蜜蜂和植物花螺原体对蜜蜂的致病性及其血清学关系

从各地的蜜蜂和植物花上得到70多个螺原体(spiroplasma)分离物.用微量注射法接种健康蜜蜂,证明在蜜蜂和植物花上分离到的螺原体均对蜜蜂致病,并引起死亡.每头蜜蜂接种量:蜜蜂代表分离物Hs-1为1.4×10~7,荆条花的分离物 Fs-14为3.4×10~8,接种后3～6d,供试蜜蜂100%死亡,而对照蜜蜂全部存活.血清学的变形试验和 ELISA 方法测定各螺原体分离物血清学关系的结果,证明蜜蜂螺原体的抗血清,对蜜蜂上和植物花上分离到的螺原体大多数分离物都呈阳性反应,但反应强弱有明显差异,说明其间血清学关系比较复杂.根据以前的研究和本实验的结果,目前我国在蜜蜂上和植物花上分离到的螺原体,主要应属于螺原体第Ⅰ血清组第Ⅰ—2亚组的成员.     

Spiroplasma found in the eyes of scrapie affected sheep

Objective Scrapie, a transmissible spongiform encephalopathy (TSE) occurring naturally in sheep, characteristically shows a severe retinopathy that is well developed in the terminal phases of the disease. In this study, we set out to demonstrate similar retinal changes in our ruminant spiroplasmosis TSE model. Procedure The eyes from deer, sheep, and goats that were inoculated intracranially with the laboratory strain of spiroplasma (suckling mouse cataract [SMCA] strain of Spiroplasma mirum) or with Spiroplasma sp. isolated from the brains affected with scrapie or with chronic wasting disease were examined by light microscopy for pathologic changes and by immunocytochemistry for distribution of spiroplasma antigen. The eyes were also obtained from a research flock of sheep with terminal scrapie, from which the intraocular tissues were submitted aseptically for culture assay in M1D broth or as explants on bovine corneal endothelia (BCE). Results The eyes from the spiroplasmosis ruminant models showed retinopathy remarkably similar to eye lesions seen in sheep with scrapie. The spiroplasma antigen accrued in the ruminant model eye tissues, particularly in the retina, the vitreous humor, and the corneal endothelia. A Spiroplasma sp. grew out of the scrapie‐affected eyes both in the M1D broth and in the BCE cultures but did not expand. These new spiroplasma isolates differed immunologically from SMCA. Conclusion These data showed a clear association of spiroplasma with scrapie suggesting that these bacteria have a role in the pathogenesis of TSE and that the eye should be a research focus for future studies of TSE.     

套式PCR在中华绒螯蟹颤抖病病原螺原体检测中的应用

提取人工分离、培养的中华绒螯蟹颤抖病病原螺原体的基因组DNA,并进行梯度稀释作为PCR模板,根据GenBank已有螺原体16S rRNA基因序列设计出套式PCR外部引物,将螺原体特异性引物作为内部引物,利用套式PCR对梯度稀释的模板进行扩增,得到271 bp产物,对照已有的一步PCR检测法,检测灵敏度提高100倍,最小检测达15.5 fg数量级螺原体DNA,从而建立更为灵敏的中华绒螯蟹颤抖病病原螺原体的检测方法。     

蜜蜂螺原体对药物敏感性的测定

经从病蜂身上分离,使用R—2培养基纯化培养,获得蜜蜂螺原体(以下简称螺原体)。将粗选的几种要测定的药物用液体R—2培养基配成梯度浓度,接种入纯培养的螺原体,测定螺原体对药物的敏感性,测定结果,螺原体对黄莲素和肿节风不敏感;而对四环素和太洛里十分敏感。     

