甘蔗热带种金属硫蛋白家族基因的克隆及响应重金属胁迫的表达分析

金属硫蛋白是一类富含巯基的低分子量蛋白,在植物的重金属解毒及细胞氧化还原调控等方面起重要的作用。本研究以甘蔗热带种Badila组培苗为材料,分别测定了其在CdCl2、ZnSO4和CuCl2水溶液培养条件下地上部和地下部的重金属含量,结果显示其对上述3种重金属有较强的耐受与富集能力。继而克隆了ScMT1(登录号为KJ504373)、ScMT2-1-5(登录号为MH191346)和ScMT3(登录号为KJ5043704)3个金属硫蛋白家族基因,它们分别属于植物MT亚家族中的MT1、MT2和MT3型基因。ScMT1含有1个内含子和2个外显子,开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)长228 bp,编码75个氨基酸;ScMT2-1-5含有2个内含子和3个外显子,ORF长246 bp,编码81个氨基酸;ScMT3含有1个内含子和2个外显子,ORF长198 bp,编码65个氨基酸。RT-qPCR显示,Cd2+胁迫下,在甘蔗地上部和地下部,ScMT2-1-5均连续显著上调表达,而ScMT1的上调应答出现延迟。ScMT3在地上部的上调应答出现延迟,在地下部呈“扬-抑”趋势,提示甘蔗响应Cd^2+胁迫过程中ScMT2-1-5起更积极的作用,ScMT1参与胁迫后期的分子响应,而ScMT3不起主导作用。Cu^2+胁迫下,地上部ScMT1连续显著上调表达,ScMT2-1-5和ScMT3呈总体上调的表达趋势;地下部,ScMT1和ScMT2-1-5的上调表答均出现延迟,仅在胁迫后期显著上调表达,而ScMT3仅在胁迫前期显著上调表达。该结果提示了ScMT1、ScMT2-1-5和ScMT3在Cu2+胁迫响应过程中的协作关系,三者共同参与了地上部的胁迫响应,其中ScMT1起更积极的作用;此外三者还先后参与了地下部对Cu^2+胁迫的分子响应。Zn^2+胁迫下,ScMT1和ScMT3分别仅在地上部和地下部显著上调表达;ScMT2-1-5在地上部和地下部均呈“扬-抑”的应答趋势;提示了在甘蔗响应Cd^2+胁迫应答过程中ScMT1和ScMT3分别在地上部和地下部起主要作用,ScMT2-1-5参与了胁迫前期的分子响应。ScMT1、ScMT2-1-5和ScMT3在甘蔗不同组织中及在重金属(Cd^2+、Zn^2+或Cu^2+)不同累积水平下呈现出相似或互补的应答特性,提示上述甘蔗MT家族不同成员在重金属解毒及细胞氧化还原调控等方面产生了功能分化,且三者在应对过量Cd^2+、Zn^2+或Cu^2+对甘蔗组织造成伤害的过程中存在时空上的协同作用。该研究为深入理解多倍体植物甘蔗中MT家族各成员基因在重金属耐受过程中的协同作用机制奠定了基础。     

旋毛虫Serpin基因在不同发育时期的mRNA表达水平变化及虫体表达特性

为研究旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpin),基因在不同发育时期的mRNA表达水平变化,本研究应用实时荧光定量PCR技术对不同发育时期的虫体的Serpin在mRNA表达水平进行检测。同时利用鼠抗重组蛋白血清对Serpin在旋毛虫成虫、新生幼虫、成囊前期幼虫及肌幼虫中进行定位,以鉴定该Serpin基因的表达特性。研究结果显示,在成虫时期,3 d时表达量明显高于6 h和5 d的表达量(P﹤0.05);成囊前期表达量很低,其中18 d时表达量最低(P﹤0.05);肌幼虫时期在26 d、38 d和48 d均有大量表达(P﹤0.05)。免疫荧光染色结果表明,Ts Serpin蛋白在5 d成虫期的体表表达;在新生幼虫和14 d成囊前期幼虫的体内体表均有表达;38 d肌幼虫时期明显可见表皮及体内均有表达。本实验为探究旋毛虫在宿主体内免疫逃避机制奠定基础。     

超声辅助萃取六味地黄丸中没食子酸工艺优化

采用超声辅助萃取法从六味地黄丸中提取没食子酸,考察溶剂比例(甲醇:0.1％乙酸)、超声温度、超声时间和超声功率对六味地黄丸中没食子酸提取率的影响,通过单因素试验和正交试验研究六味地黄丸中没食子酸超声辅助萃取法的最佳工艺条件.结果表明,六味地黄丸中没食子酸的最佳工艺条件为溶剂比例(甲醇:0.1％乙酸)2:8、超声温度40℃、超声时间30 min、超声功率180 W.没食子酸在1.6～19.2μg/mL线性关系良好(R2=0.999),平均加标回收率为99.3％,相对标准偏差(RSD)为2.5％(n=3).超声辅助萃取法与浸渍提取法相比,提取没食子酸含量增加了17.14％～23.62％.     

