黑斑原鮡AFLP分析体系的建立

建立黑斑原鮡(Glyptosternum maculatum)AFLP反应体系,对DNA提取、双酶切、连接、预扩增、选择性扩增和银染效果进行了探索。结果表明,40μLTaqI酶切体系中65℃先酶切2h,EcoRI酶切和连接同时进行,EcoRI酶和T4DNA连接酶的用量均以2U为宜,温度与时间分别为37℃和3h,连接产物稀释10倍作为预扩增的模板。利用这种优化的反应体系,5对选择性扩增引物组合表现出较高的稳定性、清晰度和多态性,它们分别是:E-AAC/T-AAT、E-AAC/T-AAG、E-AAG/T-ACA、E-AAG/T-AAT和E-AAT/T-AGA。5对引物组合对96个样本扩增,共得到332条清晰可辨、可重复的条带,平均每对引物组合扩增出66.4条带,其中51条带是多态的。将AFLP技术用于黑斑原鮡的研究,通过优化体系的建立,为其种质资源的研究奠定基础。     

黑斑原(鮡)肌肉脂肪酸及无机盐组成特征分析

为探究黑斑原肌肉营养成分,合理开发和保护利用黑斑原种质资源,分析采自西藏自治区日喀则市昂仁县境内(N 29°27′58.72″,E 86°54′36.06″)体质量为(158.92±24.10) g的黑斑原肌肉脂肪酸和无机盐组成成分。试验结果显示,黑斑原肌肉(鲜样)中含有16种脂肪酸,其中总饱和脂肪酸8种,总量为1015.7 mg/kg,单不饱和脂肪酸2种,总量为494.4 mg/kg,多不饱和脂肪酸6种,总量为1148.3 mg/kg,必需脂肪酸含量为108.37 mg/kg,二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸含量为960.08 mg/kg。黑斑原肌肉的致动脉粥样硬化指数和血栓形成指数分别为0.40和1.18。黑斑原肌肉中共检出无机盐元素19种,其中K含量最高,为4061.23 mg/kg,V含量最低,为0.01 mg/kg,其中Ca∶P为1∶164,Na∶K为0.33∶1。对黑斑原肌肉中部分无机盐元素进行了风险评估,Zn元素风险指数最大,最大风险指数为16.13%~39.53%,Se元素的风险指数最小,最大风险指数为0.02%~0.03%,所评估的几种无机盐元素风险指数均在安全范围之内。综上,黑斑原肌肉中多不饱和脂肪酸含量丰富,无机盐元素含量丰富,具有较高的食用和保健价值。     

西藏黑斑原鮡胚胎发育观察

黑斑原鮡(Glyptosternum maculatum)是中国唯一的原鮡属鱼类,仅分布在中国境内的西藏雅鲁藏布江水系。由于过度捕捞、水利工程影响、外来鱼类入侵等原因,其野生种群数量持续下降,分布范围逐年缩小,目前处于极危状态。本研究中黑斑原鮡亲鱼捕自西藏日喀则市谢通门县、拉孜县、昂仁县、萨嘎县4个地区的雅鲁藏布江江段,采样地海拔分布范围介于3900～4500 m。2015年5月中旬至6月中旬,人工催产雌鱼79尾,自然排卵7尾,解剖雄鱼15尾进行授精,得到了黑斑原鮡受精卵约42208粒。受精卵为圆形的沉性卵,略显淡黄色,黏性较强。将受精卵平铺放在特制筛网上,置于微流水的平列槽内进行孵化。观察从受精卵至仔鱼孵化出膜的胚胎发育过程,统计有效积温。结果显示:黑斑原鮡胚胎发育时序符合硬骨鱼类胚胎发育的一般规律,分为8个阶段,即受精卵、胚盘形成、卵裂、囊胚、原肠、神经胚、早期器官形成及孵出阶段。胚孔封闭前就形成了肌节和眼囊,进入早期器官形成阶段后依次出现了耳囊、心脏原基、消化道、耳石、眼睛体、胸鳍原基等,心脏搏动后红细胞也有出现。整个胚胎发育期间的平均温度约为13.8℃,有效积温为2963.2～3132.4 h.℃,孵化率约为70%。本研究还发现黑斑原鮡胚胎具有双层卵膜的特殊结构,该结构在成熟卵吸水膨胀后形成,进入神经胚期完全消失,分析推测这种结构可能与对环境的适应有关,外层卵膜在卵的传播和孵化过程中可以起到黏附固定和缓冲保护的作用。本研究旨在深入了解黑斑原鮡胚胎发育的特点及规律,为黑斑原鮡资源恢复及科学保护提供理论参考。     

