有机磷杀虫剂毒死蜱的免疫化学分析方法研究

 将免疫抗原AR-BSA免疫兔子,制得了高效价的抗毒死蜱多克隆抗体,采用改良高碘酸钠法将纯化的抗体制备了酶标抗体。利用所得的抗体与酶标抗体,分别建立了有机磷杀虫剂毒死蜱的免疫化学分析方法,间接竞争ELISA法与直接竞争ELISA法的检测限分别为0.0033和0.0042μg·ml-1,它们的检测范围在0.005～2.0μg·ml-1之间,线性关系较好。     

Production and Identification of High Affinity Monoclonal Antibodies Against Pesticide Carbofuran

To produce high-affinity monoclonal antibodies against pesticide carbofuran, and the develop immunochemical assays for people＇s health and environmental protection, the hapten 4-[[（2,3-dihydro-2,2-dimethyl-7-benzofuranyloxy） carbonyl]- amino]-butanoic acid （BFNB） of carbofuran was synthesized and Balb/c mice were immunized by the hapten-carrier （BFNB-bovine serum albumin, BFNB-BSA） conjugates. The splenocytes of immunized mice were fused with Sp2/0 cells and the cultural supernatants of hybridoma cells were screened by the indirect enzyme-linked immunoabsorbent assay （ELISA）, based on BFNB-ovoalbumin conjugates （BFNB-OVA）. Purified monoclonal antibody （McAb） was obtained from fluids of ascites, deposited by octanoic acid and ammonium sulfate. The affinity and the specificity of McAb were characterized by ELISA or indirect competitive ELISA. A hybridoma cell line （5D3） secreting anti-carbofuran McAb had been established. The titer of culture medium and ascites was up to 1：2.048 × 10^3 and 1：1.024 × 10^6, respectively, and the subtype of the McAb was IgG1. The affinity constant of the McAb was about 2.54 × 10×9 L mol^-1, with an IC50 value of 1.18 ng mL^-1 and a detection limit of 0.01 ng mL^-1. Cross-reactivity studies showed that the McAb was quiet specific for carbofuran, as among the four analogous compounds, they were all hardly recognized （4.59 × 10^-4% for 2,3-dihydro-2,2- dimethyl-7-benzofuranol and less than 3.0 × 10^4% for others）. The prepared McAb had a very high affinity and specificity, and it could be used to develop ELISA for rapid determination of carbofuran.     

猪囊尾蚴抗原的免疫化学研究

应用琼脂双扩散(DID),免疫电泳(IEP),聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)对猪囊尾蚴的匀浆抗原和囊液抗原进行分析。结果表明,两种抗原间存在相同的抗原成份,囊液的免疫化学性质优于匀浆抗原,并从免疫学和生物化学角度初步探索了囊液抗原和匀浆抗原中蛋白质之间的相互关系及主要蛋白质组分。     

大豆胰蛋白酶抑制因子检测方法的研究

1脲酶检测法生大豆中含有不等量的脲酶,脲酶本身无营养意义,但它与胰蛋白酶抑制因子含量相近,变性失活的程度也与胰蛋白酶抑制因子相似,故可用脲酶活性作为大豆加工适宜程度的检测指标。脲酶的测定方法比较简单,其原理是生豆粕中的脲酶使试剂中的尿素释放氨气,从而使溶液的pH值     

饲料中霉菌毒素的毒害机理、检测方法和控制措施

霉菌毒素是真菌代谢生成的次级代谢物,主要在丝状真菌的孢子和菌丝体内存在,可导致多种物质如饲料、食品、粮食等发生污染。饲料在加工或者贮存的过程中稍不注意就会污染霉菌,从而使其含有大量的霉菌毒素,导致饲料营养价值降低,动物长时间饲喂或者大量采食这种饲料就会发生急性或者慢性中毒,同时动物产品中残留的霉菌毒素还会危害人类的健康。现概述饲料中霉菌毒素的毒害机理、常用检测方法以及控制措施。     

