西宁地区猪细小病毒病的血清学调查

应用血球凝集抑制试验对青海省西宁地区的某规模化猪场的96份血清样品进行细小病毒病的血清学调查.结果：检出阳性头数8份，阳性率为83％(8／96)     

犬细小病毒的病例分析

为了解西安地区犬细小病毒感染的流行病学和临床诊疗情况,给该病的防制提供科学依据,对一年期间前来西北农林科技大学西安宠物医院就诊的70例犬细小病毒感染病例进行了临床调查研究,并对部分病例诊疗过程中的血液白细胞变化进行了监测.西安地区犬细小病毒感染一年四季均可发生,以深秋和冬春季多发;感染犬以7周龄～6月龄的断奶犬最多;感...     

犬细小病毒病的病理学观察

文章对一例吉娃娃幼犬细小病毒病肠炎综合征病例进行了病理学诊断和检查,发现肠道广泛坏死,有充血出血现象,心脏心肌柔软,凝血不良,心房扩张,且伴有慢性出血性肺炎.光镜下见肠绒毛上皮细胞广泛变性、坏死、脱落,肠腔中有大量脱落的绒毛上皮细胞和炎性渗出物,固有层有多少不等的炎性细胞浸润,肠腺和肠绒毛上皮均可见特征性的核内包涵体;心肌纤维也有程度不等的变性、坏死,炎症细胞浸润.     

犬细小病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

利用本实验室建立的昆虫细胞/杆状病毒表达系统表达犬细小病毒病毒样颗粒（CPV-VLPs）,采用硫酸铵沉淀、蔗糖密度梯度离心对表达的CPV-VLPs进行纯化,用电子显微镜、SDS-PAGE及Western-blotting方法检测纯化效果。以纯化的CPV-VLPs作为包被抗原建立CPV间接ELISA检测方法,对各反应条件进行优化并分析其特异性、敏感性、重复性。结果显示,CPV-VLPs经过纯化后纯度可达到95%以上;优化的ELISA最佳工作条件为：纯化抗原包被浓度为5.0mg/L,4℃包被过夜;1%BSA,37℃封闭2h;待检血清1∶40稀释,37℃孵育1.5h;HRP标记的酶标二抗1∶20 000稀释,37℃孵育1h;TMB室温避光显色30min;确定的血清阴性阳性临界值D450nm值为0.264。该方法可特异性检测犬细小病毒阳性血清,与犬瘟热、犬传染性肝炎、犬冠状病毒病、狂犬病阳性血清均不发生反应。该方法的敏感性为1∶640,批内重复试验变异系数小于6%,批间重复试验变异系数小于8%。42份临床血清样本的检测结果表明,与血凝抑制试验的符合率为90.48%。     

联合肌注猪IL2真核质粒对PPV VP2-PCV2 ORF2核酸疫苗免疫效果的影响

将猪IL2基因和PPV VP2基因、PCV2 ORF2截短基因克隆至真核表达载体pCI-neo,构建了重组质粒pCI-ORF2-VP2和pCI-IL2,用脂质体介导法将pCI-ORF2-VP2质粒转染PK15细胞,采用间接免疫荧光法检测在体外的表达情况。并以小鼠为动物模型,将pCI-IL2和pCI-ORF2-VP2质粒联合肌注免疫小鼠,相同剂量免疫2次,间隔2周,同时设立pCI-ORF2-VP2、pCI空载体、猪细小灭活苗、圆环亚单位苗对照,检测免疫小鼠脾脏淋巴细胞的转化功能,外周血T淋巴细胞亚群的动态变化及血清抗体的滴度。结果显示,pCI-ORF2-VP2在PK15细胞中能正常表达,联合免疫组在第28天能够检测到PPV和PCV2抗体,第21~42天诱导淋巴细胞转化和CD4+、CD8+细胞的数量高于或显著高于pCI-ORF2-VP2质粒组。结果表明,猪IL2质粒联合肌注可以提高VP2/ORF2核酸疫苗的免疫效果。     

鹅副粘病毒病油乳剂灭活苗的研究

鹅副粘病毒病是1997年本组王永坤等首先发现的一种新的鹅烈性传染病，发病率和死亡率分别达27.7%和18.2%。为了控制该病的流行传播，本课题组在研究该病的病原特性和防制方法的基础上，尽快研制了油乳灭活疫苗。从该疫苗的免疫结果观察，疫苗在免疫后第七天即可产生抗体（平均为2^3.9)，15天达到2^6.7，30天可达到2^8.8；从免疫保护试验看，免疫后15天，用强毒攻击，免疫组全部保护，而对照组5只鹅全部发病，3只死亡。从区域性中试调查结果来看，该苗安全、有效，能较好地控制该病的流行。     

