嗜水气单胞菌UDP-乙酰葡萄糖胺-4-差向异构酶基因的克隆表达及酶的性质

通过水生动物源性嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila,Ah）强毒株J-1株与弱毒株MR-1株抑制差减杂交得到gneJ差减片段,该片段与创伤弧菌（Vibrio vulnificus）和人源嗜水气单胞菌的UDP-乙酰葡萄糖胺-4差向异构酶基因有较高的同源性。扩增完整的gneJ基因,进行分布检测并将其克隆至质粒pET32a（＋）,在大肠杆菌（Escherichia coli）BL21中进行异源表达,SDS-PAGE结果显示,重组表达蛋白的分子量约59．7kD,与理论推测值基本相同。酶活性分析表明,该重组蛋白可将UDP-乙酰葡萄糖胺转化为UDP-乙酰半乳糖胺,确证gneJ基因编码蛋白为UDP-乙酰葡萄糖胺-4-差向异构酶。Western Blot分析显示,嗜水气单胞菌J-1株胞外产物的兔抗血清可识别该重组蛋白,表明该蛋白与天然蛋白有相同的抗原性。以重组蛋白为免疫原,对小鼠进行动物保护实验,结果显示,该重组蛋白对小鼠有60％的保护率,证明UDP-乙酰葡萄糖胺-4差向异构酶可作为亚单位疫苗的侯选成分。     

绵羊肺炎支原体 p113 基因的序列分析及功能预测

采用多种软件对p113基因的相似性、跨膜结构、重复序列、信号肽、抗原表位等进行预测,并与同源序列进行比较分析.结果表明,p113基因是猪肺炎支原体黏附素基因p97的直系同源基因,并具有与P97蛋白R2区类似的特征性重复序列.通过综合比较分析,推测P113蛋白极可能是绵羊肺炎支原体的黏附素和膜表面免疫原.     

家禽抑制素和活化素结构与功能的研究进展

许多研究显示,利用活化素和各种来源的抑制素作免疫原,可不同程度地提高家禽的排卵率和产蛋率.因此,研究家禽的这2种激素,对提高家禽产蛋量和繁殖性能具有重要的现实意义.文章对家禽抑制素和活化素的来源、结构特性及其对家禽生产性能的作用进行了综述.     

食品总铬质量浓度icELISA试剂盒的研制及初步应用

为研制食品中总铬质量浓度检测间接竞争ELISA(icELISA)试剂盒(Cr-Kit)。利用蛋白质连接技术合成免疫原Cr~(3+)-iEDTA-BSA,紫外扫描(UV)和电感耦合等离子体原子发射光谱(ICP-AES)进行鉴定;用Cr~(3+)-iEDTA-BSA免疫BALB/c小鼠,细胞融合技术筛选抗Cr~(3+)-EDTA mAb细胞株,体内诱生腹水法制备Cr~(3+)-EDTA mAb,并对其特性进行分析;应用Cr~(3+)-EDTA mAb研制Cr-Kit,测定其性能并进行初步应用。结果表明,免疫原制备成功,Cr~(3+)-iEDTA-BSA中Cr~(3+)和BSA的质量浓度分别为140.8mg/L和5.81g/L;筛选出2A3C11、2A3D9、2A11G5共3株杂交瘤细胞株,其中2A11G5最好,经6次传代分泌抗体稳定,亲和常数(Ka)为2.69×109 L/mol,与其他重金属离子无交叉反应;Cr-Kit标准曲线的线性范围为1.0~264μg/L,检测限为1.0μg/L,IC50为8.37μg/L,河水样、大米样、面粉样和猪肉样的平均加标回收率分别为101.7%、96.47%、95.8%和84.3%,Cr-Kit与国标(GB5009.123-2014)石墨炉原子吸收光谱法(GFAAS)的符合率为100%。本研究成功研制了Cr-Kit,可满足食品总铬残留的检测要求。     

膜蛋白和糖蛋白免疫原对植物青枯菌血清分型比较

以青枯假单胞菌膜蛋白和糖蛋白为免疫原对植物青枯菌的血清分型进行了比较研究。４个菌株的膜蛋白抗血清和相应的４个糖蛋白抗血清的琼脂双扩散试验，在近抗原孔处，同源菌株均产生１条或２条清晰的沉淀带。膜蛋白的糖蛋白具有相似的特异性和种下区分作用，其血清分型结果完全一致。     

采用改良的水稀释法提取卵黄抗体的试验

以鼠伤寒沙门氏菌免疫产蛋鸡后，收集卵黄液，用水稀释法提取卵黄抗体(IgY)。实验中所用的水稀释法，即将释释倍数和稀释时的pH值均重新调整，且采取关键性的滤纸过滤，再盐析和柱层析，最后得到IgY的纯度为90％以上，表明改良的水稀释法可以较好的提纯卵黄抗体，避免了常规方法中除脂不彻底的弊端。     

猪带绦虫六钩蚴cDNA文库的构建及免疫原基因的筛选与克隆

研究避开庞大的猪带绦虫基因组DNA,以构建六钩蚴发育阶段的cDNA表达文库为策略,利用pSPORT1质粒表达载体首次成功构建了表达文库。经库容量、重组率和代表性测定,库容量达5.0×106,重组率100%,用特异性引物能扩增出六钩蚴发育阶段10ku基因、18ku基因和45W基因家族的A型、B型、C型转录本,说明文库质量高,代表性强。应用快速筛选质粒表达文库和克隆免疫原基因的技术,成功地筛选和克隆到TsO1基因,其完整阅读框架(ORF)为393bp。将其登录到GenBank(AY327451),经BLAST分析,证实是猪带绦虫六钩蚴发育阶段的1个新免疫原基因。     

浅谈猪三联苗在实际运用中应注意的几个问题

猪三联苗是指猪瘟、猪丹毒、猪多杀性巴氏杆菌(猪肺疫)三种免疫原联合的疫苗.猪三联苗的组合基本上是合理的,它主要针对我国常发生的传染病,同时免疫可减少注射次数,尤其方便于中小养殖场和散养户.     

哈维氏弧菌的血清型与菌苗抗原性的关系

采用不同血清型哈维氏弧菌Vibrio hanwyi624、809和106等3个菌株，制备成福尔马林灭活菌苗，注射接种大黄鱼4周后，通过血清中凝集、交叉凝集抗体效价测定以及活菌攻毒试验，证明了3个菌株制备的菌苗抗原性存在差异。