绵羊肺炎支原体hlyA基因的表达及活性初步鉴定

绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)可引起绵羊(Ovis aries)及山羊(Capra hircus)的支原体性肺炎,分布广泛,危害严重.本实验在课题组前期完成MO Y98株基因组测序的基础上,通过基因注释、PCR等获得了该菌株可能的溶血素(hemolysin,hlyA)基因;依据大肠杆菌(Escherichia coli)优势密码子对hlyA基因进行优化,构建优化后hlyA原核表达质粒pET32a-hlyA;将该质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,获得了相应的重组菌株,并对重组菌株进行诱导表达;采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western blot对表达的重组蛋白进行鉴定,并经Ni2+金属螯合柱纯化.克隆了MO hlyA基因序列(GenBank登录号:KT598390),片段大小为375 bp,编码125个氨基酸.优化后密码子适应指数为0.91,目的基因适于在大肠杆菌中表达.重组融合蛋白多以包涵体的形式存在,其相对分子质量约为31.6 kD,与预期大小一致.Western blot结果显示,上清中纯化出的目的蛋白能与一抗发生反应,重组蛋白特异性较好.溶血实验表明,当纯化后蛋白浓度稀释到0.125 μg/mL时,溶解红细胞的能力已经下降.该研究结果为后续绵羊肺炎支原体致病性研究提供了基础资料.     

Vitreosity,its stability and relationship to protein content in durum wheat

High quality requirements are set on durum wheat (Triticum durum) from semolina mills and pasta producers. For the production of semolina and pasta with good cooking quality, high grain protein content and vitreosity is required. The dependency of vitreosity on protein content as well as its stability under the influence of humidity was not well investigated up to now. We (1) compared two methods to determine vitreosity, (2) investigated the relationship between vitreosity and protein content, (3) developed a method to analyze vitreosity under humidity, and (4) examined the relationship between protein content and agronomical as well as quality traits in durum wheat. The results showed that the formation of vitreous kernels greatly depends on the protein content. To evaluate the stability of vitreosity under the influence of humidity a new method was elaborated and employed to assess the durum germplasm under study. This revealed that vitreosity of a durum wheat variety depends on the potential to form vitreous kernels but also to maintain this vitreosity under the influence of humidity. Our results further show that protein content is a central trait in durum wheat that strongly influences important traits like grain yield, vitreosity, and b-value.     

绵羊Hoxc8与d11基因甲基化的量子力学特征与功能

文章研究了蒙古羊和德国美利奴肉羊、陶赛特肉羊、澳洲美利奴细毛羊的Hoxc8和Hoxd11基因及其第1位外显子的甲基化位置、数量、稳定程度,以及甲基化的量子力学性质。与蒙古羊相比,内含子序列有数个碱基的差异,外显子一致。外显子序列的甲基化在转录和翻译过程中的功能,与甲基化导致的分子轨道和量子力学变化有关。甲基化胞嘧啶在密码与反密码中的第2位,决定甲基化是否对转录和翻译产生效应。蒙古羊14枚胸椎个体的父本Hoxc8 exon-1和Hoxd11 exon-1序列甲基化程度高,母本的甲基化程度低;13枚胸椎个体的父本和母本相应序列的甲基化程度都低。     

3种定量检测绵羊肺炎支原体方法的比较

本研究采用改良Thiaucourt's培养基培养绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipleuneniae, MO)临床分离株SC01,收集不同时间的培养物,分别用颜色变化单位(CCU)法、浊度法及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法进行定量,并绘制MO生长动态曲线。CCU检测结果显示,接种后0～4 h为SC01的迟缓期,4～16 h为对数生长期,lg CCU/mL 最高达到10.7000±0.4700,16～20 h为稳定期,20 h以后进入衰亡期;浊度法定量检测结果显示,SC01培养物经过5倍浓缩后的D_{420 nm}随着培养时间延长逐渐上升,2 h时为0.0028±0.0002,4～12 h D_{420 nm}增加较缓慢,而12～24 h增加最快,24 h最高达到0.8609±0.0045,以后则趋于稳定;Real-time PCR法检测结果显示,SC01的拷贝数随着培养时间延长平稳上升,2 h时lg 拷贝/mL为4.5889±0.0048,在30 h时lg 拷贝/mL达到7.6165±0.1089。相关性分析结果表明,在迟缓期和对数生长期,CCU法与Real-time PCR法、CCU法与浊度法、Real-time PCR法与浊度法对MO的定量检测结果高度相关,相关系数分别为0.967、0.720和0.849,而Real-time PCR法和浊度法对MO的定量检测结果则在2～30 h内均高度相关,相关系数为0.912。经对检测所需时间及精确度等方面综合比较,本研究认为Real-time PCR法具有快速、准确及易标准化等特点,可以取代CCU法和浊度法用于MO的定量。     

基于GIS的农村公共卫生评价系统设计与实现

通过分析公共卫生评价的必要性、选择合适的评价指标、开发平台,初步开发出了基于GIS的公共卫生评价原型系统,并以河南省的一些数据做了一些试验,希望能为国家公共卫生信息系统的建设提供有用的信息.     

