二氟沙星残留检测的Ci-ELISA方法建立

以合成的二氟沙星（DIF）人工抗原为基础，制备出了高效价抗DIF血清（1∶29×104），并建立了DIF间接竞争酶联免疫吸附测定法(Ci-ELISA法)。标准曲线的线性回归方程为y=-0.223x+0.9631(r=0.9929)，中值（I50）=119.21 ng/ml，最低检测限（LOD）=1.14 ng/ml，线性范围为1.14~10000 ng/ml，方法的平均批内变异系数（CV）为4.83%,平均批间CV为10.69%。DIF以浓度15~10000 ng/ml在鸡肉中添加时，回收率为81.24%~90.64%，变异系数为8.18%~11.75%。     

阿维菌素单克隆抗体的制备与鉴定

将与牛血清白蛋白（BSA）偶联的阿维菌素人工合成抗原AVM-BSA免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得了2株分泌抗阿维菌素特异性抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2F2和2H10.生物学特性鉴定的结果表明,2株杂交瘤细胞株诱生腹水的效价为1∶6 400,分泌的抗体亚型均为IgM;间接竞争酶联免疫吸附试验结果表明,抗体的50%抑制质量浓度（IC50）为101 ng/mL,2株单克隆抗体与伊维菌素、多拉菌素、红霉素和白霉素均无交叉反应,证实单克隆抗体2H10具有很强的特异性,可用于阿维菌素药物残留免疫分析方法的建立.     

氟喹诺酮类药物的多残留酶免疫分析研究

以制备的多抗血清为基础，建立了氧氟沙星（OFL）、二氟沙星（DIF）和诺氟沙星（NOR）的多残留间接竞争酶免疫吸附测定法(Ci ELISA法)。OFL、 DIF和NOR的标准曲线的线性回归方程分别为y=-0.1984x+0.9687 (r=0.9885)、y=-0.1738x+0.9150 (r=0.9985)、y=-0.2004x+0.9572(r=0.9954)；中值（IC50）分别为231.57、245.32 、186.14 ng/ml ；最低检测限（LOD）分别为1.62、1.86、1.07 ng/ml；标准曲线在2~10000 ng/ml之间均有良好的线性关系(r≥0.9885)。方法的批内CV≤5.44%,批间CV≤12.45%。当OFL、DIF或NOR以浓度15~10000 ng/ml在牛奶中添加时，药物能较好地被回收，回收率均在71.70%~94.53%之间。     

己烯雌酚特异性抗体的制备

【目的】制备抗己烯雌酚（DES）的高亲和力特异性抗体,建立检测DES的间接竞争ELISA标准曲线,为进一步研究DES快速检测试剂盒打下基础。【方法】应用DES人工免疫抗原免疫新西兰大白兔,采集抗DES的特异性抗血清,用KCjunior软件进行4参数非线性回归,建立检测DES的间接竞争ELISA标准曲线,各药物浓度在同一批次酶标板中做4次重复,共做4个批次对标准曲线进行评价,用己烷雌酚（HEX）、双烯雌酚（DIEN）、雌二醇（E2）、乙炔雌二醇（EE2）和L-酪氨酸（Tyr）来评价抗体的特异性。【结果】5只家兔免疫产生了抗DES的特异性抗血清,其中4号家兔抗血清效价达到了1﹕4 096 000竞争抑制效果最好,工作稀释浓度为1﹕1 024 000时,线性范围在0.01～50 μg•L-1,标准曲线的IC50在0.71～1.0 μg•L-1,R2在0.9952～0.9978。获得各标准浓度下B/B0的批内变异系数在0.52%～22.48%,批间变异系数在2.64%～19.51%。交叉反应试验表明,4号家兔抗血清对与DES结构相似的人工合成二苯乙烯类雌激素药物己烷雌酚（HEX）和双烯雌酚（DIEN）的交叉反应率分别为8.5%和38.5%,与天然雌激素类药物雌二醇（E2）和乙炔雌二醇（EE2）以及L-酪氨酸（Tyr）的交叉反应均小于0.001%。【结论】本文报道的抗体特异性好、亲和力高,可满足目前中国动物性食品安全评价检测的需要,为研究组织中DES残留检测的ELISA方法及其开发DES快速检测试剂盒奠定了基础。