重氮化法合成全抗原的研究

[目的]制备氯霉素全抗原,探索氯霉素合成的方法,为动物免疫试验作准备。[方法]采用重氮化法合成氯霉素卵清蛋白全抗原,通过紫外法和红外光谱法测定合成的偶联效果。[结果]重氮化法可用于制备较高偶联率的氯霉素全抗原,用于免疫动物制备抗体。[结论]该研究为合成高效价的抗体奠定了基础。     

氯霉素对肉鸡免疫功能的影响

按饲料的0.06％、0.1％、0.15％的比例添加氯霉素、饲喂2～60日龄的肉鸡,虽然对鸡白痢、禽伤寒等疾病有明显的抑制作用,减少死亡率。但对体液、细胞免疫功能、免疫器官、骨髓和红、白血球生成等呈现明显的抑制和损害,本试验初步表明,长期内服氯霉素可引起鸡的慢性应激反应。在正常的饲养条件下,氯霉素对肉鸡的生长增重既没有促进作用,也无明显的抑制现象。根据血液氯霉素浓度的测定表明,防治鸡疾病,饲料添加0.06％的氯霉素是有效的、毒性相对较小的剂量,但也不应长期服用。     

用酶联免疫法测定虾蟹中残留的氯霉素

采用酶联免疫法测定了南美白对虾Penaeus vannamei和中华绒螯蟹Eriocheir sinensis中残留的氯霉素。比较了用不同方法处理样品对检测结果的影响,通过对检测范围、精密度、回收率等项目的测定,验证了该方法的可靠性。结果表明：氯霉素标准液为50～4050ng／L时,具有良好的线性关系;板问变异系数小于16．4％,样品测定的变异系数为9．4％～13．8％;用乙腈水溶液方法提取的回收率（84％～116％）比用乙酸乙酯提取的回收率（62％～92％）高。     

水产品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺多残留的同时测定—GC/MS法

采用气相色谱-质谱法建立基质加标标准曲线,对中国对虾、大菱鲆、鲫鱼、鳗鱼、蟹、甲鱼6种主要养殖水产品肌肉组织中氯霉素类药物:氯霉素(CAP)、甲砜霉素(TAP)、氟苯尼考(FF)及其代谢物氟苯尼考胺(FFA)的多残留同时进行检测。结果显示,CAP在2–200 ng/ml浓度范围内,线性关系良好;TAP、FF和FFA在5–200 ng/ml浓度范围内,线性关系良好,其相关系数均大于0.990。加标回收率在76.4%–94.3%之间,相对标准偏差在5.7%–13.9%之间。检出限:CAP为0.2μg/kg,TAP、FF和FFA均为1.0μg/kg。定量限:CAP为0.5μg/kg,TAP、FF和FFA均为3.0μg/kg。研究表明,该方法具有准确、高效、灵敏、特异性强的特点,可以满足水产品中CAP、TAP、FF和FFA多残留的同时检测的要求。     

氯霉素荧光纳米颗粒免疫层析法的建立

本研究将荧光纳米颗粒与氯霉素单克隆抗体共价偶联在一起,用该颗粒代替常用的金标颗粒标记氯霉素单克隆抗体,以竞争法作为反应模式来制备免疫层析试纸条。在紫外灯下观察免疫层析试纸条上经免疫反应而产生的质控线和检测线上的荧光信号,利用荧光强度来半定量检测动物源性食品中的氯霉素残留。所制备的检测氯霉素的免疫层析试纸条只与氯霉素有交叉反应,与非目标检测物之间没有交叉反应。该试纸条的肉眼检测灵敏性为0.5ng/mL,满足相关检测标准要求。通过比较检测线和质控线之间的亮度,能够对氯霉素进行半定量检测。本研究建立的用于氯霉素残留检测的免疫层析法,具有简便、快速、灵敏度高的特点,有广阔的应用前景。     

