卡氏住白虫裂殖子和配子体的超微结构

卡氏住白虫(Leueocytozoon caulleryi的裂殖子和配子体是从天然感染鸡的外周血液、肝、脾及其他内脏组织采取。通过透视电镜观察其超微结构,裂殖子呈圆形或卵圆形,外包有两层膜,外膜较薄,内膜比较厚,内含有一个圆形或卵圆形的核,在核中央有一核仁、核酸糖小体、食物空泡,具有一个管状嵴的线粒体和1～2个脂类包含体。 卡氏住白虫雄性和雌性配子体都具有三层明显的膜,但成熟的配子体仅见到两层膜。雌雄配子体含有细胞核、核仁、核酸糖小体、食物空泡、管状嵴的线粒体、内质网、雄配子体较小而细胞核较大。雌配子体染色较雄配子体深,并含有较发达的内质网。     

邯郸地区鸡卡氏住白细胞虫病季节动态的研究

鸡卡氏住白细胞虫病在邯郸地区的发病季节在6月下旬至10月份，高峰期为8-9月份，阳性感染率高达100%，阳性视野可达498‰-526‰，以后逐渐下降，至12，1，2，3，4，5月份为低潮期，虽然阳性感染率为40%-60%，但阳性视野仅在5‰-22‰之间。通过捕获发病鸡舍的飞虫，进行鉴定分类，确定了荒川库蠓是邯郸地区传播本传播本病的优势种。根据邯郸地区气温变化，荒川库蠓活动的高峰期为7-8月，与发病高峰期基本相符。     

鸡卡氏住白细胞原虫各期虫体形态结构的观察研究

采取同居感染病鸡的外周血液 ,观察研究鸡卡氏住白细胞原虫 (LeucocytozoonCaulleryi)不同发育阶段的裂殖子和配子体的形态特点。光镜下 ,裂殖子呈圆点状 ,胞核圆形 ,着染紫红色 ,胞浆少量呈淡蓝色 ,位于血浆和血细胞内 ,配子体呈圆形或椭圆形 ,雌配子体 (大配子体 )虫体深蓝色 ,核较小 ,呈深粉红色 ,平均直径 16 6 5× 15 79μm ,雄配子体 (小配子体 )为淡蓝色 ,核较大 ,染色较雌配子体浅 ,平均直径为 11 2 7× 11 10 μm。电镜下 ,裂殖子呈圆形或卵圆形 ,外包有两层膜 ,外膜较薄 ,内膜较厚 ,内包一个圆形或卵圆形的核 ,位于红细胞细胞质内早期发育的配子体呈球形 ,表面隐约可见两层膜 ,细胞核大而淡染 ,位于中央 ,核膜呈双层 ,中间有明显的空隙 ,细胞质内可见数量不等的细微颗粒。     

鸡沙氏住白虫配子体发育的研究

在人工感染鸣沙氏住白虫条件下，裂殖子在感染后第5天侵入内脏组织血细胞形成早期配子体。约两周后配子体发育成熟并在约第20天虫体密度达峰值．第60天开始虫体迅速衰减，到第90天虫体在外周血液中消失。通过计数说明了外周血液中配子体数量的消长变化。     

鸡卡氏住白细胞病病原学研究和防治技术

[目的]为鸡卡氏住白细胞虫病的防治提供依据。[方法]通过血液涂片检查、病鸡剖检、组织印片及人工接种试验对信阳地区病鸡体内和组织切片中各期病原体的形态变化观察,总结其流行规律和典型病状,并提出其防治技术。[结果]信阳市鸡卡氏住白细胞虫体在血液细胞内发育各期形态变化与国内外报道基本相同。大配子平均大小14.86μm,小配子体平均大小12μm。大配子体的数量比小配子体多。在鸡细胞内外除第3、4期配子体外,还有裂殖子。裂殖体直径为27~68μm。[结论]可在鸡饲料中添加中西药物来预防和治疗鸡卡氏住白细胞虫病。     

卡氏住白细胞虫rDNA ITS-2的POR扩增与测序

运用PCR方法扩增了卡氏住白细胞虫rDNA的ITS-2及部分5．8S和28S序列(ITS2 )，并对该序列进行了克隆和测序。采用巨型裂殖体为材料，并根据Saccharomyces cerevisiae rDNA中的5．8S、28S保守序列所设计的通用引物ITS3、ITS4，进行了虫体ITS2 的PCR扩增，将所扩增片段纯化后成功地克隆于pGEM-T easy和PMDl8-T载体的T-T窗口。经双向自动测序显示，该ITS2 片段的大小为270bp；经NCBI Blast联机检索，结果显示，所扩片段中5．8S序列与S．cerevisiae的5．8S序列有部分相同，而ITS-2序列为虫体所特有；同时经wDNA-SIS软件分析，显示该ITS-2序列与S．cerevisiae间同源性相对较远，而与柔嫩艾美耳球虫间同源性相对较近，故而本试验中所测序列为卡氏住白细胞虫的ITS-2特有序列。     

卡氏住白虫病PCR诊断方法的建立

根据已测得的卡氏住白虫ITS-2序列，在3'端设计一种特异引物，另外采用一个位于5’端的保守引物，建立了鸡卡氏住白虫病的PCR诊断方法。特异性试验和敏感性试验表明，该诊断方法与其他虫体如疟原虫，弓形虫，微孢子虫，球虫等无交叉反应性，能检测的卡氏住白虫最低DNA浓度为1000fg，可用于本病的早期诊断。     

卡氏住白细胞虫在鸡体内的发育及与库蠓的关系

将健康鸡与卡氏住白细胞虫病鸡混养,其间加入一定量库蠓,经１２～１３ｄ后出现明显的临诊症状（贫血、排绿便等）。第９ｄ血片检查出少量裂殖子,至１３～１４ｄ染虫率达到最高峰,至１８～２０ｄ找到成熟的大、小配子体。在病鸡、病愈鸡的血涂片中,均可见到数量不等的Ⅱ期裂殖子,持续时间达３５ｄ以上,证明有带虫鸡存在。调查地主要有尖喙库蠓、荒川库蠓和大熊库蠓存在,以尖喙库蠓比例最大,占９３．４％,是本地的优势种。     

卡氏住白细胞虫配子体的浓集和纯化

以淋巴细胞分离液和生理盐水为介质，分别按不同比例配制成3种不同密度（1.060g/ml、1.070g/ml、1.073/ml)的分离液，并通过无菌采集患卡氏住白细胞虫病的病鸡血液获得了卡氏住白细胞虫的配子体。采用单密度梯度离心法和多密度梯度离心法对该配子体进行了浓集和纯化。进行最佳离心速度和离心时间的筛选结果显示，1500r/min离心25分钟分离效果最佳；经多密度法离心后可同时获得浓集和纯化的配子体；经单密度法离心后，只能得到浓集的配子体；对浓集的虫体进一步纯化，结果显示纯化率可达95％以上。通过密度梯度离心的结果判定，配子体的密度介于1.070-1.073g/ml之间。实验结果表明若需要大量分离纯化配子体，应以单密度法分二步进行为佳；若只需少量纯化的虫体，则可用多密度法一步来完成。