鹅细小病毒四平分离株VP3基因的克隆与序列分析

根据已发表的鹅细小病毒(GPV)核苷酸序列,设计并合成了1对引物,对吉林农业大学预防兽医学研究室分离鉴定的GPV四平株(SP)主要保护性抗原蛋白VP3基因进行扩增。所得到的PCR产物片段大小约1.6 kb,与预期片段大小相符。将该片段纯化后与T载体连接,转化到感受态大肠杆菌JM-109中进行克隆。对所提质粒进行快速鉴定、PCR鉴定以及限制性内切酶NheⅠ和BamHⅠ双酶切鉴定,筛选阳性重组质粒,对重组质粒测序并进行核苷酸序列分析。结果表明:GPV四平株VP3基因长1 605 nt,包含了完整编码GPV VP3蛋白阅读框,且与国内GPV分离株B,GD,HG5/82相应核苷酸序列和氨基酸序列的同源性较高,分别为96.2%,96.3%,96.4%和97.4%,98.7%,98.9%。据此认为,GPV四平株VP3基因可以作为构建具有普遍应用价值的基因工程疫苗的候选基因。     

不同温度对扬州盐水鹅品质的影响

[目的]为了保证扬州盐水鹅的卫生质量和品质。[方法]对扬州盐水鹅在不同保存温度下菌落总数、菌相和pH值的变化进行试验性观察。[结果]当菌落总数达到106 cfu/g、腿肌pH值为6.5以上时,均有异味产生;腐败过程中的优势菌种,37℃为肠球菌属和葡萄球菌属,20℃为变形杆菌属,4℃为假单胞菌属;对于当天制作并于中午出售的盐水鹅,其保存期限建议值为:37℃不超过7 h,20℃不超过24 h,4℃不超过6 d。[结论]该研究为建立健全可供盐水鹅新鲜度鉴定使用的卫生评价指标提供了依据。     

表达鹅细小病毒VP3基因重组腺病毒的构建与鉴定

[目的]构建表达鹅细小病毒 （GPV） VP3基因的重组腺病毒,为机体免疫试验和免疫效果评价奠定基础.[方法]以重组质粒pcDNA-VP3为模板,以GPV-VP3为目的基因,构建GPV-VP3重组腺病毒载体,通过转染获得能稳定表达GPV-VP3基因的重组腺病毒,通过IFA和Western-blot检测GPV-VP3基因的表达情况.[结果]扩增到的GPV-VP3基因全长为1 605 bp,线性化的重组腺病毒穿梭质粒pCR259-VP3能在QBI-HEK293细胞中瞬时表达GPV-VP3基因,表达蛋白的分子量约为60Ku.[结论]该重组腺病毒的构建将为GPV新型疫苗研发和后期体内试验奠定基础.     

Unveiling patterns of viral pathogen infection in free-ranging carnivores of northern Portugal using a complementary methodological approach

Pathogen surveillance in free-ranging carnivores presents challenges due to their low densitie and secretive nature. We combined molecular and serological assays to investigate infections by viral pathogens (Canine parvovirus (CPV), Canine distemper virus (CDV) and Canine coronavirus (CCoV)) in Portuguese carnivores (Canis lupus, Vulpes vulpes, Lutra lutra, Martes foina, M. martes, Meles meles, and Genetta genetta) over a period of 16 years. Additionally we explored spatio-temporal patterns of virus occurrence in Canis lupus. Our study identified CPV DNA in all carnivore species with an overall prevalence of 91.9 %. CPV was detected in all sampled years and seasons in Canis lupus, supporting its enzootic nature. CDV RNA was mainly detected in the Canidae family, with viral nucleic acid recorded between 2005 and 2008 with a peak prevalence of 67 % among the wolf population, followed by a sharp decline, suggesting an epizootic behaviour of the virus. Antibodies show that mustelids and viverrids were often exposed to CDV. CCoV was first recorded by molecular methods in wolf samples in 2002, remaining in the wolf populations with marked fluctuations over time. The dual serological and molecular approach provided important epidemiological data on pathogens of wild carnivores in Portugal. These programmes should also include monitoring of other potential reservoir hosts such as domestic cats and dogs.