绵羊卵泡发育过程中关键信号通路研究进展

卵泡从原始卵泡发育为成熟卵泡，直至排卵、黄体发育等过程都受到精密的调控，产生大量的优势卵泡是绵羊产多羔及实现快速扩繁的关键因素。研究发现，相关信号通路和转录因子通过影响绵羊卵泡中卵母细胞、颗粒细胞的生长，进而调控卵泡的发育成熟，对这些信号通路进行深入了解，有助于探索卵泡发育的调控机制，早日实现绵羊高效繁育。Notch是卵泡发育过程中发挥重要作用的高度保守信号通路，PI3K/AKT/mTOR信号通路各成员都是广泛存在于细胞内的信号转导分子，在卵泡发育早期发挥了主要作用，还有间隙连接（gap junction，GJ）和跨带突触（transzonal projections，TZPs）等物理连接方式，在细胞间的交流通讯起到重要作用。作者详细介绍了Notch信号通路、PI3K/AKT/mTOR信号通路、间隙连接及跨带突触的结构功能在绵羊卵泡发育中的调控作用，为进一步探明绵羊卵泡发育的调控机制提供参考。     

罗甘口服液对香烟烟雾凝聚物(CSC)抑制V79细胞间隙连接通讯(GJIC)的保护作用

用划痕标记染料示踪技术(SLDT)观察了几种植物水提取的混合液--罗甘口服液对香烟烟雾凝聚物(CSC)抑制V79细胞间隙连接通讯功能(GJIC)的影响.研究结果证实40μg/ml以上剂量CSC可阻断GJIC功能.0.5～12.5mg/ml剂量罗甘口服液对GJIC无抑制作用.预加罗甘口服液对CSC阻断GJIC功能起保护作用,表明罗甘口服液可抑制CSC的促癌作用.     

山羊GJB2和GJB6基因多态性与产羔性能的关联分析

本研究旨在分析间隙连接蛋白2(GJB2)和间隙连接蛋白6(GJB6)的多态性与云上黑山羊产羔性能的关联性。利用MassARRAY~?技术对GJB2和GJB6的4个候选位点进行分型,探索其在云上黑山羊(n=544)、济宁青山羊(n=133)和辽宁绒山羊(n=91)3个群体中的遗传学特征,并分析其与云上黑山羊产羔性能(包括产羔数、初生窝重和断奶窝重)的关联性。结果表明,4个候选位点在不同繁殖力品种中的基因型分布存在极显著差异。在云上黑山羊中,GJB2的2个位点对产羔数无显著影响;所有候选位点对初生窝重和断奶窝重无显著影响;GJB6基因的g.50694816A>G位点AA型产羔数显著高于GG型;GJB6基因的g.50694819G>A位点GG型产羔数显著高于AG型。GJB6的组合基因型分析发现,AAGG型的产羔数显著高于AGGG型。以上提示,GJB6的2个位点可作为云上黑山羊产羔数选择的潜在分子标记,但不适合窝重选择。     

体外培养牛腔前卵泡颗粒细胞的超微结构研究

透射电镜下，简易机械法分离得到的腔前卵泡有1～3层颗粒细胞，相邻颗粒细胞间存在明显而广泛的间隙连接，卵泡基膜完整，外无卵泡膜。培养过程中超微结构的变化与体内发育腔前卵泡类似。培养6d时观察到颗粒细胞增殖现象，培养15d时，个别卵泡的内膜细胞开始形成。超微结构研究结果表明，本培养体系适于小腔前卵泡的体外培养。     

间隙连接对牛卵母细胞体外成熟的影响

该试验通过对牛卵母细胞不同形式的处理,讨论细胞间隙连接对于其体外成熟的影响作用.在最适于卵母细胞体外成熟的浓度(1.2 IU/mL)条件下,发现卵母--卵丘细胞之间的间隙连接对卵母细胞的成熟有着直接的影响,并且是体外成熟的一个有利条件.     

