黄鳍鲷肝细胞体外培养研究

以黄鳍鲷肝脏细胞为材料 ,研究其肝细胞体外培养适宜的 p H、血清浓度、谷氨酰胺等条件 ,并进行传代培养试验。结果表明 ,培养液为 :MEM含 2 0 %小牛血清、15 g/ L L-谷氨酰胺及 p H 6 .9～ 7.1时 ,在 2 3℃中静置培养 ,黄鳍鲷肝细胞生长良好 ,3～ 5 d长满单层 ,细胞主要为成纤维细胞状 ,并能顺利传代。细胞动力学试验表明 :传代细胞 1～ 2代为适应期 ,3～ 5代为旺盛期 ,6代之后表现出衰老现象     

花鲈虹彩病毒交叉引物恒温扩增检测方法的建立

【目的】花鲈虹彩病毒(Lateolabrax maculatus iridovirus,LMIV)严重威胁花鲈养殖业安全,无特效防控药物,早期诊断在LMIV防控中发挥极其重要的作用。建立一种简便、快捷、准确的现场快速诊断方法,可为LMIV的基层诊断提供技术支撑。【方法】利用交叉引物恒温扩增技术(Cross priming amplification,CPA),针对LMIV ATPase基因高保守区设计1套单交叉引物。以构建的ATPase重组质粒作为阳性模板,对反应体系中的引物浓度比,Bst DNA聚合酶、Betaine、MgSO₄、dNTP浓度,以及反应温度和反应时间进行优化;结合一次性核酸试纸条,建立可视化检测LMIV-CPA的方法。【结果】最优引物浓度比组合为交叉引物CPF1.0μmol/L,引物F3和B3均为0.4μmol/L,探针引物B1(FAM)和B2(Biotin)均为0.8μmol/L;MgSO4浓度为6 mmol/L、Betaine浓度为0.4 mol/L、dNTP浓度为0.6 mmol/L、Bst DNA聚合酶浓度为0.256 U/μL;最佳反应...     

盐度对黄鳍鲷幼鱼消化酶活性的影响及消化酶活性的昼夜变化

研究了盐度对黄鳍鲷幼鱼主要消化酶(蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶)的影响及消化酶活性的昼夜变化。实验设计5、10、15、20、25、30等6个盐度梯度组。结果表明,蛋白酶、脂肪酶的比活在盐度为25时最高,而淀粉酶的比活在盐度为20时最高。各种消化酶在盐度20~30时消化酶比活的平均值要明显高于5~15时消化酶的平均值。对黄鳍鲷消化酶比活昼夜变化的测定表明,蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶比活的最高值分别在14∶00、20∶00和18∶00,最低值分别是12∶00、10∶00和6∶00。     

Survival and serum biochemical responses of spotted sea bass Lateolabrax maculatus during simulated waterless live transportation

Waterless live fish transportation is an alternative and promising transport strategy, which may reduce shipping costs, increase stocking density and improve survival of some species. Spotted sea bass is one of the most economically important marine fish in China. However, waterless transportation has not yet been studied on spotted sea bass. To explore the possibility of waterless transportation of spotted sea bass and its sublethal stress responses, the survival rate and dynamics of blood biochemical parameters were evaluated in the present study by preserving it under no water, less water and water (control) conditions for 9 hr. The serum biochemical parameters including total protein, cortisol, glucose, lactate, alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), total carbon dioxide (TCO₂), creatinine, blood urea nitrogen (BUN), ammonia, superoxide dismutase (SOD) activity and malonaldehyde (MDA) were investigated. Results showed that the survival rates of fish in all groups gradually declined with time increasing. At the end of transportation, the survival rates in the control group, less‐water group and no‐water group decreased to 49.11%, 15.60% and 23.96% respectively. Significant changes were observed in several selected serum biochemical parameters, including glucose, lactate, ALT, TCO₂, BUN and ammonia during simulated waterless transportation, which might negatively affect the physiological homeostasis of fish, leading to the high mortality in present study. In general, waterless transportation of spotted sea bass was possible, but it might be rather suitable for short time than long time.     

地衣芽孢杆菌De株对黄鳍鲷生长及其养殖池塘主要环境因子的影响

运用综合对比分析法,对黄鳍鲷（Sparuslatus）养殖中定期泼洒地衣芽孢杆菌（Bacillus lichenformis）De的应用效果进行了探讨。结果表明,施用地衣芽孢杆菌De可在一定程度上优化水体环境和养殖生产性能,使养殖黄鳍鲷的成活率、体长增长率和体质量增长率分别提高18．2％、21．0％和312％;显著降低水中氨氮（NH3-N）、亚硝酸盐（NO2^-N）、活性磷酸盐（PO;一一P）质量浓度及底泥中有机碳的质量分数（P〈0．05）,其中养殖前、后期的底泥有机碳质量分数分别较对照组降低49．77％和22．63％,NO2^-N、PO4^3-P质量浓度则总体较对照组降低25．82％和41．00％,NH3-N质量浓度在养殖前、中和后期较对照组降低36．33％、18．10％和14．28％;水体中弧菌数量在养殖后期较对照组降低61．76％,底泥中的总异养细菌数量在养殖中、后期较对照组提高38．61％,整个养殖期间水体及底泥中的芽孢杆菌数量分别较对照组提高15．34％和26．37％。     

