甘氨胆酸对小鼠免疫功能的影响

目的:观察甘氨胆酸(Glycocholic acid,GCA)对正常及免疫抑制小鼠免疫功能的影响。方法:应用环磷酰胺或环孢菌素A所致的免疫抑制模型;采用ELISA及比色法观察了GCA对体液免疫的影响,碳廓清法测定了GCA对单核巨噬细胞的吞噬功能的影响,迟发型皮肤变态反应法观察了GCA对二硝基氯苯丙酮溶液所致小鼠迟发型皮肤过敏反应的影响,并测定了血清中IL-2、TNF-α的含量。采用流式细胞术检测了GCA对小鼠外周血T细胞亚群CD4、CD8比例的影响。结果:GCA能够显著增强正常及抑制小鼠的IgMI、gG的含量;增加外周血中T淋巴细胞CD4比例,使CD4 /CD8 比值提高;显著抑制迟发型皮肤变态反应的发生,并增加IL-2及TNF-α的含量。结论:GCA能够显著提高非特异性免疫功能;显著增强机体的体液免疫能力;显著抑制迟发型变态反应,增强正常及CsA抑制小鼠CD4 百分率、CD4 /CD8 比值,GCA具有调节机体免疫功能的作用。     

羊胆汁中甘氨胆酸提取工艺研究

[目的]开展从羊胆汁中提取、分离和纯化甘氨胆酸的工艺研究。[方法]采用除蛋白、除色素、回收乙醇、盐析、萃取等生物化学方法,从羊胆汁中分离提取甘氨胆酸。采用了吸附色谱法和薄层层析色谱法分离纯化和鉴定了甘氨胆酸。[结果]结果表明,该研究方法所提取的GCA纯度达97.3%。[结论]首次建立了从羊胆汁中提取甘氨胆酸的技术路线,为临床用药的进一步开发奠定了基础。     

牛羊胆汁中甘氨胆酸提取纯化工艺研究

采用盐析、萃取、柱层析等生物化学方法,从牛、羊胆汁中提取出了有效成分甘氨胆酸,并采用薄层层析法及薄层扫描法进行定量、定性检测,测得甘氨胆酸的纯度可达98%以上,牛羊胆汁甘氨胆酸的回收率分别为64%和62%。     

天然甘氨胆酸和牛磺胆酸的提取研究

[目的]建立从牛羊胆汁中分离提纯天然甘氨胆酸和牛磺胆酸的工艺。[方法]采用盐析、萃取、脱水等生物化学方法和柱层析正交试验筛选天然甘氨胆酸和牛磺胆酸的最佳提取工艺。[结果]在流动相为氯仿和正丁醇,洗脱比例为3：2,装样量为3000ml胆汁粗提物,洗脱速度为6～10ml／s时提取量最大。所得产品经薄层层析法、红外光谱扫描法证实为甘氨胆酸和牛磺胆酸。经薄层扫描法测定含量,甘氨胆酸和牛磺胆酸平均纯度分别达98．4％和98．6％;提取方法平均回收率分别为63．7％和67．8％。该提取方法稳定可行,具有原材料丰富、价廉,产品纯度高、活性强等优点,适宜对天然甘氨胆酸和牛磺胆酸进行分离提制。[结论]建立了适宜对天然甘氨胆酸和牛磺胆酸进行分离提制的提取工艺。为甘氨胆酸和牛磺胆酸的工业化生产奠定了基础。     

甘氨胆酸抗炎作用的研究

目的:研究甘氨胆酸的抗炎作用。方法:采用小鼠耳廓肿胀法、皮内染料渗出法、甲醛和琼脂所致大鼠足跖肿胀法以及棉球肉芽肿胀法,观察甘氨胆酸的急慢性炎症反应。结果:高、低剂量的甘氨胆酸对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀和小鼠皮肤毛细血管通透性,棉球所致小鼠肉芽肿,甲醛所致大鼠足跖肿胀以及琼脂所致大鼠足跖肿胀均有显著抑制作用。结论:甘氨胆酸对急性和慢性炎症均有显著的抑制作用。     

