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1.
猪细小病毒氢氧化铝疫苗研究 总被引:3,自引:0,他引:3
选用从国内浙江省某猪场流产死胎中分离的猪细小病毒强毒(简称浙PV-Z株),通过仔猪肾原代细胞增殖后,经甲醛灭活,再配以20%的氨氧化铝胶佐剂制成猪细小病毒氢氧化铝疫苗。该疫苗免疫性好,免疫程序简单。小剂量肌注豚鼠和猪,均能激起明显的抗体应答反应,疫苗对豚鼠接种2次HI价可达到1:320以上(通常1:640-1:1280)。对成年猪接种疫苗0.2ml,0.5ml,1.0ml免疫2次,或用2.0ml免疫1次,HI价范围在1:20-1:320之间,疫苗对胎儿的保护率可达到98.7%。实验室和田间跟踪试验显示该疫苗具有保存期长、耐热、安全、免疫保护率高等特点。 相似文献
2.
怀孕后期感染PRRS病毒母猪所产新生仔猪的免疫反应 总被引:5,自引:0,他引:5
将PRRS病毒BJ-4株感染怀孕后期(约90天)的抗体阴性和阳性母猪,待自然分娩后,观察新生仔猪的免疫应答。结果显示,接种PRRS病毒BJ-4的母猪没有表现出明显的临床症状,没有出现流产死产。新生仔猪浦被子前血清中PRRS病毒核酸TR-PCR检测和ELISA抗体阴性,哺乳后特异性抗体出现,5-6周母源抗体逐渐下降;20日龄猪瘟疫苗免疫后疫苗抗体维持时间短,仔猪在40日龄后进入野毒感染的危险期。RT-nested PCR检测血清中PRRS病毒核酸和易感仔猪病毒特异性抗体监测的结果提示仔猪群内可能存在水平传播。流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群发现CD3^ 细胞减少,CD4^ 细胞显著下降,CD8^ ,CD4^ CD8^ 和SLA-DR^ 表达细胞升高。以上结果表明在感染后病毒能够长期持续性存在,猪场内新生仔猪母源抗体逐渐下降后,通过水平传播受到感染,感染后免疫应答受到不利影响。 相似文献
3.
本文从分化抑制物、培养基的选择内细胞团的分离,胚胎干细胞的分离及鉴定方法等方面系统地综述了猪胚胎干细胞分离克隆的研究进展;并对其未来的应用前景进行展望。 相似文献
4.
PRRS ELISA试剂盒检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的应用 总被引:2,自引:0,他引:2
利用重组杆状病毒表达的PRRSV核衣壳蛋白作抗原制成ELISA诊断试剂盒,检测人工感染PRRSV猪血清、疫苗免疫抗体和田间血清,并与IDEXX公司生产的试剂盒进行比较。结果表明,该试剂盒在PRRSV感染后8天内就可检出感染性抗体,而用IDEXX公司生产的试剂盒在感染后的18天才检测到感染性抗体,对弱毒疫苗的免疫检测也基本能反映出疫苗的免疫应答状况。对华东地区PRRSV流行病学调查结果表明,PRRSV在国内普遍存在,同时也证明研制的试剂盒,是客观科学调查我国PRRS流行情较理想的检测工具。 相似文献
5.
[目的]调查猪嵴病毒在福建地区腹泻猪群中的流行和变异情况。[方法]根据Gen Bank中登陆的猪嵴病毒(porcine kobuvirus,PKo V)结构蛋白VP1基因序列设计特异性引物,采用RT-PCR方法从某猪场采集腹泻小肠样品中扩增猪嵴病毒VP1基因,将扩增后的目的片段克隆后进行序列测定。应用生物信息学软件,将获得的2株猪嵴病毒VP1和Gen Bank的猪嵴病毒株VP1基因序列进行对比分析。[结果]猪嵴病毒CH/FJNP/12L/2015与匈牙利株K-30-HU/2008/HUN(GQ249161)的核苷酸同源性最高,为88.1%,氨基酸同源性为95.3%。CH/FJNP/12W1/2015与越南株714441/CAOLANH-VH/2012-2-21(KT266058)的核苷酸同源性最高,为88.2%,氨基酸同源性为96.1%,同源重组分析显示,2株毒株均无明显同源重组发生。[结论]频繁的畜禽国际贸易,以及如今便捷的现代化交通工具,人们生活提供方便的同时,也加速了猪嵴病毒毒性的传播。 相似文献
6.