玉米赤霉烯酮对TM3细胞原癌基因及细胞间隙连接通讯的影响

为探讨玉米赤霉烯酮(ZEA)的雄性生殖毒性及其机制,本试验以TM3细胞为材料,加入不同浓度的ZEA,设对照组,5、10、20μg/L ZEA染毒组,培养72h后,应用噻唑蓝比色法(MTT)检测TM3细胞活力,免疫印迹法检测原癌基因c-myc、c-fos、c-jun及连接蛋白Cx43、P-Cx43蛋白的表达情况,应用划痕标记染料示踪(SLDT)技术观察GJIC功能的变化,同时通过免疫荧光观察Cx43在细胞内的分布情况。结果显示,各ZEA染毒组对TM3细胞生长有一定的促进作用;免疫印迹检测发现,与对照组相比,10、20μg/L染毒组c-fos的表达量明显升高(P0.05),5、10、20μg/L染毒组c-myc、c-jun表达量极显著增加(P0.01),而连接蛋白Cx43表达量在10μg/L染毒组中显著下降(P0.05),在20μg/L染毒组中极显著下降(P0.01),其磷酸化水平在20μg/L染毒组显著下降(P0.05);荧光显微镜观察到10、20μg/L染毒组荧光黄(LY)在细胞间的扩散距离较对照组有极显著下降(P0.01);ZEA染毒后,分布于细胞膜上的Cx43逐渐减少,出现在细胞质和细胞核上。结果表明,低浓度的ZEA即可诱发Cx43及其磷酸化水平的下调,Cx43在细胞内的异常分布,导致GJIC的功能受到抑制,同时引起原癌基因c-myc、cfos、c-jun异常的表达,低浓度的ZEA对TM3细胞的增殖产生了明显的促进作用。     

敌百虫对大鼠肝细胞[Ca~(2+)]_i、ATP酶及GJIC的影响

通过给大鼠肝细胞培养液中加入敌百虫(染毒终质量浓度分别为0,2,10,50 mg/L),探讨敌百虫对肝细胞内钙离子([Ca2+]i)、Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性及间隙连接通讯(GJIC)的影响。结果显示,不同质量浓度敌百虫作用12 h,[Ca2+]i均极显著高于对照组(P0.01);随着染毒剂量的增加,Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性及GJIC均显著或极显著下降(P0.05或P0.01)。说明敌百虫对肝细胞有明显的毒性作用,GJIC的下调可能与Ca2+浓度的升高和Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性的下降有关。     

绿茶儿茶素EGCG对小鼠肝脏上皮细胞GJIC（细胞间隙连接通讯）功能的抑制

绿茶中的多酚类物质EGCG具有很强的抗癌细胞增殖作用，是一种很有前途的癌症化学预防剂，但其可能的毒性和致癌性需进一步研究。细胞间隙连接通讯（GJIC）与致癌作用，特别是肿瘤增殖过程密切相关。作者研究了EGCG对WB—F344正常小鼠肝脏上皮细胞GJIC的影响，发现EGCG抑制GJIC具有剂量依赖性和可逆性，     

钙对成骨细胞活性、[Ca~（2＋）]_i及GJIC的影响

在体外培养4日龄SD大鼠成骨细胞（OB）的基础上,添加不同浓度钙（0、1、2、4mmol/L）,钙作用2d后,观察细胞活性、间隙连接通讯（GJIC）,测定钙离子（[Ca2＋]i）浓度;钙作用2、5、8d测定OB内总蛋白及Ⅰ型胶原（Col-Ⅰ）含量。与对照组比较,钙作用2d后,OB内线粒体增多,内质网扩张,细胞内[Ca2＋]i浓度增加,GJIC的荧光扩散距离缩小。总蛋白含量,在2d,钙1、4mmol/L组高于（P〈0.05或P〈0.01）对照组,在5、8d低于对照组,但仅在8d差异显著（P〈0.05或P〈0.01）。第2天后,钙抑制Col-Ⅰ分泌（P〈0.01）,在5、8d均促进（P〈0.05或P〈0.01）其分泌。结果表明,添加钙作用2d后,促进OB代谢及[Ca2＋]i沉积,抑制细胞间通讯,促进总蛋白分泌,抑制Col-Ⅰ分泌,促进了细胞增殖。增殖期过后,则抑制总蛋白分泌,促进Col-Ⅰ分泌,使OB较早的进入基质成熟期,利于骨骼的重建。     

绵羊卵丘细胞对卵母细胞减分恢复核成熟的影响

实验研究了卵丘细胞与卵母细胞通过间隙连接通道对绵羊卵母细胞核成熟的影响。采用抽吸法从2～6mm的卵巢上收集的卵丘-卵母细胞复合体COCs。将部分COCs脱去全部卵丘细胞,成为机械裸卵(DOs)后,分4种方式培养,即卵丘细胞包裹的卵母细胞(CEOs)的单独培养、DOs与COCs共培养(DOs(COCs))、DOs与卵丘颗粒细胞共培养的(DOs(CCs)),以及DOs单独培养,培养26h,用0.2%地衣红对绵羊卵母细胞进行染色检查。各组卵母细胞到达减数分裂2期的比率分别是79.6%、5.6%、9.9%和46.4%,4组间都有显著差异统计核成熟率(P<0.05)。表明卵丘细胞及间隙连接对卵母细胞减数分裂恢复核成熟有非常重要的作用。