北京鸭源鹅出血性多瘤病毒的分子检测

鹅出血性多瘤病毒(Goose hemorrhagic polyomavirus,GHPyV)是鹅出血性肾炎肠炎的致病病原,迄今为止,国际上已从鹅、番鸭和半番鸭中检测到GHPyV。为了解北京鸭是否存在GHPyV的感染,本研究从北京、山东、河北、河南等地的北京鸭种鸭场采集肝脾组织样品68份,并用GHPyV特异性PCR进行了检测。结果显示,从5份肝脾组织样品中检出GHPyV的VP1基因。选一株北京鸭源GHPyV(106株)测定了基因组序列。测序结果显示,北京鸭源GHPyV基因组长度为5 254bp,相对于德国鹅源GHPyV毒株Germany 2001,106株基因组在其编码区共有10个碱基位发生突变,但只有2个碱基位的突变引起氨基酸的置换;此外,106株基因组的非编码区存在2个核苷酸的缺失。对不同水禽来源的GHPyV基因组序列进行比较的结果表明,GHPyV的基因组序列具有高度保守性。由于GHPyV可感染鹅、番鸭、半番鸭和北京鸭,表明该病毒具有较广泛的宿主范围。     

青岛即墨鹦鹉幼雏病的诊断及病毒VP1基因序列分析

2008年7月末,青岛即墨地区爆发流行一种以15日龄以下幼雏鹦鹉呈腹泻、羽毛发育障碍为临床特征、高度致死性传染病。剖检可见肝脏肿大、心脏肿大、心包积液、肾脏肿大等病变。根据临床症状,结合本地流行史,怀疑为鹦鹉幼雏病(BFD)。随后,利用PCR对从两个发病户带回的4只濒死鹦鹉进行BFDV的检测,结果核酸扩增为阳性,并对扩增的VP1基因序列进行了测序与分析。结合临床症状、流行病学特征和实验室诊断,确诊此次疫情为鹦鹉幼雏病。     

一株禽多瘤病毒的分离鉴定及其VP1基因序列分析

从陕西某养鸟场发病鹦鹉幼雏体内分离到1株禽多瘤病毒(201808SX株),该病毒能在7日龄SPF鸡胚上繁殖,并呈现明显的胚体病变。通过克隆测序,获得了禽多瘤病毒(201808SX株)VP1基因全基因序列。同源性分析表明,201808SX分离株与不同地区不同时间APV分离株的VP1基因核苷酸同源性均较高,不低于99.4%,与2006年日本分离株、2009年中国潍坊分离株、2018年中国山东分离株和2018年中国C4-15分离株等同源性最高,均为100%。遗传进化分析表明,201808SX分离株在遗传进化上与2006年日本分离株、2009年中国潍坊分离株、2018年中国山东分离株、2018年中国C4-15株、2010年波兰分离株和2016年葡萄牙分离株处于同一小分支,均属于CladeⅡ分支。这是国内首次报道,将临床病料组织上清经卵黄囊接种7日龄SPF鸡胚成功地分离到APV,这为BFD的研究和防控奠定基础。试验结果也首次证实陕西地区虎皮鹦鹉中存在APV感染,丰富了国内APV流行的基础数据。     

樱桃谷鸭源鹅出血性多瘤病毒VP3基因的克隆与序列分析

为明确福建地区是否存在鹅出血性多瘤病毒（goose hemorrhagic polyomavirus,GHPV）感染,本研究对2016年福建省临床送检测19份鸭组织样品进行GHPV检测,结果从1例樱桃谷鸭中检测到GHPV感染阳性（记为GHPV-FJ201601株）。随后根据GenBank中GHPV参考株序列特征,设计针对GHPV的VP3基因特异性引物,利用PCR技术扩增获得GHPV的VP3基因片段。结果显示,GHPV-FJ201601株的VP3基因全长为654 bp,编码217个氨基酸。对编码的VP3蛋白分析发现其理论等电点为9.37,带负电荷氨基酸为23个（Asp+Glu）,带正电荷氨基酸为28个（Arg+Lys）;不稳定指数为38.43,是一个稳定蛋白;脂肪系数64.33,总平均疏水性指数为－0.744;该蛋白无典型的信号肽切割位点;其亚细胞定位类型为核定位;对其进行磷酸化分析发现,该蛋白存在14个氨基酸磷酸化位点。核苷酸同源性分析显示,不同来源GHPV代表株VP3基因相互之间核苷酸同源性均较高,均不低于99.7%。VP3基因遗传进化结果显示,GHPV-FJ201601株和鹅源GHPV分离株（匈牙利14234株与法国Toulouse Goose 2000株）处于同一遗传进化分支,与鸭源分离株（法国Toulouse Muscovy Duck 2008株、法国Toulouse Mule Duck 2008和中国106株）却处于不同的遗传进化分支,但所有GHPV分离株VP3基因遗传进化均较近。本研究首次证实福建地区樱桃谷鸭群中存在GHPV感染,为丰富不同地区与宿主的GHPV分子流行病学数据提供参考。     

