烟草不同组织总RNA的提取方法初探

【研究目的】寻找烟草各个组织总RNA最佳的提取方法。【方法】以烟草K326的根、茎、叶、蕾、花和种子为材料,分别采用试剂盒法、Trizol法和CTAB法提取烟草6个组织总RNA进行对比。【结果】烟草不同组织总RNA提取方法有所不同,试剂盒法和Trizol法只能提取出根、茎、叶、蕾和花的总RNA,而不能提取种子总RNA;CTAB法能提取出6个组织的RNA。3种方法提取的RNA质量好,均能满足RT-PCR以及后续实验的要求。【结论】试剂盒法较Trizol法和CTAB法简单、快捷,适合于烟草除种子以外其余组织总RNA快速提取,CTAB法适合烟草所有组织总RNA提取。     

玉米大斑病菌的RAPD分析Ⅰ.应用CTAB法提取玉米大斑病菌DNA

用采自河北、辽宁、黑龙江、山东、吉林等５省的１４个玉米大斑病菌菌株为试材进行液体培养，然后采用ＣＴＡＢ法从菌丝中提取ＤＮＡ，通过７５２型紫外光栅分光光度计检测，最后将所提取的ＤＮＡ在热循仪ＰＥ－４８００上进行随机引物多态性扩增。结果发现，所提取的ＤＮＡ的ＯＤ２６０／ＯＤ２８０比值介于１．７３０－１．８４７之间，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后得到了较清晰的扩增图谱，从而证明了采用的ＣＴＡ法是提取玉米大斑病菌ＤＮＡ并用于分子生物学研究的一种行之有效的玉米。     

RAPD技术在玉米品种纯度鉴定中的应用研究

本研究以10个玉米自交系和用它们配制的7个杂交种为试验材料,利用CTAB微量提取法从幼苗中提取DNA,进行RAPD扩增,以发现不同品种间的特征谱带。研究表明,以筛选出的扩增效果较好的OPX03为引物,对17个材料进行RAPD电泳图谱分析,品种间图谱差异明显,很容易区分。说明RAPD技术应用于玉米品种鉴定和纯度分析是切实可行的。     

不同提取缓冲液对三尖杉DNA 提取质量的影响

采用CTAB法研究不同提取缓冲液对三尖杉DNA 提取质量的影响。结果表明：提取三尖杉DNA的最佳缓冲液所含物质及浓度为100 mmol·L-1TrisHCl pH 8.0+0.14 mol·L-1NaCl+2%CTAB+20 mmol·L-1EDTA +2%β 巯基乙醇。采用改进的CTAB法提取了15个三尖杉优树样品的DNA,提取的DNA质量均较高,可以满足分子标记分析的要求。     

食用仙人掌肉质茎总DNA的提取

以食用仙人掌的幼嫩肉质茎和紫糯玉米的幼嫩叶片为试验材料,采用CTAB法提取DNA,用紫外分光光度计检测DNA的浓度和琼脂糖凝胶电泳检测DNA的质量。结果表明,采用CTAB法可以从食用仙人掌中提取到一定质量和浓度的DNA,但是在操作过程中利用Tris-饱和酚对其进行纯化处理是非常必要的。     

一种快速微量提取柑橘早期胚基因组DNA的方法

[目的]建立一种快速微量提取柑橘基因组DNA的方法。[方法]采用优化的CTAB微量提取法,以20.0、10.0、5.0、2.5 mg早期杂种胚为材料进行基因组DNA的提取,并对其DNA进行质量检测和SSR验证。[结果]该方法简单易行,所需材料少,提取的DNA纯度较高,OD260nm/OD280nm在1.800～2.000,可满足SSR等以PCR扩增为基础的试验需要。[结论]建立的方法可以用于快速微量提取柑橘基因组DNA。     

不同方法从绞股蓝种子中提取基因组DNA的研究

以绞股蓝种子为研究材料,采用改良的CTAB法、改良的SDS法和高盐低pH法对绞股蓝基因组DNA进行提取,对提取效果采用紫外分光光度计检测、琼脂糖凝胶电泳和RAPD进行综合比较分析。结果表明:3种提取方法所获得的DNA,其OD260/OD280多数都在1.80~2.00,琼脂糖凝胶电泳结果也显示DNA的质量很好,改良的SDS法提取效率显著好于改良的CTAB法和高盐低pH法;而且改良的SDS法提取的DNA的RAPD图谱条带最亮、最清晰。因此,从DNA产量、质量等方面综合考虑,改良的SDS法为绞股蓝种子DNA提取的有效方法。     

棉花不同组织DNA的不同提取方法比较

[目的]研究棉花不同组织DNA提取的最佳方法。[方法]以棉花嫩叶、种子、黄化苗作为研究对象,比较CTAB法、SDS法、SDSCTAB法提取DNA的效果。[结果]若对DNA的量没有要求,棉花嫩叶、种子、黄化苗等组织均应选用SDS-CTAB法提取DNA。若对DNA的量有一定要求,如浓度需大于100 ng/μl,质量大于20 000 ng的情况下,针对不同试验材料推荐使用的提取方法是:棉花嫩叶用CTAB法,棉花种子SDS法,棉花黄化苗CTAB法。[结论]为快速高通量地检测转基因棉花基因漂移距离和频率提供参考。     

菠萝DNA的提取及AFLP反应体系的建立

为了应用AFLP分子标记对菠萝种资源进行种质鉴定、分类及亲缘关系等方面的研究,最重要的是要获得高质量的DNA,菠萝叶片革质化程度较高,且纤维、多糖、多酚等次生代谢物质含量较多,严重干扰DNA的抽提或影响其后的AFLP双酶切及其扩增反应,本研究以菠萝叶片为材料,利用改良CTAB法得到了39个高质量的菠萝分类群的DNA基因组,并进行了AFLP分析,得到了条带清晰、多态性好的菠萝品种指纹图谱,这为菠萝基因库的建立、优良品种选育以及亲缘关系的系列研究提供理论依据。     

棕榈藤基因组DNA提取及RAPD反应条件探索

棕榈藤(rattan)是棕榈科(Palmae Juss．)藤本植物，属棕榈科省藤亚科(Calamoideae)省藤族(Calameae)植物，包括13属600余种，主要分布于热带地区。棕榈藤是热带森林宝库中的多用途植物资源，具有很高的经济价值和开发前景，是仅次于木材和竹材的重要林产品，其中黄藤(Daemonorops margaritae(Hance)Seccari)和单叶省藤(Calamus simplicifolius Wei)是我国大面积栽培的2个重要藤种。