两种方法测定羊外周血淋巴细胞增殖的研究

本试验比较~3H胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)渗入法和BrdU-ELISA方法测定羊外周血淋巴细胞增殖。分离健康羊外周血淋巴细胞,与不同浓度的非特异刺激因子刀豆素A(concanavalinA,1.0,0.5,0.25,0.125,0.0625,0.0313,0.0156,0.0078,0.0039μg/孔)培养,分别用~3H胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)和5-溴-2’-脱氧尿苷(BrdU)标记细胞,测定刺激细胞和对照细胞的每分钟脉冲数cpm或光吸收值OD,计算刺激指数SI和光吸收值差△OD,统计学方法分析SI和△OD的相关程度。同样的方法测定羊试验感染肝片吸虫(Fasciola hepatica)后,在感染早期阶段(PIWO-PIW4)其外周血淋巴细胞在特异性抗原-片形吸虫分泌排泄产物(ESP,5μg/孔)刺激下的增殖。结果表明,刺激指数SI和光吸收值差△OD在两个试验中的相关系数分别为0.946和0.924,SI和OD用均呈强正线性相关。BrdU-ELISA方法无同位素放射物,且敏感、快速、方便,和~3H-TdR渗入法一样可以用于测定淋巴细胞增殖。