猪肺炎霉形体膜制备方法对膜活性影响的研究

以猪肺炎霉形体为材料，分别采用反复冻融、低渗裂解、超声破碎等方法进行破膜试验。从膜蛋白收获率、标志酶活性、膜毒性等方面加以分析，以探讨获取膜制剂的最佳条件。结果表明，采用低渗冻融超声相结合的膜制备方法使膜蛋白的收获率达30％左右；ATPase活力及膜毒性良好。     

超声对肠梗阻的诊断价值

目的：观察B型超声对肠梗阻的诊断价值。方法:采用实时超声诊断仪，对12例肠梗阻的表现进行回顾性超声显像分析。结果：肠梗阻在B超声像图上可清晰显示肠管扩张伴积液积气及肠壁粘膜水肿征象，并可观察到肠蠕动情况,12例中有11例经临床和手术证实，B超诊断符合率为92％。结论：B超对肠梗阻诊断有重要价值。     

压力实时监测法在管道泄漏检测中的应用

检测输油管道漏油的方法很多，介绍了通过压力实时监测确定输油管道漏油点方法，以及实际应用情况。实践证明，通过压力实时监视确定输油管道漏油点的方法在实际输油运行中是切实可行的。     

禽胰多肽对肉鸡肝脏和小肠组织中APPR mRNA表达量影响的研究

本试验旨在研究禽胰多肽(APP)对肉鸡肝脏和小肠组织中APPR mRNA表达量的影响.试验以APP粗提液及层析APP制品为材料,选取90只1周龄艾维菌肉鸡随机分为5组,每组3个重复,每个重复6只鸡.Ⅰ设为对照组,Ⅱ、Ⅲ设为饲饮组,Ⅳ、Ⅴ设为注射组.在第7周末,屠宰取其肝脏、小肠组织,运用SYBR Geen Ⅰ实时荧光定量PCR(RT-PCR)法对肝脏和小肠中APPR mRNA的表达进行相对定量分析.结果发现:注射组与饲饮组肝脏及小肠中APPR mRNA的表达水平与对照组相比均呈下降趋势,且注射组降低程度大于饲饮组降低程度;其中,注射组与饲饮组中均是层析APP制品比APP粗提液的下降较明显.提示在外加APP情况下可对APPR mRNA的表达呈现抑制作用.本研究结果为进一步探讨APP与其受体之间的关系,从而为阐明其生理功能和作用机制提供一定的理论依据.     

B型超声诊断法在母猪怀孕鉴定中的应用

近几年来，由于养猪行情看好，群众养猪热情高涨，养猪场如雨后春笋迅猛发展，数量上急剧膨胀，规模养殖方兴未艾，但母猪因空怀造成产仔率低下使得养殖成本提高，空栏率高，不能按计划生产，从而给养殖户造成了巨大的经济损失，主要原因是母猪的早期妊娠诊断技术未能及时推广。过去的妊娠诊断技术技术落后、准确性差、方法复杂或费用昂贵，缺少能应用于临床且简便易行的、准确可靠的方法。鉴于这种情况，笔者从2004年初开始探索B型超声诊断法在猪怀孕鉴定中的应用，经4600余头次母猪配种22天后的妊娠诊断试验，准确率达100％。通过笔者一年多来在临床上的应用，认为B型超声诊断法在养猪生产中简便易行、准确可靠、费用低廉，是一种值得大力推广的新型怀孕诊断技术。     

植物病毒检测新技术研究进展

本文主要介绍了酶联免疫吸附测定、快速免疫滤纸测定、免疫胶体金技术、毛细管区带电泳、免疫PCR等血清学方法和PCR、分子信标、实时RT-PCR、核酸杂交等分子生物学方法的原理及特点,并重点介绍了近几年发展起来的免疫胶体金技术、毛细管区带电泳、分子信标和TaqMan实时RT-PCR等植物病毒检测技术.