奶牛MTT比色法的最佳条件探讨

为建立奶牛淋巴细胞增殖反应MTT比色法,对试验条件进行了研究。应用L16(45)正交试验,对影响MTT比色法的四个主要因素,包括ConA浓度、细胞浓度、培养液小牛血清浓度及培养时间进行了比较和探索。试验表明几个因素对其增殖反应都有显著影响(P<0.05),且最佳反应条件为:15μg/mL的ConA、1×106/mL细胞浓度、10%小牛血清及60h的培养时间;影响增殖反应的先后顺序为细胞浓度、ConA浓度、培养时间及血清浓度。     

利用菜青虫细胞检测几种有机溶剂和有机磷农药的毒力

用MTT法研究了5种有机溶剂对菜青虫细胞生长的影响及3种有机磷农药对细胞的毒力。并用微量点滴法测定了3种农药对菜青虫3龄幼虫的毒力。结果表明,5种有机溶剂除二甲苯外,其余4种二甲亚砜、乙醇、丙酮、乙酸乙酯对菜青虫细胞低浓度处理时均无很大毒性。1％浓度处理16小时后细胞存活率仍分别可达99.8％、98％、97.2％、91％。分别用菜青虫细胞测得3种有机磷农药的LC_(50)为:甲基对硫磷,106μs/ml;克线磷,147μg/ml;水胺硫磷,183μg/ml。用微量点滴法测得3种有机磷农药对菜青虫3龄幼虫的LD_(50)分别为:甲基对硫磷,0.458μg/头,克线磷,45.012μg/头;水胺硫磷,0.505μg/头。     

4种真菌粗多糖体外抗肿瘤作用研究

[目的]筛选具有抗肿瘤活性的真菌发酵液多糖。[方法]水提醇沉法提取真菌粗多糖,蒽酮-硫酸法测定糖浓度,MTT法测定多糖对体外肿瘤细胞增殖的抑制作用。[结果]在测试浓度范围内,树舌发酵液多糖对人大肠癌细胞SWWC116、人宫颈癌细胞Hela、人肺腺癌细胞NCI-446的最高抑制率分别为80.3%、74.1%、78.5%;榆耳发酵液多糖对NCI-446、SWWC-116、Hela细胞,小刺猴头发酵液多糖对NCI-446细胞的最高抑制率达50%;其余多糖抗肿瘤活性不明显。[结论]树舌发酵液多糖具有抗肿瘤活性。     

用于水生病原菌的3种高通量活菌计数方法的比较

以一株副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)作为研究对象,比较了MTT [3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐]比色法、ATP生物发光法和高通量生长曲线法在活细菌高通量计数上的应用效果。用96孔培养板进行不同浓度细菌活菌计数,确定了上述3种方法在副溶血弧菌活菌计数的标准曲线和线性范围。结果显示,副溶血弧菌的MTT比色法以DMSO溶解的MTT产物甲瓒在555 nm的吸光度(OD555 nm)为计数依据,活菌数的对数(LgC)与LgOD555 nm线性关系的标准曲线为LgC=(1.0439±0.0200)LgOD555 nm+(8.0565±0.0125),相关系数R²=0.9965,线性检测范围为7.8×106~2.5×108 CFU/ml;ATP生物发光法以ATP产生的相对发光度值(RLU)为计数依据,LgC与LgRUL线性关系的标准曲线为LgC=(0.9590±0.0065)LgRLU+(0.9949±0.0366),相关系数R²=0.9994,线性检测范围为1.0×104~3.0×108 CFU/ml;高通量生长曲线法以生长曲线达到拐点的时间(Ts)为计数依据,LgC与Ts线性关系的标准曲线为LgC=?(0.8727±0.0230)Ts+(9.0128±0.1572),相关系数R²=0.9924,线性检测范围为1.0×100~1.0×107 CFU/ml。用3种方法对实际菌液测量并与平板计数法比较表明,ATP生物发光法与高通量生长曲线法有很好的准确性,MTT比色法准确度稍差,而高通量生长曲线法有最宽的线性范围,也最适合高通量测定。     

