副猪嗜血杆菌Apd-ELISA抗体检测试剂盒的制备和初步应用

旨在对副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,HPS）的黏附素蛋白（autotransporter passenger domain,Apd）ELISA抗体检测方法进行参数优化、临界值确定和应用评价,获得性能稳定的副猪嗜血杆菌病抗体检测试剂盒。首先通过猪的免疫攻毒试验获得HPS阴、阳性对照血清,优化Apd-ELISA的反应参数;然后用背景确认的阴、阳性血清确定其临界值,并对封闭液及酶标板的包装方式进行选择;最后用Apd-ELISA试剂盒对临床样品进行检测并与荷兰Biocheck的OppA-ELISA试剂盒进行比较。结果表明,抗原包被质量浓度为0.5 μg·mL^-1、被检血清以1：200倍稀释后反应45 min以及二抗稀释度为1：15 000时,Apd-ELISA的反应背景下降,区分度提高。根据背景确认的27份阳性和40份阴性血清的OD_{630 nm}值以及临界值计算公式（S-N）/（P-N）,得到Apd-ELISA的阴阳性临界值是0.33。证实用封闭液K封闭和真空包装的酶标板可以在50℃保存4 d（相当于在4℃保存22个月）。用Apd-ELISA试剂盒检测1 179份临床血清,表明母猪、后备和育肥猪以及仔猪的HPS血清阳性率分别为83.76%、61.09%和27.48%。与荷兰的Biocheck试剂盒进行比较,发现Apd-ELISA与Biocheck试剂盒（OppA-ELISA）对HPS临床阴性血清和疫苗免疫血清检测的符合率为100%,对HPS临床阳性血清的符合率仅为4.76%（6/126）。然而,Apd-ELISA与OppA Western blot的阳性符合率可达到73.02%（92/126）。本研究获得了能有效区分HPS阴、阳性血清和稳定保存的Apd-ELISA抗体检测试剂盒,可用于HPS灭活疫苗免疫后的抗体检测和副猪嗜血杆菌病的血清抗体检测。     

ELISA检测方法中最佳封闭液和样品稀释液的筛选研究(英文)

[目的]为提高酶联免疫吸附法(ELISA)的敏感性和特异性,研究分析了不同类别和不同浓度的封闭液和样品稀释液对ELISA检测结果的影响。[方法]研究采用酪蛋白(Casein)、明胶(Gelatin)、BSA、山羊血清(GS)、马血清(HS)和兔血清(RS)等不同类封闭液和同一类不同浓度封闭液进行ELISA检测试验。[结果]2%BSA较1%BSA和3%BSA封闭效果好,2%Casein和1%Casein较3%Casein封闭效果好,8%RS和10%RS封闭效果强于6%RS和7%RS;与BSA和Casein相比,RS具有更好的封闭效果,且8%RS封闭液和8%RS样品稀释液组合最佳。[结论]良好的封闭液和样品稀释液组合可有效降低非特异性反应,提高ELISA检测方法的敏感性和特异性,这为良好ELISA检测方法的建立提供了重要实践指导作用。     

免疫过氧化物酶单层细胞试验检测猪圆环病毒2型方法的建立

猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)是目前发现的最小的动物病毒,属圆环病毒科、圆环病毒属病毒[1]。根据PCV的致病性、抗原性和核苷酸的序列差异将它分为猪圆环病毒1型(PCV-1)和猪圆环病毒2型(PCV-2)2个血清型[2]。以前的研究认为,PCV-1对猪没有致病性[3],PCV-2对猪有致病性,但两者都不引起细胞病变[4]。但近年来从死产的仔     

封闭液对ELISA检测蓖麻毒素的影响

通过对30种封闭液与3种封闭条件对ELISA检测蓖麻毒素方法的封闭条件进行了优化,由P/N值得到1%酪蛋白+5%脱脂乳与5%脱脂乳+2%PEG 2万两种封闭剂在包被后孵育一次的封闭效果相似,也是所有组合中封闭效果最好的,从而大大提高了ELISA检测蓖麻毒素的敏感性和特异性。