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采用二维电泳技术对硝酸银诱导的大豆子叶微粒体膜蛋白进行分离,利用四极杆-飞行时间串联质谱,对仅存在于诱导样品而不存在于对照样品中的蛋白质点进行氨基酸序列测定和分析,以期研究硝酸银处理对大豆子叶微粒体蛋白质的影响。结果显示:硝酸银可以诱导大豆Kunitz胰蛋白酶抑制剂(SKTI)的产生,在诱导处理的子叶中大量存在其成熟形式,也存在其5 kDa小亚基,小亚基含有“GIGTIISSPER”和“FIAEGNPLR”氨基酸序列。该研究结果为SKTI的深入研究提供了实践依据,并为其分离纯化提供了简便途径,从而有利于对其更多性质的进一步研究。 相似文献
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XIANG Xiao-liang NING Shu-ju JIANG Xia GONG Xiao-gui ZHU Ren-lei WEI Dao-zhi 《中国农业科学(英文版)》2010,9(10):1530-1537
Protein extraction is a critical step for two-dimensional electrophoresis (2-DE). Different plant samples require different and adaptive protein extraction protocols. The leaves of medicinal plant, Baphicacanthus cusia (Nees) Bremek are notoriously recalcitrant to common protein extraction methods due to high levels of interfering compounds (especially the secondary metabolites and pigments). This study was aimed to establish a routine procedure for the proteomic analysis ofB. cusia leaves, and a new protocol for the protein extraction was developed by optimizing trichloroacetic acid (TCA)/ acetone extraction method. The efficiency of this protocol was demonstrated by comparison with 3 published protein extraction methods (chloroform/acetone, Mg/NP-40, Tris-base/acetone). The results showed that the optimized TCA/ acetone precipitation extraction method gave a relatively high protein yield (9.263 mg g^-1 fresh weight), high-resolution separation, clear protein profiles, the highest proteins spots (1 31 t protein spots), and displayed less contamination in 2- DE gels. Therefore, the results suggested that the optimized TCA/acetone method was the most effective among the 4 methods for B. cusia leaves. 相似文献
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对自然感染绵羊的脑多头蚴原头节可溶性抗原、囊壁可溶性抗原和囊液抗原经二维电泳分析,电头节可溶性抗原共显示79个多肽斑点,其中酸性多肽斑点26个,中性多肽斑点5个,碱性多肽斑点48个,囊壁可溶性抗原共显示59个多肽斑点,其中酸性多斑点20个,中性多肽斑点4个,碱性多肽斑35上。 相似文献
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Comparative Study on the Infectivity and Spore Surface Protein of Nosema bombycis and Its Morphological Variant Strain 总被引:1,自引:0,他引:1
《中国农业科学(英文版)》2005,4(6):475-480
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鉴定强启动子可为谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)代谢工程育种及重组蛋白生产提供高效的基因表达调控元件,但谷氨酸棒杆菌内源性强启动子的鉴定鲜有报道。本试验进行谷氨酸棒杆菌ATCC13032菌株细胞全蛋白二维电泳并对高表达蛋白质斑点进行质谱分析,选取分子量大小约为30 kDa、等电点约为4.6的斑点作为研究对象,分析其所对应蛋白编码基因的启动子。启动子预测结果表明,谷氨酸棒杆菌Cgl0864基因启动子P0864转录活性强。将强启动子Ptac-M和启动子P0864分别插入启动子探测载体pDXW-11,转化ATCC13032菌株感受态细胞,获得工程菌株C. glutamicum/pDXW-11-Ptac-M和C. glutamicum/pDXW-11-P0864。氯霉素耐受性试验结果显示,菌株C.glutamicum/pDXW-11-Ptac-M和C.glutamicum/pDXW-11-P0864的氯霉素耐受性分别为30和40μg/mL;报告蛋白CAT氯霉素酰基转移酶活性检测结果显示,C.glutamicum/pDXW-11-Ptac-M和C.glutamicum/pDXW-11-P0864菌株细胞抽提物上清液CAT蛋白氯霉素酰基转移酶比活力分别为4.50和6.12 U/mg;氯霉素乙酰基转移酶基因cat转录水平的荧光定量PCR试验检测结果显示,cat基因在启动子P0864的控制下,其转录水平是在Ptac-M控制下转录水平的1.84倍。以上结果表明,谷氨酸棒杆菌Cgl0864基因启动子P0864是强启动子。 相似文献
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建立稳定的山羊精子蛋白质双向电泳的技术平台,对精子上样量、蛋白质提取方法、二维电泳程序等相关技术都进行了优化,得到了相对清晰的冻精和鲜精的二维电泳图谱,并运用ImageMaster TM 2D Platinum软件进行了分析。结果表明:通过改进的热Trizol法提取山羊精子蛋白,当取精子3×10^7、上样量为150μL时能取得较好的电泳图谱,鲜精的蛋白位点重复性较高的有650个±10个,冻精的蛋白位点重复性较高的有600个±10个。冷冻导致精子蛋白丢失约50个,而且冻精多表现为大分子量蛋白的丢失,大部分分布于60~100kb之间,其中60~80kb之间蛋白丢失约18个,80~100kb之间蛋白丢失近20个,12~60kb之间蛋白丢失近12个。实验初步探明了山羊精子融冻前后精子的蛋白变化规律,为进一步了解精子冷冻损伤的确切机理奠定了基础。 相似文献
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本研究以二维电泳技术构建了临床型乳房炎奶牛和健康奶牛的乳腺组织全蛋白表达谱,运用PDQuest7.4软件进行差异分析。结果显示:健康奶牛的乳腺组织蛋白表达图谱可检测到(480±27)个蛋白点,临床型乳房炎奶牛可检测到(453±31)个蛋白点,二者存在17个差异表达的蛋白斑点,6个蛋白斑点在临床型乳房炎奶牛组织中呈量度,4个呈质变。表明临床型乳房炎奶牛和健康奶牛的乳腺组织蛋白存在差异表达的蛋白斑点,本研究为发现新的乳房炎调控分子和潜在的医疗目标蛋白奠定了基础。 相似文献