为进一步探究猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S蛋白的抗原表位及其功能,本试验通过优化S1D基因的密码子,构建了S1D基因未优化的重组原核表达质粒pET-S1D和已优化的pET-ΔS1D,并进行了诱导表达和纯化。使用SDS-PAGE和Western blotting方法验证S1D、ΔS1D蛋白在大肠杆菌内得到正确表达,利用Image J软件对S1D、ΔS1D蛋白表达量进行灰度扫描,通过t检验分析两者差异性。将纯化的ΔS1D 蛋白免疫 BALB/c小鼠,通过细胞融合、筛选及亚克隆,获得单克隆细胞株。利用体内诱生法制备抗PEDV S1D蛋白的单克隆抗体腹水,使用ELISA、Western blotting、间接免疫荧光试验3种方法对腹水效价及特异性进行检测和验证。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,表达S1D、ΔS1D蛋白的样品均在34 ku处出现正确的目的条带。t检验结果表明, S1D、ΔS1D两者蛋白表达量差异极显著(P<0.01)。ELISA结果显示, 腹水的抗体效价达到了1∶1 000 000,腹水与PEDV病毒粒子和纯化后的ΔS1D蛋白反应均呈阳性,与PEDV N蛋白、pET-32a(+)空载体蛋白和猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)和猪急性腹泻综合征冠状病毒(Swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV) 5种病毒反应均呈阴性。Western blotting结果显示,腹水与ΔS1D蛋白和PEDV S蛋白分别在34和180 ku处有特异性条带出现,与pET-32a(+)空载体蛋白、正常Vero细胞蛋白均无特异性条带出现。间接免疫荧光试验结果显示,腹水及阳性对照组均能使细胞出现特异性绿色荧光信号,而空白及阴性对照组均未见绿色荧光信号。密码子优化可在原核表达系统中显著提高重组蛋白的表达水平,本研究基于高效表达的ΔS1D蛋白,成功制备了1株能稳定分泌与 PEDV S蛋白特异性结合的单克隆抗体的细胞株,为进一步探究 PEDV S蛋白抗原表位及蛋白功能的研究奠定了基础。 相似文献
7.
圆环康防治猪圆环病毒2型感染的效果观察 总被引:2,自引:1,他引:1
根据PCV-2病毒的生物学特性和致病特点,研制了用于防治PCV-2感染的中草药方剂——圆环康。结果表明:圆环康处理对PCV-2病毒具有明显的抑制作用。临床用于治疗早中期病猪,或混合、继发感染症状不明显的病猪及预防用药,猪场的平均治愈率达90%以上,且治愈后不反弹。而西药粉剂组治愈率平均为78.1%,不治疗组的自愈率为24.2%。对于存在混合或继发感染病情严重猪群,在采用圆环康的同时,配合干扰素、白介素、免疫球蛋白或转移因子等进行治疗,疗效更好。 相似文献
8.
利用单根肌纤维法分离和培养猪骨骼肌卫星细胞及其成肌诱导分化 总被引:1,自引:0,他引:1
建立单根肌纤维法体外培养猪骨骼肌卫星细胞的体系,了解其增殖和成肌特性。通过Ⅰ型胶原酶消化,从猪骨骼肌中分离完整的单根肌纤维并培养,用细胞免疫荧光鉴定肌纤维上的卫星细胞,随后对从单根肌纤维上游离出来的卫星细胞进行细胞免疫荧光染色,传代培养,成肌诱导分化和Western blot分析骨骼肌卫星细胞成肌特异性蛋白的表达。结果显示:分离并培养的单根肌纤维上附着有卵圆形的细胞,并随时间的推移,细胞缓慢向外迁移并增殖,卫星细胞特异性标志基因对盒转录因子(Paired protein box,Pax7)和成肌分化抗原(Myogenic Differentiation Antigen,MyoD)免疫荧光染色呈阳性,且阳性率达到90%以上。成肌诱导分化后,细胞开始汇合,并呈方向性生长,最终形成多核肌管,且成肌特异性标志基因Myogenin和myosin heavy chain(MyHC)表达呈阳性。MyoD蛋白高表达于增殖期,而Myogenin和MyHC在进入分化期才表达。该实验成功建立了猪骨骼肌单根肌纤维的体外培养方法并获得了高纯度的卫星细胞,为骨骼肌卫星细胞进行活体移植治疗相关疾病研究提供了实验材料。 相似文献
9.
猪流行性腹泻病毒山西分离株ORF3基因序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
为了研究山西地区猪流行性腹泻病毒ORF3基因的遗传变异情况,2014-2015年从山西地区11个地市收集的PEDV阳性病料中扩增到4株PEDV的ORF3基因,并进行序列比对及遗传分析。序列分析结果表明,4株PEDV山西分离毒株的ORF3基因与CV777毒株相比,无核苷酸插入和缺失,有部分核苷酸及氨基酸发生变异;4株PEDV山西分离毒株的ORF3基因之间核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.6%~100.0%和98.7%~99.6%,与CV777、疫苗株CV777 truncated和attenuated DR13核苷酸同源性分别为96.6%~97.0%,90.6%,97.6%~98.1%,氨基酸同源性分别为95.1%~96.0%,88.0%,97.1%~98.1%。遗传进化分析结果显示,4株PEDV山西分离毒株与12株2010-2015年我国各地方分离的毒株和2009年分离的CH/JL/09毒株亲缘关系较近;与CV777、LZC、Brl/87和2个疫苗株(CV777truncated和attenuated DR13)亲缘关系较远。 相似文献
10.
猪HK2基因的克隆及序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
为克隆猪己糖激酶2基因,分析其生物功能,采用已报道的人及小鼠HK2的cDNA序列为依据,利用电脑克隆策略获得的ESTs设计引物,扩增新的猪HK2基因cDNA序列。将PCR产物克隆测序,分析获得的核苷酸序列及其编码蛋白的特性,分离的开放阅读框全长2754bp,编码917个氨基酸,与人和小鼠的核苷酸序列同源率分别为90%和87%,与人和小鼠的氨基酸序列同源率分别为96%和94%,利用生物信息学软件分析出此蛋白的理化特性并预测了其蛋白结构,为进一步开展猪HK2基因的结构功能、表达调控的相关研究奠定了基础。 相似文献