Segregation and linkage analysis of DNA markers in microspore derived and F2 populations of oilseed rape (Brassica napus L.)

Summary The segregation of RFLP and RAPD markers was compared in two oilseed rape (Brassica napus L.) breeding populations from the cross Topas x R4, the latter being a low linolenic mutation line. A total progeny of 68 F₂ and 40 microspore derived plants were studied with 25 markers. The results indicated a significant excess of Topas alleles at five RAPD loci in the microspore derived population. This suggests that genomic regions which probably affect microspore culture ability do not have identical distribution in the two population types.     

利用游离小孢子培养育成早熟大白菜新品种‘豫新5号’

 ‘豫新5号’是采用游离小孢子培养双单倍体育种技术选育的一代杂种，该品种生育期60 d，单球质量23 kg，球形指数1.35，高抗病毒病、霜霉病和软腐病，净菜产量56.7 t·hm^-2，可兼作早熟、晚熟栽培。     

芥蓝游离小孢子培养初报

 以芥蓝的5个基因型为试材，对游离小孢子培养诱导胚状体发生及植株再生进行了初步探讨。结果表明：供体基因型对成功诱导胚状体发生至关重要；振荡培养明显有利于胚状体的发育；改良MS和B培养基对诱导植株再生没有差别。     

大白菜游离小孢子培养技术高效体系的研究

以大白菜吉红82、#534DH 群体及#438 群体为试材，研究了利用细胞破碎仪机械提取小孢子与人工挤压提取小孢子对大白菜游离小孢子活力及提取量的影响。结果表明：机械提取替代人工挤压可在短时间内同时提取多份样品，并可快速调整小孢子的培养浓度。收集40 个适期花蕾于5 mL 离心管内，3 000 r·min-1 破碎10 s，将提取的小孢子定容于25 mL NLN-13 培养基，可确保小孢子浓度在适宜培养范围内，并成功诱导胚胎发生。     

秋水仙碱处理油菜离体小孢子的染色体加倍效应

用秋水仙碱对52份甘蓝型油菜品系（种）和它们的杂种离体小孢子的单倍体二倍化技术进行了研究。从花药中分离出的单核晚期小孢子接种在含10－800mg/L秋水仙碱的NLN液体培养基中处理16－90h后转入无秋水仙碱的相同培养基诱导胚状体。结果表明，用10mg/L秋水仙碱处理小孢子48h，10份材料的双单倍体植株变幅为37.10%-90.12%，平均为65.44%。50mg/L处理48h的8份材料是48.72%-97.81%，平均88.86%。100－800mg/L处理16－48h的试验，多数加倍率在90％－100％之间。但该处理药用量大，费用高，而且对小孢子毒性大，胚状体再生率低。试验还表明，秋水仙碱处理小孢子诱导的二倍体植株所产生的花一般均能结籽，带有不孕花的嵌合植株极少。用秋水碱处理水孢子再生的植株的根或芽所产生的二倍体植株多是可孕和不孕花共生的嵌合植株，自交后产生的单株种子很少，难以达到遗传和育种所需的群体量。     

黄瓜游离小孢子培养诱导成胚和植株再生

 以10个不同基因型黄瓜为试材进行游离小孢子培养,通过对成胚条件的系统研究,从‘7447’和‘Poinsett97’中获得了子叶形胚和再生植株。研究结果表明：基因型和小孢子发育时期是限制黄瓜游离小孢子成胚的关键因子。不同品种间胚状体产量差异显著,每皿产胚1.5～33.4个。单核靠边期是进行黄瓜游离小孢子培养的最佳时期。低温预处理有利于胚状体的诱导,4 ℃预处理2～4 d为宜,以处理2 d时胚状体产量最高。外源激素在诱导胚状体时并非必需,但低浓度的外源激素（0.5 mg·L^-1 2,4－D、0.2 mg·L^-1 6－BA）更能促进小孢子成胚。NLN和B5两种基础培养基在诱导胚状体上无显著差异。子叶形胚易分化成苗,而其它类型的胚状体不能获得再生植株。     

细胞穿透肽介导的小黑麦小孢子遗传转化研究

本研究选用小黑麦小孢子作为供试材料,进行细胞穿透肽介导的植物单倍体细胞遗传转化可行性研究。提取单核靠边期的小黑麦小孢子进行悬浮培养,将细胞穿透肽与报告基因GFP的表达框复合物对小孢子进行转化。转化植株进行了PCR分子检测,并在荧光体视显微镜下观察外源GFP基因的表达情况。共获得21株候选转基因植株,其中染色体自然加倍植株为10株。T1代加倍植株的PCR检测结果显示,加倍的转基因株系中有3个株系的PCR检测结果呈阳性。通过荧光体视显微镜可在转基因植株的幼胚部位观测到GFP蛋白的荧光。以上结果表明外源GFP基因已经整合到小黑麦基因组上并且得到表达并稳定遗传。因此,由细胞穿透肽介导的植物单细胞转化是一种有效、可行的植物单细胞转基因方法。     

提高油菜游离小孢子胚诱导频率的研究

以11个甘蓝型油菜基因型为材料,采用NLN培养基进行游离小孢子培养,对如何提高可培养的基因型范围和产胚率进行了研究。结果表明,11个油菜基因型中有10个基因型可以诱导出胚,培养成功率达90.9%,表明采用NLN培养基进行游离小孢子培养油菜基因型范围比较宽,但各基因型间小孢子胚产量差别很大,每花蕾产胚量为0.08~3.53个,TR4和TR9两个基因型每花蕾产胚可达3.23,3.53个。以TR4和TR9两个基因型为试材,进一步改进培养基和培养方法,采用NLN培养基中添加激素和活性炭方法,可大大提高产胚率,产胚量分别达到7.11和10.05个/蕾;接种后,小孢子经33℃高温预处理可显著影响产胚量。子叶形小孢子胚在光下适当培养后转入B5 BA 0.2 mg/L NAA 0.02 mg/L继代培养基上,大多数胚能长成绿芽,B5 6-BA 0.2 mg/L 3%蔗糖 1%琼脂培养基有利于小孢子胚长成植株。     

不结球白菜游离小孢子培养成胚影响因素的研究

以17个不同基因型的不结球白菜为供试材料,对影响小孢子胚胎发生频率的若干因素进行了研究。结果表明:在秋冬季日光温室内,供试植株主花序第一朵花开后第7~14天取样,即初花期是最佳取样时期;不同基因型间小孢子胚胎发生能力差异很大,在接种的17个基因型中,有12个诱导出胚,诱导成功率71%;其中102号产胚量最高,达到32.78个/蕾;在已产胚材料中,产胚量最高的基因型是产胚量最低的基因型的546倍;较易抽薹型材料的产胚能力大于易抽薹型和不易抽薹型。以B5有机成分代替NLN有机成分,能够提高产胚量,尤其是对难成胚基因型的小孢子胚胎发生有较好的促进作用,甘露醇对小孢子分裂无促进作用。     

茄子游离小孢子培养获得愈伤组织的研究

应用游离小孢子培养技术,以茄子杂交种为试材,进行游离小孢子培养,旨在获得茄子愈伤组织。结果表明:单核靠边期小孢子是诱导愈伤组织发生的最佳时期;不同基因型之间小孢子愈伤组织诱导率差异显著;对花药进行变温预处理,其小孢子膨大率较对照高出6倍多;小孢子培养的适宜培养基为KM附加0.2 mg/L 2,4-D、0.5 mg/L ZT、1.0 mg/L NAA和7.5%的葡萄糖。