Infectivity of Hepatozoon americanum cystozoites for a dog

Hepatozoon americanum cystozoites from experimentally infected, laboratory-raised rodents were fed to a Hepatozoon-free dog. Gamonts were detected by examination of blood smear 42 and 56 days post-exposure. PCR analysis of blood was positive for the 18S rRNA Hepatozoon gene on days gamonts were demonstrated. Meronts were detected histologically in a skeletal muscle biopsy 90 days after ingestion of cystozoites. Sequencing confirmed that the parasite in the dog was H. americanum. Xenodiagnosis was conducted by replete feeding of Ambylomma maculatum larvae on the dog; 40 days after detachment, sporulated oocysts were recovered from recently molted nymphs.     

Digestive enzymes along digestive tract of a carnivorous fish Glyptosternum maculatum (Sisoridae,Siluriformes)

This study attempted to determine the presence, distribution and levels of digestive proteases, pepsin, amylase and lipase in the homogenates of digestive tract of a freshwater, cold‐adapted, carnivorous teleost of Tibet, Glyptosternum maculatum (n = 10, mean weight: 129.6 ± 28.9 g, mean length: 195.1 ± 16.6 mm, approximately 6 years old), at different temperatures and pH levels. The descending order of protease activity was as follows: stomach (pepsin, 16.16 ± 0.96 U/mg protein), anterior intestine (3.18 ± 0.25 U/mg protein), posterior intestine (1.76 ± 0.21 U/mg protein) and middle intestine (1.52 ± 0.23 U/mg protein). Amylase activity levels in descending order were as follows: anterior intestine (0.0062 ± 0.0007 U/mg protein), stomach (0.0032 ± 0.0009 U/mg protein), middle intestine (0.0023 ± 0.0005 U/mg protein) and posterior intestine (0.0023 ± 0.0004 U/mg protein). The highest lipase activity was found in the anterior intestine (0.83 ± 0.25 U/mg protein), followed by posterior intestine (0.51 ± 0.19 U/mg protein), middle intestine (0.48 ± 0.09 U/mg protein) and stomach (0.39 ± 0.10 U/mg protein). The optimal temperature and pH level for protease were 50 °C and 9.0–10.0, respectively, along the intestine. The pepsin optima in the stomach were 30 °C and 2.0 respectively. The optimal temperature for amylase was found to be 30 °C along the digestive tract and the optimal pH was 7.0 in the intestine and 6.0 in the stomach. The optimal temperature and pH levels of lipase were 30 °C, pH 6.0 for the stomach and 40–50 °C, pH 8.0 for the intestine, respectively. Hepato‐somatic index was 1.35 ± 0.2% and relative intestine length was 0.90 ± 0.19. The weight ratio of the stomach and intestine to body weight was 1.63 ± 0.43% and 1.57 ± 0.24% respectively.     

贵州杜鹃属一新种和新变种

报道了贵州百里杜鹃自然保护区杜鹃属植物一新种小白杜鹃Rhododendron maculatum Xiang Chen Jiayong Huang和马缨杜鹃一新变种微毛马缨杜鹃Rhododendron delavayi var.puberulum Xiang Chen Xun Chen。小白杜鹃R.maculatum与疣梗杜鹃R.verruciferum较为相似,但区别于前者的幼枝和叶柄幼时被腺体,叶较大而背面无毛,花序轴较长且疏被腺体,花梗仅密被腺体而无疣点,花冠白色,较大,通常宽钟形,具紫红色大斑块,花丝、子房和花柱均较长。微毛马缨杜鹃R.delavayi var.puberulum与原变种马缨杜鹃R.delavayi var.delavayi的区别在于叶狭长,背面毛被稍薄而紧贴,花冠管内外、花丝和花柱均被微柔毛。目前,该新种和新变种仅发现3个种群含数株,资源量十分稀少,依据IUCN红色名录标准均属于极危物种(CR),需要加以重点保护。     

