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1.
杨树受损伤后能诱导一些基因的表达,其编码的蛋白质可能在杨树的防卫反应中起一定作用.用PCR方法从新疆杨叶片中克隆出一个损伤诱导型Kunitz胰蛋白酶抑制剂基因PaTI1.序列分析表明:此基因不含内含子,其翻译起点上游具有'TATA'和 'CCAAT'等转录控制元件,包含的阅读框架能编码一个长为213个氨基酸的多肽.此多肽与克隆自美洲山杨的PtTI2 和PtTI1氨基酸序列同源性最高,分别为95%和80%,其N端存在一长度为27个氨基酸的信号肽.将此基因以融合蛋白的形式在大肠杆菌中进行表达,纯化后的融合蛋白对胰蛋白酶的活性有抑制作用,每8.5 μg融合蛋白可完全抑制1 μg牛胰蛋白酶的活性.Western blot分析表明融合蛋白与PtTI2特异的抗体之间有明显的血清学反应. 相似文献
2.
3.
4.
5.
测定了长薄鳅(Leptobotia elongate Bleeker)幼鱼(8.0~110.1 g)的消化道指数和不同体重组(10 g、30 g、50 g)幼鱼的胃、肝胰脏、前肠、中肠、后肠的淀粉酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶及脂肪酶活性。结果:(1)长薄鳅幼鱼肝指数平均为(1.400±0.004)%,比肠长平均为(0.418±0.080),体重与体长呈幂函数相关,相关式为:W=0.019L2.818 1(R2=0.948,P<0.01,n=43);鱼体肥满度在30 g组中最高。(2)各部位消化酶活性均以蛋白酶>脂肪酶>淀粉酶;各体重组淀粉酶活性在肝胰脏中最高(P<0.05);蛋白酶活性在胃和中肠中较高;脂肪酶活性沿消化道从前至后升高;(3)各部位淀粉酶活性在各体重组间变化不大,胃蛋白酶、肠段胰蛋白酶和脂肪酶活性随体重增加而下降。本研究认为长薄鳅幼鱼为杂食、偏肉食性,其消化酶活性存在组织特异性,体重30 g左右是其营养需求转变或者生长发育的重要时期。 相似文献
6.
达氏鲟精巢细胞消化分离和超低温冷冻保存 总被引:1,自引:0,他引:1
通过研究两种酶对精巢细胞的消化效果,探究抗冻剂、降温程序、糖类和卵磷脂对达氏鲟(Acipenser dabryanus)精巢细胞冻存效果的影响,获得消化冻存后高存活率的细胞。实验使用0.25%胰蛋白酶和2 mg/m L胶原酶H+500 U/m L中性酶II的组合酶对达氏鲟精巢细胞进行消化,获得不同消化时间内的活细胞数量。另外,还研究了冷冻稀释液中分别添加10%二甲基亚砜(DMSO)、乙二醇(EG)、甲醇(MET)作为抗冻剂,采用-1℃/min慢速降温以及直接投入液氮中的快速降温方法冻存,冷冻稀释液采用D-海藻糖或同浓度D-蔗糖,以及添加5%、8%、11%卵磷脂对冻存效果的影响。结果显示:两种消化酶在同一时间消化所得的活细胞数和活细胞率无显著差异,并且都在3 h获得最多活细胞。慢速降温的冻存效果极显著地好于快速降温(P=0.01)。不同抗冻剂的保存效果差异显著,复苏后细胞相对存活率EG(51.70%±5.24%)MET(45.09%±3.15%)DMSO(40.18%±3.90%)。不同糖对达氏鲟精巢细胞冻存效果无显著影响;不同浓度的卵磷脂冻存效果有极显著差异。含8%卵磷脂的冻存液对细胞的冻存效果最好,细胞存活率可达(93.55±2.56)%,培养10 d后细胞数目为0 d时的3.19倍。 相似文献
7.
8.
Purification and characterization of two anionic trypsins from the hepatopancreas of carp 总被引:8,自引:0,他引:8
Min-Jie Cao Kiyoshi Osatomi Miho Suzuki Kenji Hara Katsuyasu Tachibana and Tadashi Ishihara 《Fisheries Science》2000,66(6):1172-1179
SUMMARY: Two trypsins, designated as trypsin A and trypsin B, have been purified from the hepatopancreas of carp. The purification procedures consisted of ammonium sulfate fractionation, and chromatographies on DEAE-Sephacel, Ultrogel AcA54 and Q-Sepharose. Trypsin A was purified to homogeneity with the molecular mass of approximately 28 kDa, while trypsin B gave two close bands of 28.5 kDa and 28 kDa on sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis both under reducing and non-reducing conditions. On native-PAGE, both trypsin A and trypsin B showed a single band. Trypsin A and trypsin B revealed optimum temperature of 40°C and 45°C, respectively, and shared the same optimum pH 9.0 using Boc-Phe-Ser-Arg-MCA as substrate. Both enzymes were effectively inhibited by trypsin inhibitors and their susceptibilities were similar. The NH2 -terminal amino acid sequences of trypsin A and trypsin B were determined to 37th and 40th amino acid residue, respectively. Their sequences were very homologous, but not identical to that of a trypsin-type serine proteinase from carp muscle and these of other trypsins. Immunoblotting test using the antibody raised against trypsin A cross-reacted with trypsin B positively. 相似文献
9.
豇豆胰蛋白酶抑制剂转基因棉花的获得 总被引:22,自引:10,他引:22
利用根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导法将豇豆胰蛋白酶抑制剂(Cow-peaTrypsinInhibitor,CpTI)基因转移进入棉花(GosypiumhirsutumL.)。棉花幼苗的下胚轴与携带有CpTI基因和Npt-Ⅱ基因的根癌农杆菌共培养,在选择培养基上诱导出了卡那霉素抗性(Kmr)愈伤组织。选择Npt-Ⅱ阳性的胚性愈伤组织在胚状体诱导培养基上进行胚状体诱导,继而在分化培养基上进行植株分化,最终获得了再生棉花植株。经Npt-Ⅱ分析、PCR及Southern检测证明,外源CpTI基因和标记基因(Npt-Ⅱ基因)存在于转化棉株及其后代中。抗棉铃虫(Heliothisarmigera)生物活性检测表明转基因植株后代具有明显的抗棉铃虫能力。 相似文献
10.