PCR结合斑点杂交技术检测禽多瘤病毒方法的建立及应用

鹦鹉幼雏病是由禽类多瘤病毒(APV)引起的多种鹦鹉雏鸟死亡的急性病毒性传染病,严重危害鹦鹉养殖业的健康发展.为提高分子生物学方法检测APV的敏感性和特异性,对APV基因片段进行克隆和序列分析,设计合成1对特异性引物,以VP1基因为模板,经PCR扩增获得731 bp的核苷酸DNA,并用DIG标记,制备用于检测APV的特异...     

鸡腺胃炎的发病原因及流行规律

鸡腺胃炎是一种以腺胃炎性肿大,胸腺、法氏囊萎缩为主要特征的新传染病,我地区父母代种鸡和商品代肉鸡及产蛋鸡均频繁发生,并且呈逐年递增的趋势。1病原分析目前,该病病原还没明确说法。人们已在腺胃病变组织中观察及分离到多种病毒,有冠状病毒、呼肠孤病毒、禽网状内皮增生症病毒、真菌毒素、肿瘤诱生病毒、多瘤病毒、腺病毒、双RNA病毒等,细菌及饲料原料因素也可引发。我国有人从江苏省病     

山东省3家鹦鹉养殖场多瘤病和喙羽病的病原检测与序列分析

2018年山东省某养殖场发生大量幼龄鹦鹉死亡事件,疑似为病毒感染。为探寻病因,开展了该场及省内另外两个鹦鹉养殖场的流行病学调查。利用PCR技术对临床样品中提取的DNA或RNA进行检测,结果发现新城疫与禽流感病毒均呈阴性,而禽多瘤病毒(APV1)与鹦鹉喙羽病病毒(PBFDV)呈现为强阳性,由此推断此3个鹦鹉养殖场存在APV1和PBFDV感染,平均病毒检出率分别为67.9%与71.4%,共感染检出率率为58.0%。对阳性样品进化全基因分析发现:区域内的PBFDV流行毒株同源性高,与该地区早期报道的毒株亲缘关系较为接近;APV1的VP1基因同源性较高,与欧洲分离毒株亲缘关系较为接近,说明我国流行的APV1或来源于进口鹦鹉。本研究警示,需要加强鹦鹉疾病防控,严格鹦鹉进出口检疫,并制定和健全标准的鹦鹉病检疫程序。     

中国发现澳洲长尾小鹦鹉幼雏病

１９９４年７月以来，青岛地区爆发流行一种以１５～３０日龄幼雏鹦鹉呈腹泻、羽毛发育障碍为临床特征的急性、高度致死性传染病。病理组织学检查，可在呈大理石样病变的肝组织、肾病变组织和肠上皮细胞内看到核内包涵体。取病变内脏，经磨碎、超声波处理、离心等系列处理后，经负染于电镜下可看到直径４５～５５ｎｍ圆形病毒颗粒，病毒形态与乳多空病毒相似。将组织悬液接种于鹦鹉胚成纤维细胞，盲传４代后即可见到细胞病变（ＣＰＥ）。ＣＰＥ表现为细胞肿大、变圆、脱落，ＨＥ染色可见到病变细胞内有核内包涵体。将细胞培养物接种于１日龄鹦鹉，能复制出与自然病例相似的临床症状。初步研究结果表明，青岛地区目前流行的此种传染病为澳洲长尾小鹦鹉幼雏病，是由乳多空病毒科的多瘤病毒引起的。     

山东某鹅场细小病毒、圆环病毒和多瘤病毒感染情况调查

为了解鹅细小病毒(GPV)、鹅圆环病毒(GoCV)和鹅多瘤病毒(GHPV)的感染情况，本试验于2019年4—11月对山东某鹅场送检的1 474份青年鹅脾脏采用PCR检测法，对样品中GPV、GoCV和GHPV的特异性基因片段进行检测。结果显示：该鹅群中GPV、GoCV及GHPV单一感染率分别为15.13%(223/1 474)、20.15%(297/1 474)和3.46%(51/1 474),部分样品存在2种或3种病毒共感染。检测结果表明该鹅场青年鹅群存在较为严重的感染和带毒情况，有必要制定一些有效的防控措施。