GCA对小鼠腹腔巨噬细胞抗氧化作用的影响

以小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象,探讨牛羊胆汁提取物甘氨胆酸（glycocholic acid,GCA）的抗氧化作用。将GCA分为1×10^-3、1×10^-4、1×10^-5、1×10^-6、1×10^-7 μg/mL 5个质量浓度,与小鼠腹腔巨噬细胞共同孵育24 h后,按照试剂盒说明书提供的方法测定小鼠腹腔巨噬细胞中抗氧化酶谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）活性以及丙二醛（MDA）含量。结果表明,GCA能降低小鼠腹腔巨噬细胞中MDA的含量,同时提高小鼠腹腔巨噬细胞GSH-Px、SOD的活性,从而调节小鼠腹腔巨噬细胞的抗氧化应激水平。该试验结果提示甘氨胆酸具有改善抗氧化应激反应的能力。     

甘氨胆酸在大鼠血清中的药动学研究

考察甘氨胆酸在大鼠血清中的药代动力学特征。采用固相萃取-反相高效液相色谱法测定了给药后不同时间大鼠血清中甘氨胆酸含量,并做了方法学考察。结果显示在0.15625~10.0μg/mL范围内甘氨胆酸浓度与峰面积呈良好的线性关系,回归方程Y=39 579X+57 823,R2=0.9984;平均回收率98.49%;日内RSD 0.52%~2.00%,日间RSD 0.74%~4.98%;血清药时曲线符合一级吸收二室模型,药动学方程:C=41.17e-1.256t+84.7e-0.491t-125.87e-0.667t。结果表明,该方法适用于血清中甘氨胆酸含量的分析,并首次得到了有关药动学数据;甘氨胆酸口服给药后,在大鼠体内吸收快,消除较缓慢,在体内能保持较长时间的药物浓度,有利于其临床药理作用的发挥。     

甘氨胆酸对小鼠体外脾淋巴细胞凋亡的影响

本研究旨在探索不同浓度的甘氨胆酸(Glycocholic acid,GCA)对小鼠体外脾淋巴细胞凋亡的影响。在0.02μg/ml,0.035μg/ml,0.07μg/ml,0.21μg/ml,1.05μg/mL不同浓度的GCA作用下,应用倒置显微镜观察了体外脾淋巴细胞的核形态,采用琼脂糖凝胶电泳法检测了脾淋巴细胞的DNA片段,采用流式细胞仪测定了脾淋巴细胞凋亡早期磷脂酰丝氨酸外翻百分率;采用分光光度法测定了凋亡细胞氧化还原反应活性——GSH的含量;通过ELISA法检测了Caspase-3和Caspase-9的活性。结果:GCA能够使脾淋巴细胞细胞产生核固缩和凋亡小体;显著引起脾淋巴细胞DNA片段化(P<0.05),极显著的诱导脾淋巴细胞磷脂酰丝氨酸外翻(P<0.01);显著降低GSH的含量(P<0.05);显著提高Caspase-9和Caspase-3的活性(P<0.05)。结论:GCA具有显著的提高小鼠体外脾淋巴细胞凋亡的作用(P<0.05)。     

固相萃取-反相高效液相色谱法测定大鼠血清中的甘氨胆酸

通过建立血清中甘氨胆酸浓度的测定方法,旨在为观察甘氨胆酸在大鼠血清中浓度的变化规律做试验依据,为开发有价值的动物源性药物做前期探索.试验采用固相萃取-反相高效液相色谱法(SPE-HPLC),色谱柱为Waters Xterra RP18(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-KH2PO4溶液,检测波长213 nm,柱温30℃,进样体积10 μL.结果在0.156 25～10.0 μg/mL范围内甘氨胆酸浓度与峰面积呈良好的线性关系,回归方程Y= 39 579X+57 823,R2=0.998 4;以信噪比S/N=3为标准,最低检测浓度为0.02 μg/mL,平均回收率98.49%;日内RSD 0.52%～2.00%,日间RSD 0.74%～4.98%.该方法具有简便、稳定、灵敏、准确、实用等特点,适用于血清中甘氨胆酸含量的测定分析.