中华绒螯蟹颤抖病药物治疗的初步研究

用水产常用清塘剂、杀菌驱虫药、消毒剂、中草药及自配药物克螺威1号(SI-1)对中华绒螯蟹颤抖病病原螺原体进行体外药敏试验。结果表明,螺原体对生石灰、茶籽饼、敌杀死、硫酸铜、硫酸锌、次氯酸钙、三氯异氰脲酸、二氧化氯、溴氯海因、二溴海因、高锰酸钾、五倍子、黄连、黄柏及自配药物克螺威1号具有不同程度的敏感性。通过最小杀菌浓度(MBC)比较,螺原体对清塘剂茶籽饼、杀菌驱虫药硫酸铜、消毒剂次氯酸钙、中草药黄连、自配药物克螺威1号更为敏感,其中克螺威1号为最敏感药物,最小抑菌质量浓度(M IC)为0.16 mg/L,MBC为2.5 mg/L。对克螺威1号进行急性毒性试验和颤抖病治疗试验表明,克螺威1号的96 h LD50为1106.62 mg/kg,安全使用量为110.66 mg/kg。用其治疗人工诱发颤抖病的中华绒螯蟹,克螺威1号具有显著效果(P<0.05),随后在10个被确诊为螺原体引发中华绒螯蟹颤抖病的养殖场进行药物治疗试验,在6个养殖场治疗有效,而在其他4个养殖场治疗无效,治疗试验效果不一,用克螺威1号治疗中华绒螯蟹颤抖病具有较好的前景,但仍需进一步做大面积长期临床试验。     

桑皱褶花叶病及皱褶螺原体的研究

桑皱褶花叶病是一种由螺原体寄生引起的桑树病害，通过嫁接，昆虫及汁液传病，近年在浙江省局部地区蔓延危害。病原螺原体在革兰氏染色反应中呈阳性反应，能在植物性液体培养基和固体培养基中培养成功。螺原体形态有圆形、椭圆形、螺旋形和线状等。圆形粒体直径为８３～７００ｎｍ，基本螺旋体大小为３６４～８３３ｎｍ×８２～１１９ｎｍ，线状体长为３．０～４．５μｍ，宽为１００ｎｍ。本病原寄主范围较广。土霉素（２５０～５００ｍｇ／ｋｇ）对本病具有明显的抑制作用。本病原螺原体的生活力及致病性均强，经液体培养１ａ后，能对无病实生苗传毒成功。     

蜜蜂螺原体单克隆抗体的制备及其基本性状研究

用蜜蜂螺原体(CH-1)免疫的 BALB/C 小鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,获得3株稳定分泌 CH-1单克隆抗体(简称单抗,下同)的杂交瘤细胞株。腹水单抗效价介于12800~(-1)～6553600~(-1)之间。其免疫球蛋白种类为 IgG1和IgG3。腹水单抗与同源抗原的反应能被兔多克隆抗血清阻断。杂交瘤细胞染色体为96条。反复冻融、低温保存以及 pH 试验对单抗有一定影响。单抗与中国的蜜蜂螺原体分离物有反应,而与美国蜜蜂分离物无反应。     

用RAPD技术对4种螺原体菌DNA多态性的初步研究

用随机扩增的多态性ＤＮＡ技术对螺原体３个血清组中的４个菌株进行ＤＮＡ多态性研究。ＰＣＲ扩增引物选自Ｏｐｅｒｏｎ随机引物试剂盒中Ｉ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、组的１２０个引物。４个菌株为２３－６，ＣＲ－１和ＣＨ－９１－１，ＣＣＨ。     

蜜蜂螺原体南京分离株M10形态的多样性

为进一步了解蜜蜂螺原体的生长、生殖及致病特点,以分离自患"爬蜂病"蜜蜂体内的螺原体菌株M10为研究对象,测定了其生长曲线,利用透射电镜观察其不同生长期的形态.结果表明:在R-2培养基中,不同生长期的蜜蜂螺原体M10形态差异很大,但其形态变化又具有一定的规律性.延滞期的M10以粗短的形态为主;在对数期和稳定期,M10具有丰富的形态多样性,如芽状、分支状、串珠状等;到达衰亡期,M10则变得细长,菌体自身及菌体之间极易缠绕并聚集成团.此外,观察到M10具有尖端结构和纤毛状结构,大多数菌体具有"一尖一圆"结构,纤毛状结构长度差异显著.本研究首次描述了不同生长期蜜蜂螺原体的形态变化,发现螺原体纤毛状结构最长可达1 860.5 nm,并首次在人工培养基中发现螺原体具有类似纤毛接合现象.