玉米兰卡种质在东北地区的应用与创新

玉米(Zea mays L.)兰卡种质(美国兰卡斯特种质)代表系MO17引入东北地区种植以后,针对MO17在东北地区表现晚熟、雌雄发育不协调等缺点,通过用当地早熟地方品种和骨干材料对兰卡种质进行改良和创新,育成了丹1324、吉1037、吉846、吉842、W9706、"412"、"495"、"416"、"485"、4F1、"419"、B414、"四-144"、龙抗11、沪150等优良自交系。使兰卡种质很快成为东北春玉米区核心种质及抗丝黑穗病种质。今后育种战略应利用兰卡新种质在兰卡群内进行改良和创新;利用中国地方种质进行改良;利用"78599"种质重点改良抗叶斑病性差等缺点,形成具有中国特色的优势群体。     

中华绒螯蟹大颚器激素生物合成与性早熟的关系

运用放射化学方法跟踪测定中华绒螯蟹早熟个体和正常发育个体的大颚器合成和分泌的激素-甲基法尼酯(methyl farnesoate，MF)，发现早熟雌、雄蟹当年9月的MF合成速率约为正常蟹的2倍，早熟蟹的MF在当年秋季(10月或11月)均达到峰值，之后：MF合成速率显著降低，而成熟系数继续升高。正常发育的雌、雄幼蟹，当年至翌年4月的MF合成速率始终维持较低水平，翌年6月开始，MF合成速率迅速增大，至翌年10月的MF合成速率已超过早熟蟹的峰值，11月的MF合成速率明显降低，性腺发育至Ⅳ期末。研究结果表明：早熟蟹大颚器的提早发育，大量合成和分泌促性腺激素-MF，刺激卵巢或精巢发育成熟是导致性早熟的内分泌因素。     

绵羊肺炎支原体基因组DNA表达文库的构建与鉴定

为了筛选绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)免疫原性相关基因,提取MO基因组DNA,利用限制性内切酶Sau3AⅠ对基因组DNA进行酶切,回收500~3 000bp的基因组DNA片段,用T4DNA连接酶将其与经BamHⅠ酶切并去磷酸化处理的pET28a/b/c载体连接,然后转化至DH5α感受态细胞,通过菌液PCR对插入到载体中的片段大小及插入率进行鉴定。从转化的平板上提取质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,构建MO基因组表达文库。随机挑选单菌落,用pET28a/b/c通用引物进行PCR鉴定,结果显示插入片段大小为300~2 000bp,插入率为90%,表明成功构建了MO基因组表达文库,该文库的构建为进一步筛选MO相关的免疫性基因及潜在候选疫苗靶点奠定前期基础。     

绵羊肺炎支原体p74基因重组单核细胞增生李斯特菌的构建及其免疫原性分析

【目的】构建绵羊肺炎支原体(MO)p74基因重组单核细胞增生李斯特菌(LM)并分析其免疫原性,为研发MO重组活疫苗奠定基础。【方法】采用PCR方法从LM-SB5株基因组中扩增出rli60基因的上、下游同源片段a和b,从质粒pET-32a(+)-p74中扩增出MOp74目的基因片段,利用重叠延伸PCR方法(SOE-PCR)将扩增的3个片段融合成ap74b基因片段,克隆入pMD19-T载体中进行测序鉴定。将ap74b片段从pMD19-T载体上切下亚克隆入pKSV7穿梭载体,构建pKSV7-ap74b重组穿梭质粒,电转化至LM-SB5株感受态细胞,用氯霉素和高温双重压力筛选得到重组菌LM-Δrli60-ap74b。并通过SDS-PAGE及Western blot分析重组菌P74蛋白的表达情况,通过小鼠免疫试验检测其免疫原性。【结果】成功扩增出了rli60基因的上下游同源片段a、b及p74目的片段,采用SOEPCR方法获得融合片段ap74b,并成功亚克隆于穿梭质粒pKSV7中。对重组菌PCR鉴定结果表明,外源基因MO p74定点整合于LM基因组中。体外稳定性检验表明,p74基因能在LM基因组中稳定存在。SDS-PAGE结果表明,重组菌LM-Δrli60-ap74b可表达蛋白分子质量约为17ku重组蛋白;Western blot分析表明,表达的重组蛋白能与MO阳性血清发生特异性免疫反应。小鼠免疫试验表明,重组菌LM-Δrli60-ap74b菌液可诱导机体产生抗MO特异性抗体,证实该重组菌具有一定的免疫原性,重组菌能诱导机体产生1∶8~1∶16的抗体效价。【结论】获得了具有免疫原性的绵羊肺炎支原体p74基因重组单核细胞增生李斯特菌。     

基于3S技术的农业资源管理信息系统的研究

对农业资源环境系统开发的理论和方法进行了分析,在了解资源环境数据特点和用户需求的基础上,用Visual Basic与MapObjects对邯郸市农业资源环境信息系统进行了设计与开发,并把作物生长模拟模型PS123直接整合于系统中.利用系统提供的数据和参数,对邯郸地区2003年夏玉米的不同生产水平进行了计算模拟,试验结果表明,通过系统与环境模型整合对区域资源环境问题进行研究和动态监测是可行的,可为其它类似地理信息系统的建立提供参考和借鉴.