一种改进的Western杂交方法

Western杂交是一种检测蛋白质的免疫化学方法，已在生物科学的许多领域得到广泛应用，但以前的文献介绍的Western杂交程序过于繁琐。本文根据Western杂交的基本原理结合已报道资料进行了一些改进，并应用到猪血清瘦素蛋白的检测。该程序简单易操作，结果清晰，证明改进后的方法完全可行。     

免疫血清学技术在农业科学上的应用

免疫血清学技术由于其高度特异性、敏感性、适用面广、方法简单,快速、制样简便等特点,已成为生命科学进入分子水平所不可缺少的工具。本文介绍了农业科学研究中,在物种鉴定、快速诊断和检疫、生物活性物质的测定、性状标记物和次生代谢物的测定、食品和环境中残毒的检测、生物物质的定位等方面血清学技术的应用现状和前景。     

胶体金的应用研究新进展

胶体金是氯金酸在还原剂作用下聚合成的金颗粒，其特点是：根据需要可制备大小不同的金颗粒(直径在1～150nm之间)。颜色呈桔红色到紫红色。具有高电子密度、介电特性和催化作用．能与多种生物大分子结合。且不影响其生物活性。1962年Feldherr第一次介绍了胶体金可作为一种电子显微镜水平的示踪标记物。Faulk(1971)把胶体金引入免疫化学．这一年被公认是免疫胶体金技术诞生的一年。     

免疫化学法探讨缺硼导致樱桃萝卜细胞壁松弛的机理

[目的]探讨缺硼导致樱桃萝卜细胞壁松弛的机理,为进一步丰富细胞壁的研究内容提供参考.[方法]以樱桃萝卜为试验材料,利用硼含量46.3 μmol/L的营养液培养方法,以不含硼的蒸馏水作对照,通过HPLC法测定樱桃萝卜肉质根中的细胞壁结合硼含量,TBA法测定KDO含量,并用免疫化学方法定位细胞壁中的RG-Ⅱ.[结果]缺硼处理导致樱桃萝卜肉质根中细胞壁结合硼的含量由14.21 mg/kg极显著下降到7.24 mg/kg(P＜0.01),下降49.0％.细胞壁果胶多糖中的KDO含量变化不显著(P＞0.05),缺硼处理与对照相比,免疫RG-Ⅱ的荧光强弱和胶体金颗粒的密度无明显差别.[结论]樱桃萝卜缺硼抑制了其B-RG-Ⅱ的形成,使细胞壁的稳定性降低而松弛.     

高亲和力的农药克百威单克隆抗体的制备及鉴定

【目的】制备高亲和力农药克百威单克隆抗体，建立克百威残留免疫检测方法，控制克百威残留，保障人民身体健康与保护环境。【方法】合成克百威半抗原BFNB，用人工抗原BFNB－BSA免疫Balb/c小鼠，取脾细胞与骨髓瘤细胞在PEG4000作用下融合，经间接ELISA筛选及显微克隆法亚克隆，分离出阳性细胞株，腹水诱导法及辛酸－硫酸铵沉淀法大量制备及纯化单克隆抗体，间接ELISA法测定抗体滴度及亲和力，间接竞争ELISA法测定抗体特异性。【结果】获得1株稳定分泌抗克百威单克隆抗体的杂交瘤细胞株5D3，其培养上清和腹水抗体滴度分别为1﹕2.048×103和1﹕1.024×106，其抗体亚类为IgG1，亲和力常数为2.54×109 L•mol-1，IC50为1.18 ng•ml-1，最低检测限为0.01 ng•ml-1。与克百威降解产物呋喃酚的交叉反应率为4.59×10-4％，另外几种结构类似的氨基甲酸酯类农药的交叉反应率均小于3.0×10-4％。【结论】此抗克百威的单克隆抗体亲合力高、特异性强，为建立克百威简便、快速、特异的免疫检测方法奠定了基础。