素——生物素——过氧化物酶复合物(ABC)技术检测经不同途径接种ARV的鸡只,结果表明ARV抗原广泛分布于内脏实质器官、肠道、腱鞘和滑膜。在接种后4周除腱鞘和滑膜外,都检不到病毒抗原的存在,而这两种组织到试验结束时(60d)仍为阳性,感染鸡血液涂片的ABC检测结果均为阴性,ABC技术比病毒分离法更敏感。     

原核表达番鸭呼肠孤病毒σC与σB蛋白对雏番鸭的免疫保护

【目的】探讨原核表达的番鸭呼肠孤病毒（DRV）外壳蛋白σC与σB对于雏番鸭的免疫保护作用,为研制有效的DRV亚单位疫苗提供理论基础。【方法】对pET-30a-S3/BL21重组菌与pET-30a-S4 ORF2/BL21重组菌进行稳定性检验,表达的重组蛋白进行纯化和复性后,进行油乳剂制备,50只1日龄雏番鸭随机平均分为5组,即DRV σB蛋白免疫组、DRV σC蛋白免疫组、DRV σB + σC蛋白免疫组及PBS对照组和攻毒对照组,免疫组皮下接种剂量为500 μg/只,7日龄时进行二次免疫,14日龄时进行攻毒试验,ELISA和琼扩（AGP）检测抗体水平并计算保护指数。【结果】重组菌具有良好的稳定性,各免疫组的雏番鸭均在第2次免疫后7 d产生了一定效价的抗体,其中DRV σB + σC蛋白免疫组和DRV σC蛋白免疫组的雏番鸭血清抗体ELISA效价均为1﹕200,高于DRV σB蛋白免疫组的1﹕100。攻毒保护试验结果表明,联合免疫的保护指数最高,可达70,重组DRV σC保护指数次之,为60,重组DRV σB蛋白保护指数最低,仅为40。【结论】使用原核表达的DRV外壳蛋白σC与σB制备油乳剂,联合免疫可诱导雏番鸭快速产生一定效价的抗体,并提供良好的免疫保护力。