ChIL-2对H5亚型AIV疫苗免疫增强作用研究

鸡白细胞介素2真核表达质粒pCI-IL-2及原核表达重组鸡白细胞介素2(rChIL-2)分别与H5亚型禽流感油乳剂灭活苗联合使用,25日龄首免,40日龄时加强免疫.MTT法检测各组鸡外周血淋巴T细胞增殖,HI试验监测H5亚型禽流感抗体水平的消长规律,结果表明:pCI-IL-2及rChIL-2均能显著增强AIV疫苗的免疫效果(P＜0.05),pCI-IL-2和rChIL-2两组间差异不显著(P＞0.05);证实鸡白细胞介素2对H 5亚型禽流感疫苗有免疫增强作用.rChIL-2协同免疫组MTT及HI试验均在第四周 达到峰值,pCI-IL-2协同免役组峰值出现时间稍晚,但随后质粒免疫组可维持在更高的水平值.提示IL-2蛋白的作用更迅速,IL-2质粒作用更持久.     

用淋巴细胞转化试验检测MDVgB重组病毒诱导的细胞免疫

用MDVgB重组痘苗病毒RVV - gB、HVT冻干苗、痘苗病毒WR株经腹腔分别免疫 3组 1日龄SPF鸡 ,1 5日龄攻GA株强毒 ,且每组在攻毒前 1天 ,攻毒后 2 ,4,5天各采脾脏 1只 ,并以PHA为有丝分裂原检测其淋巴细胞转化率。结果表明 ,攻毒前RVV - gB组差异不显著 ,但从攻毒后第 2天起 ,RVV -gB组淋巴细胞转化率明显高于HVT冻干苗组 ,且MTT比色法比形态学检测法灵敏     

小鼠精原干细胞分离培养条件的优化

采用两步酶消化法获得5～7日龄昆明小鼠睾丸组织的单细胞悬液,比较差速贴壁法和Percoll不连续密度梯度法对精原干细胞(Spermatogonial stem cells,SSCs)的纯化效果,并利用MTT法检测不同生长因子及添加浓度对SSCs体外增殖的影响.结果表明5日龄小鼠和7日龄小鼠的睾丸细胞总数存在较大差异(P<0.05),但SSCs数目无显著差异(P>0.05);与Percoll不连续密度梯度法相比,差速贴壁法获得了较高的SSCs数量和纯化率,其纯化率平均85.06%;MTT法检测结果表明LIF因子的添加对SSCs的增殖具有促进作用,20 ng/mL GDNF+20 ng/mLbFGF+103 U/mL LIF的组合添加是昆明小鼠SSCs的体外培养增殖的最佳组合.     

Study on the Inhibition of Fermented Soybean to Cancer Cells

In the experiment, the inhibition of isoflavones extracted from soybean and tempe to SP2/0 and Hela cells was studied, and the inhibition rate of each unit for cancer cells was also studied. The results showed that the inhibition rate of tempe isoflavones to SP2/0 was 96.9% and to Hela cells was 69.5% when the concentration was 20μg·mL^-1. In the same condition, the inhibition rate of soybean isoflavones was 83.16% and 60.5%. With the decline of concentration, the inhibition rate decreased. The inhibition of isoflavones to SP2/0 did not exist when the concentration was 5-1.25μg·mL^-1.     

中华鳖脾淋巴细胞体外转化的实验条件研究

为确定MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测中华鳖脾淋巴细胞体外转化的条件,对脾淋巴细胞浓度和培养时间、丝裂原种类和浓度等影响因素进行优化.结果显示:2×106 cells.mL-1的脾淋巴细胞用10μg·mL-1Con A(伴刀豆蛋白A)诱导培养120 h或用5μg.mL-1 PHA(植物血凝素)诱导培养144 h,能获得良好的检测效果.研究表明,采用MTT法测定中华鳖脾淋巴细胞体外转化方便可行,可为中华鳖脾淋巴细胞体外转化方面的研究提供参考.     

鸡白细胞介素-6活性MTT检测方法的建立

采用白细胞介素-6依赖细胞株B9建立了鸡白细胞介素-6活性的MTT检测方法。每孔培养细胞数在2.5×103~4×104范围内D值与细胞数显示有良好的线性关系,MTT的最佳保留时间为4 h,最低检测限为0.1 U/mL。应用该方法检测了健康艾维茵肉鸡25例,血清chIL-6活性为(4.33±0.75)U/mL,而25例葡萄球菌病患鸡血清chIL-6的活性为(14.05±6.87)U/mL,与健康肉鸡比较差异极显著(P<0.01),为该方法进一步临床应用奠定了基础。