西藏黑斑原鮡的人工繁殖初报

为了解决黑斑原鮡的人工繁殖技术,该文以雅鲁藏布江特有的黑斑原鮡为研究对象,选取86尾体重在0.065～0.25 kg的雌鱼,15尾平均体重在0.30 kg的雄鱼,雌鱼采用胸鳍注射的方式注射催产药物.结果显示,雌鱼人工授精尾数为59尾,受精卵总重量为897.5 g,总卵量为57 440粒,平均怀卵量为1 194粒,怀卵量与体重呈显著相关.平均催产率为69％,平均受精率为73.5％,黑斑原鮡受精卵孵化水温为13～14℃,溶氧量6.0～7.2 mg/L,胚胎发育所需积温范围为2 592～2 916℃·h.这一套全人工繁殖技术的成功,对黑斑原鮡的人工养殖具有重要的意义.     

黑斑原鮡AFLP分析体系的建立

建立黑斑原鮡（Glyptosternum maculatum）AFLP反应体系,对DNA提取、双酶切、连接、预扩增、选择性扩增和银染效果进行了探索。结果表明,40μLTaqI酶切体系中65℃先酶切2h,EcoRI酶切和连接同时进行,EcoRI酶和T4DNA连接酶的用量均以2U为宜,温度与时间分别为37℃和3h,连接产物稀释10倍作为预扩增的模板。利用这种优化的反应体系,5对选择性扩增引物组合表现出较高的稳定性、清晰度和多态性,它们分别是：E-AAC/T-AAT、E-AAC/T-AAG、E-AAG/T-AC     

黑斑原(鱼兆)脑颅骨骼形态学的研究

采用改进的透明骨骼法,研究了黑斑原(鱼兆)(Glyptosternum maculatum)的脑颅骨骼。其脑颅骨骼由28块膜骨、软骨化骨以及复性骨组成,眼区系列骨骼退化,缺少围框骨系,仅有额骨、副蝶骨、翼蝶骨,同时部分脑颅骨骼发生特化,如出现了颌须骨、基垫骨,这些骨骼在其他鱼类中未有报道。这些退化和特化现象与黑斑原(鱼兆)的生境有着密切的关系。黑斑原(鱼兆)的脑颅骨骼具有大多数底栖鱼类脑颅共有的结构:前囱和后囱。黑斑原(鱼兆)脑颅各骨骼与鱼脑接触面或为隆嵴,或为陷窝,从而最大程度地保护了鱼脑免受外界的冲击和震荡。一些骨骼存在大小不一,位置相对固定的孔眼,为出入大脑的血管及神经的通道。     

西藏黑斑原(鱼兆)两个野生群体的形态差异

黑斑原（鱼兆）（Glyptosternum maculatum）是中国唯一的原（鱼兆）属鱼类,在中国仅分布于西藏雅鲁藏布江。为了解黑斑原（鱼兆）两个野生群体间是否存在形态差异及差异分化的程度,对雅鲁藏布江支流尼洋河及干流日喀则拉孜江段的样本进行了形态学测量,共测量了10项常规可量性状和19项框架结构性状。结果表明,独立样本T检验显示林芝群体与日喀则群体在外部形态特征上存在差异。主成分分析结果显示日喀则群体的形态特征多样性高于林芝群体,两江段的黑斑原（鱼兆）只根据形态特征难以完全分开;且形态差异呈现多元化现象,所测性状不足以概括两个群体间的形态差异。差异检测结果显示两个群体的表观形态差异未达到亚种的水平。环境差异及生存压力的不同可能是导致两个群体形态差异分化的主要原因,而之前群体间广泛的基因交流可能抑制了这种分化。