应用间接荧光抗体技术快速检测花鲈病原菌——鳗弧菌

以花鲈（Lateolabrax japonicus)弧菌病的病原菌-鳗弧菌（Vibrio anguillarum)W-1为抗原，制备兔抗血清；利用异硫氰酸荧光素标记的羊抗兔免疫球蛋白（FITC-IgG）为荧光标记二抗，并以罗丹明标记的牛血清白蛋白为背景染色，建立检测鳗弧菌的间接荧光抗体快速检测技术。应用该技术对人工感染后的花鲈组织（肌肉、鳃、肠、肾）样品和养殖水体样品进行了鳗弧菌检测，结果显示间接荧光抗体技术不仅可以用于诊断发病的感染花鲈，也可用于检测带菌状态或未发病的感染花鲈。     

环境胁迫对许氏平鲉和花鲈血糖、血沉降的影响

研究了运输、温度和空气暴露胁迫对许氏平鲉(Sebastes schlegeli)和花鲈(Lateolabrax maculatus)血液生化指标的影响。60min长途运输使许氏平鲉和花鲈的血糖含量都有所上升，其中许氏平鲉的血糖含量在运输后24h基本恢复到正常水平，而花鲈的血糖水平在168h后可恢复到稳定状态。季节温度变化是引起春冬两季许氏平鲉血糖水平在经运输胁迫后产生差异的主要原因，春季(4月)经运输胁迫后鱼体血糖含量约为冬季(11月)的1．4倍。在温度梯度实验中，设定不同温度组(10℃、15℃、20℃、23．5℃、26℃)检测许氏平鲉血糖和血沉降的变化，血糖值出现峰值，而血沉降则随温度升高一直表现出上升趋势。在温度梯度实验基础上进行的空气暴露实验中，各胁迫组的血糖含量升高，血沉降轻微降低但整体变化趋势与温度梯度实验结果相似。     

鲈鱼(Lateolabrax japonicus)生长后期对苏氨酸需要量

在半精制饲料中分别添加0、0.35%、0.70%、1.05%、1.40%、1.75%苏氨酸,制成苏氨酸实际梯度为1.05%、1.35%、1.65%、2.00%、2.42%、2.65%的6组等能等氮饲料(44.67%粗蛋白质,21.65 k J/g总能),对初始体重为(333.93±6.60)g的鲈鱼(Lateolabrax japonicus)在海水浮式网箱(1.5 m×1.5 m×2.0 m)中进行了70 d的喂养实验,研究其对苏氨酸的最适需求量。结果显示,鲈鱼成活率在89.58%–95.83%之间,各处理组之间无显著差异(P0.05);随着饲料中苏氨酸水平的升高,鲈鱼的特定生长率(SGR)显著增加(P0.05),且在2.00%苏氨酸饲料组出现最大值,但随着苏氨酸水平的继续升高,SGR呈减小的趋势;饲料效率(FE)随饲料中苏氨酸水平的升高呈先增加后减小的趋势,2.00%苏氨酸组的FE显著高于1.05%组及2.65%组(P0.05);随着饲料中苏氨酸水平的升高,蛋白质沉积率(PPV)呈先增加后减小的趋势,且于2.00%苏氨酸组出现最大值;肝脏谷草转氨酶、谷丙转氨酶活性随饲料中苏氨酸水平的升高呈先增加后减小的趋势;饲料中不同水平苏氨酸对鱼体粗蛋白、粗脂肪、粗灰分无显著影响(P0.05)。以特定生长率、饲料效率及蛋白质沉积率为评价指标,经二次回归分析得出,鲈鱼对饲料中苏氨酸的最适需求量分别为占饲料干重的1.84%、1.87%及1.83%,占饲料蛋白质的4.11%、4.18%及4.09%。     

异源精子诱导犬齿牙鲆的雌核发育

用冷冻保存的花鲈精子作为异源精子,采用紫外线(UV)对精子进行照射使其遗传物质失活,然后与卵子进行"授精",可以刺激犬齿牙鲆鱼卵进行雌核发育,在受精后一定时间采用冷休克处理"授精"卵,抑制第二极体排出成功获得了犬齿牙鲆雌核发育二倍体鱼苗.实验表明:犬齿牙鲆同源精子经80 mJ/cm2的紫外线照射可以完全失活,冻存花鲈精子经紫外线照射后也同样具有诱导犬齿牙鲆雌核发育的能力.无论同源精子还是异源精子,最佳诱导条件为在18℃条件下,精子经80 mJ/cm2的紫外线照射,受精后4～5 min将受精卵放在3℃海水中进行冷休克处理,持续时间为45 min,同源精子和异源精子二倍体诱导分别为32.66%±7.03%和28.00%±6.48%.采用形态学、流式细胞仪DNA含量分析和微卫星标记技术对雌核发育鱼苗进行了分析,证明了雌核发育鱼苗为雌核发育二倍体.     

侧杂食跗线螨在海南危害西瓜

描述了采自海南省三亚市西瓜上的侧杂食跗线螨Polyphagotarsonemus latus(Banks)及其为害症状和发生情况,并提出了防治措施。