酸碱度对气相色谱-质谱联用法检测氯霉素提取的影响

为使检测结果更准确,研究了溶液酸碱度对氯霉素提取的影响。在9种不同pH值的水溶液中添加氯霉素标准品,乙酸乙酯提取后,用N,O-双（三甲基硅基）三氟乙酰胺（BSTFA）-三甲基氯硅烷（TMCS）进行硅烷化处理,用正己烷溶解后,使用气相色谱-质谱联用法（GC／MS）检测氯霉素衍生物。通过全扫描质谱图和NIST标准质谱图的对比,对氯霉素衍生物进行定性确定;通过测定特征离子m／z225的值对其定量;再将提取后的水溶液残液全部调至pH=5．5左右,重新检测以确认氯霉素在一些样品中未检出的原因。结果表明,强酸强碱中的氯霉素发生不可逆的分解,在提取氯霉素时应保持中性偏酸环境以达到最佳提取效果。     

马立克氏病毒1.8-kb mRNA对其上游双向启动子活性的影响

构建了针对1.8-kb mRNA基因簇潜在阅读框的RNA干扰质粒pP(1.8-kb-RNAi).将该质粒与包含其上游双向启动子的质粒pP(pp38)-CAT和pP(1.8-kb)-CAT共转染鸡胚成纤维细胞(CEF)和MDV rMd5感染的CEF(rMd5-CEF),48 h后,通过测定转染细胞裂解液中氟霉素乙酰转移酶(CAT)的活性确定1.8-kb mRNA被干扰后对双向启动子活性的影响.结果显示,利用pP(1.8-kb-RNAi)质粒干扰1.8-kb mRNA,可以使其上游双向启动子两个方向的活性均显著下降(P<0.01),其中1.8-kb mRNA方向下跌29.5%,pp38方向下跌25.0%.本研究结果证明了1.8-kb mRNA对其上游双向启动子活性有增强作用.     

Aflatoxin in maize,a multifaceted answer of Aspergillus flavus governed by weather,host-plant and competitor fungi

Aspergillus section Flavi is able to produce aflatoxins (AFs) in vitro down to 0.85 a_w with a potential maximum occurring between 0.95 and 0.99 a_w, while in the field AFs increased significantly with kernel humidity below 0.95 a_w. In order to clarify this apparent discrepancy, a 3-year field trial with artificial inoculation of maize ears with Aspergillus flavus strains was organised. The co-occurrence of Aspergillus section Flavi and Gibberella fujikuroi species complex (Gfsc) was observed. The incidence of A. flavus was significantly influenced by the year and negatively related to Gfsc incidence. In 2012, when the highest temperature and the lowest rain were registered, aflatoxin B₁ (AFB₁) content was the highest and a_w < 0.95 in kernels was measured early throughout the growing season. In 2013 and 2014, the temperature was lower and rain more abundant, and a_w decreased below 0.95 only close to harvest and AFB₁ contamination was limited. The possibility of describing/predicting reasonably well a_w dynamic based on temperature, (degree day) was confirmed. With a_w > 0.95, a positive correlation between AFB₁ production rate and a_w was found, but a negative correlation resulted with a_w < 0.95. Other factors than a_w play a role, but a_w = 0.95 should be considered as an indicator of suitable conditions for rapid aflatoxin accumulation.     

氯霉素人工免疫原的合成与鉴定

将氯霉素(CAP)进行化学修饰引入羧基活性基团,合成具有半抗原结构特征的氯霉素半琥珀酸酯(CAP-HS);采用混合酸酐(MA)法将CAP-HS与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成人工免疫原BSA-CAP-HS和包被原OVA-CAP-HS,用红外(IR)、紫外(UV)、凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定;用BSA-CAP-HS免疫BALB/C小鼠,间接ELISA测定多抗(pAb)效价,阻断ELISA鉴定其敏感性,交叉反应试验鉴定其特异性。结果表明,CAP-HS与BSA合成成功,其分子结合比为15.6∶1,获得了高价、敏感、特异的CAP pAb,为CAP残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。     

超高效液相色谱法-串联质谱法测定牛奶中的氯霉素残留

应用超高效液相色谱-串联质谱法建立了牛奶中的氯霉素的检测方法。样品经乙酸乙酯提取后,用正已烷除脂,经C18固相萃取小柱富集纯化后,以C18反相柱为分析柱,乙腈-0.5mmol/L乙酸铵溶液为流动相,采用电喷雾负电离源(ESI-),多反应监测模式(SRM),用内标法定量检测。该方法提高了检测灵敏性和分析结果的可靠性,能够适应大规模样品的分析要求。